虎杖苷调节Akt/MDM2/p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的探讨虎杖苷(PD)调节蛋白激酶B/原癌基因MDM2/抑癌基因p53信号通路对胆囊癌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响。方法以人胆囊癌细胞株(GBC-SD)为研究对象,体外培养人胆囊癌细胞株(GBC-SD),使用浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞的增殖能力,确定最佳实验浓度。将GBC-SD细胞分为对照组(Control组)、虎杖苷低、中、高浓度组(PD-L组、PD-M组、PD-H组)、虎杖苷+Akt激活剂组(PD+SC79组),Transwell小室法评价细胞的迁移能力,Hoechst染色观察细胞的凋亡,流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡,Western blot检测Akt、MDM2、p53磷酸化水平,建立荷瘤小鼠模型评价虎杖苷对胆囊癌肿瘤生长的影响。结果浓度为10~160 mmol/L的虎杖苷处理细胞24 h,可显著抑制GBC-SD细胞的增殖活性,选择10、20、40 mmol/L的虎杖苷进行后续实验;与Control组比较,PD-L组、PD-M组、PD-H组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著降低,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05);与PD-H组比较,PD+SC79组GBC-SD细胞的迁移数、细胞凋亡率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、P-Akt、P-MDM2蛋白表达显著升高,G0/G1期细胞比例、P-p53蛋白表达显著降低(P<0.05);虎杖苷干预治疗后,小鼠移植瘤的生长速度显著降低(P<0.05)。结论虎杖苷可以通过调节Akt/MDM2/p53信号通路使细胞周期阻滞,抑制胆囊癌细胞增殖、迁移。

基于PI3K/Akt/p53信号通路探讨白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物诱导急性髓系白血病细胞凋亡的作用

目的通过评估白花蛇舌草乙酸乙酯萃取物(EAEHDW)对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/p53信号通路传导调节作用,探讨其抑制急性髓系白血病M2型(AML-M2)细胞株Kasumi-1增殖及诱导凋亡的机制。方法利用乙酸乙酯从白花蛇舌草中萃取制备得到EAEHDW,高效液相色谱串联质谱装置检测样品纯度。设置空白组,将浓度分别为0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL、0.08 mg/mL、0.10 mg/mL的EAEHDW加入对数生长期的Kasumi-1细胞株,采用MTT法检测不同浓度EAEHDW作用不同时间后Kasumi-1细胞存活率,采用Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度EAEHDW作用24 h后Kasumi-1细胞凋亡情况,采用Western blot法检测不同浓度EAEHDW(0.02 mg/mL、0.04 mg/mL、0.06 mg/mL)作用24 h后Kasumi-1细胞中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)家族蛋白及PI3K/Akt/p53信号传导通路蛋白表达情况。结果不同浓度的EAEHDW干预后,细胞存活率较空白组明显降低,细胞凋亡率较空白组明显升高,且细胞存活率随着作用时间的延长和药物浓度的增加而下降越明显,细胞凋亡率随着药物浓度的增加而升高越明显,差异均有统计学意义(P均<0.05);不同浓度的EAEHDW作用于Kasumi-1细胞后,细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、细胞色素C(Cyto-C)、p53蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、鼠双微染色体2(MDM2)、磷酸化MDM2(p-MDM2)蛋白相对表达量均明显降低(P均<0.05)。结论EAEHDW可明显抑制髓系白血病Kasumi-1细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与影响Caspase家族蛋白表达和抑制PI3K/Akt/p53信号通路导致p53激活有关。

芍药苷调节丝氨酸/苏氨酸激酶/鼠双微基因2/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响实验研究

目的:探讨芍药苷(PAE)调节丝氨酸/苏氨酸激酶(AKT)/鼠双微基因2(MDM2)/p53信号通路对弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:以OCI-LY3细胞为研究对象,分别设置PAE低浓度组(15μmol/L PAE)、PAE中浓度组(30μmol/L PAE)、PAE高浓度组(60μmol/L PAE)、PAE高浓度+SC79(AKT激活剂)组(60μmol/L PAE+8μg/ml SC79),同时以未经处理的细胞为对照组。48 h后,分析细胞增殖、克隆形成能力及细胞周期和凋亡变化,检测AKT/MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:与对照组比较,PAE低浓度组、PAE中浓度组、PAE高浓度组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期增加,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期降低(均P<0.05)。与PAE高浓度组比较,PAE高浓度+SC79组细胞凋亡率、p53表达、G_(0)/G_(1)期降低,细胞克隆形成数和细胞增殖率,p-AKT/AKT和p-MDM2/MDM2表达水平,以及G_(2)/M、S期增加(均P<0.05)。结论:PAE通过抑制AKT/MDM2上调p53表达,抑制DLBCL细胞增殖、细胞周期进展,诱导其凋亡。

中药调控p53信号通路干预肺癌的作用机制研究进展

肺癌是最常见的恶性肿瘤,其发病机制复杂、恶性程度高,严重威胁了患者的生命健康。p53信号通路是影响肺癌进程的重要通路,被众多研究者视为肺癌靶向治疗的潜在靶点之一。近年来,已有较多研究深入探讨了中药调控p53信号通路干预肺癌的可行性。基于此,本文系统总结了中药调控p53信号通路干预肺癌的作用机制研究进展,发现清金得生片、调气消积汤、补肺通络解毒方、健脾补肾方及益气扶正解毒方等中药复方及制剂可通过激活p53信号通路,促进肺癌细胞自噬及凋亡,抑制肺癌细胞生长及转移,增强机体免疫功能,发挥抑癌作用;拟人参皂苷Rh2、柴胡皂苷D、重楼皂苷Ⅶ、石斛碱、槐定碱、藤黄酸、雷公藤甲素及雷公藤甲素丁二酸单酯YJ-4等中药单体可通过激活p53信号通路,促进肺癌细胞凋亡,抑制肺癌细胞增殖,调控肺癌细胞周期,发挥抑癌作用。

乳腺癌抑癌基因KRT17过表达通过活化p53信号通路促进癌细胞凋亡并阻滞细胞周期

目的:探讨乳腺癌中角蛋白17(keratin 17,KRT17)的表达、预后意义及其对癌细胞生长的影响与机制。方法:基于癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)收录的乳腺癌(breast cancer,BC)数据筛选差异表达基因和预后相关基因,取交集获得靶基因KRT17。分别利用UALCAN、人类蛋白质图谱(Human Protein Mapping,HPA)和TISCH2数据库分析各种癌症中KRT17 mRNA和蛋白水平的表达、BC组织芯片中KRT17的表达与定位以及肿瘤微环境中KRT17的表达,利用bc-GenExMiner v5.0数据库分析不同数据集中KRT17表达与预后的相关性。接下来,检测KRT17过表达对MDA-MB-231和MCF7细胞生长的影响,并用全基因组敲除和敲低文库筛选数据验证KRT17对BC细胞系生长的影响,裸鼠移植瘤实验验证KRT17对裸鼠异种移植瘤生长的调节作用。最后,利用流式细胞术检测过表达KRT17对细胞周期和凋亡的调控,GSEA富集分析KRT17功能,RT-qPCR和Western blotting揭示KRT17促癌生长的分子机制。结果:不同肿瘤中KRT17表达具有异质性;BC中KRT17mRNA和蛋白水平显著下调(P<0.001,P<0.001),KRT17蛋白主要定位于癌细胞的细胞质和细胞膜,且肿瘤微环境中各种细胞均表达KRT17;KRT17低表达是BC预后不良因素(均P<0.01),过表达KRT17可以显著抑制MDA-MB-231和MCF7细胞的生长(P<0.01,P<0.01),敲除或敲低KRT17可促进MDA-MB-231和MCF7等多种BC细胞系的生长,裸鼠异体移植瘤模型证实过表达KRT17可抑制肿瘤体积(P<0.001);过表达KRT17可显著促进细胞凋亡(P <0.001)并阻滞细胞周期G1期(P <0.01);分子实验结果显示p53信号通路部分介导了KRT17过表达对细胞凋亡和周期的调节作用。结论:KRT17在BC中低表达,不利于患者预后,过表达KRT17通过活化p53通路促进细胞凋亡并阻滞细胞周期,KRT17是一种潜在的抑癌基因。

巴伐奇宁调节Akt/MDM2/p53信号通路影响肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期

目的:探讨巴伐奇宁调节Akt/MDM2/p53信号通路影响肝癌细胞增殖、凋亡和细胞周期。方法:CCK-8检测巴伐奇宁对正常肝细胞和肝癌细胞的抑制作用;体外培养肝癌HepG2细胞,将HepG2细胞分为Control组,巴伐奇宁低剂量组(10μmol/L)、巴伐奇宁高剂量组(20μmol/L)、巴伐奇宁高剂量(20μmol/L)+SC79(8μg/mL)组;MTT和Edu实验检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测Bcl-2、Bax、p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2、p-p53/p53蛋白表达;建立肝癌肿瘤裸鼠模型,观察肿瘤生长情况,检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax、p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2、p-p53/p53蛋白表达。结果:巴伐奇宁对几种肝癌细胞均具有抑制作用,不影响正常肝细胞增殖;体外实验表明,与control组相比,巴伐奇宁低、高剂量组HepG2细胞OD_(490)(24 h、48 h)值、细胞增殖率、S期和G_(2)/M期细胞比例、Bcl-2、p-Akt/Akt和p-MDM2/MDM2蛋白显著降低,凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例、p-p53/p53和Bax蛋白显著升高(P<0.05);与巴伐奇宁高剂量组相比,巴伐奇宁高剂量+SC79组HepG2细胞OD_(490)(24 h、48 h)值和细胞增殖率、S期和G_(2)/M期细胞比例、Bcl-2、p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2蛋白表达显著升高,凋亡率、G_(0)/G_(1)期细胞比例、p-p53/p53、Bax蛋白表达显著降低(P<0.05);裸鼠移植瘤实验结果表明,与对照组相比,巴伐奇宁组和Hu7691组裸鼠肿瘤质量和肿瘤体积、Bcl-2、p-Akt/Akt、p-MDM2/MDM2蛋白表达显著降低,裸鼠肿瘤组织中p-p53/p53、Bax蛋白表达显著升高(P<0.05);与巴伐奇宁组相比,Hu7691组裸鼠各检测指标均无统计学差异(P>0.05)。结论:巴伐奇宁可能通过调节Akt/MDM2/p53信号通路来抑制肝癌细胞增殖,阻滞细胞周期,促进细胞凋亡。

滋肾固髓汤通过调控p38MAPK/p53信号通路诱导结直肠癌HCT-116细胞凋亡

目的:探讨滋肾固髓汤对结直肠癌HCT-116细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:制备滋肾固髓汤含药血清,首先采用不同体积分数滋肾固髓汤含药血清处理HCT-116细胞,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活性;再将HCT-116细胞分为空白组、滋肾固髓汤低、中、高剂量组、SB203580(p38MAPK抑制剂)组和高剂量滋肾固髓汤+SB203580组,分别加入相应药物进行干预后,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学变化;Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞的凋亡水平;Western blot检测细胞中p38MAPK、磷酸化(p)-p38MAPK(Thr180/Tyr182)、鼠双微染色体2(MDM2)、p53、Cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2等蛋白表达水平。结果:滋肾固髓汤可抑制HCT-116细胞增殖活性,并呈时间和浓度依赖性。不同浓度滋肾固髓汤处理可诱导HCT-116细胞呈现核聚集、皱缩或碎裂等凋亡形态变化,促进细胞凋亡,上调p-p38MAPK、p53、Bax和Cleaved caspase-3等蛋白表达水平,下调MDM2和Bcl-2蛋白表达水平。SB203580抑制滋肾固髓汤诱导HCT-116细胞凋亡及p38MAPK/p53信号通路活化的作用。结论:滋肾固髓汤通过激活p38MAPK/p53信号通路诱导人结直肠癌HCT-116细胞凋亡。

大豆苷元影响非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡:p53信号通路的作用

目的研究大豆苷元(daidzein,DD)对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响,并重点探讨p53信号通路在其中可能发挥的作用。方法CCK-8法和流式细胞术检测大豆异黄酮和DD对HELF和H1299细胞活力和凋亡的影响;基因芯片技术检测DD处理H1299细胞后基因的表达量变化,GSEA和差异分析筛选主要通路和关键基因;RT-qPCR和Western blot实验验证主要通路中关键基因(p53和CASP9)的mRNA和蛋白表达差异;p53抑制剂Pifithrin-α抑制p53的表达后,检测DD对p53 mRNA和蛋白表达水平的影响,并观察其对H1299细胞的增殖效应。结果大豆异黄酮和DD能促进肺正常细胞增殖和抑制其凋亡,且能抑制肺癌细胞增殖和促进其凋亡。p53信号通路在DD处理组中明显富集(NES=1.78,P=0.000),且发现处理组中p53和CASP9基因的表达出现明显上调。与对照组相比,DD处理的HELF和H1299细胞中CASP9和p53的mRNA表达均明显提高(P<0.05),HELF细胞中p53蛋白表达亦出现增加(P<0.05)。抑制p53表达后,DD可明显增加H1299和HELF细胞中p53的mRNA表达(P<0.05),亦可明显提高H1299细胞中p53蛋白的表达(P<0.05),并观察到DD可抑制肺癌细胞的增殖。结论DD能抑制肺癌H1299细胞的增殖并促进其凋亡,且其机制主要涉及p53信号通路。

PDGFRA调控p53信号通路介导卵巢癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及机制

为了探究血小板源性生长因子受体α(platelet derived growth factor receptorα,PDGFRA)调控卵巢癌细胞的增殖、凋亡和侵袭的作用以及具体机制,首先基于GEO数据库中相关基因芯片(GSE4122和GSE14407)分析验证PDGFRA在卵巢癌中存在的表达差异,再应用SangerBox在线分析PDGFRA与卵巢癌患者预后的关联性.构建PDGFRA过表达质粒,用MTT检测PDGFRA对OVCAR3细胞增殖的影响,用流式细胞术检测PDGFRA对OVCAR3细胞凋亡的影响,用Transwell检测PDGFRA对OVCAR3细胞侵袭能力的影响,用Western blot法检测p-p53、p53及p21蛋白的表达水平.结果发现:PDGFRA在卵巢癌中显著上调,与PDGFRA低表达患者相比,PDGFRA高表达患者的预后更差;与vector-NC相比,PAGFRA组细胞的增殖和侵袭显著提高,细胞凋亡及p-p53、p21蛋白的表达水平均显著下降.由此得出,PDGFRA通过介导p53信号通路调控影响OVCAR3细胞的增殖、凋亡和侵袭.

电针对佐剂性关节炎大鼠踝关节炎症的HIF-1α/MDM2/p53信号通路的影响

目的观察电针对佐剂性关节炎(Adjuvant arthritis,AA)大鼠踝关节的保护作用以及HIF-1α/MDM2/p53信号通路表达的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、假电针组、激动剂组、电针组、电针+拮抗剂组、拮抗剂组,每组10只。大鼠注射弗氏完全佐剂制备AA模型,电针组和电针+拮抗剂组大鼠予以电针干预;假电针组大鼠予以电刺激处理;电针+拮抗剂组和拮抗剂组大鼠注射诱导缺氧诱导因子1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)拮抗剂;激动剂组大鼠注射HIF-1α激动剂。采用关节炎指数评分评估AA大鼠的关节炎严重程度,苏木素-伊红(HE)法观察各组大鼠踝关节的关节炎症情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清HIF-1α表达,荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组大鼠滑膜组织HIF-1α、血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、细胞内鼠双微体2(Murine double minute 2,MDM2)、p53的mRNA和蛋白表达情况。结果与模型组比较,电针组、电针+拮抗剂组和拮抗剂组大鼠的关节炎指数评分、HE染色评分和血清HIF-1α表达显著降低(P<0.01),而假电针组、激动剂组大鼠的关节炎指数评分、HE染色评分和血清HIF-1α表达与模型组无显著差异(P>0.05)。RTPCR和Western blot结果显示,与模型组比较,电针组、电针+拮抗剂组和拮抗剂组大鼠的HIF-1α、VEGF、MDM2的mRNA和蛋白表达均显著降低,而p53的mRNA和蛋白表达显著提高(P<0.01)。假电针组、激动剂组大鼠的HIF-1α、VEGF、MDM2、p53的mRNA和蛋白表达无显著差异(P>0.05)。结论电针干预对AA大鼠的踝关节炎症有显著的保护作用,HIF-1α/MDM2/p53信号通路在其中起着关键的介导作用。

自噬相关基因5通过影响p53信号通路促进肝细胞癌发展

目的探讨自噬相关基因5(autophagy-related gene 5,ATG5)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)进展中的作用及其影响的下游信号通路。方法通过肿瘤基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库查找ATG5在HCC患者的组织表达及其亚组的差异分析。采用免疫印迹法明确ATG5在HCC细胞系中的表达水平。通过CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验观察敲减ATG5基因后对HCC细胞系(HCCLM3和MHCC97-H)增殖、迁移和侵袭功能的变化。在HCC细胞系MHCC97-H敲减ATG5基因后,使用有参转录组测序分析下游相关信号通路的变化。结果TCGA数据库分析显示,在m RNA水平,ATG5在HCC组织的表达明显高于正常肝组织(P<0.0001),HCC 3期患者的ATG5水平高于1期患者的水平(P=0.013),p53变异组患者癌组织的ATG5水平高于非变异组(P<0.0001)。免疫印迹结果显示,与正常肝细胞L02相比,ATG5蛋白水平在检测的HCC细胞株中均明显高表达。将ATG5基因敲减后发现,HCC细胞的增殖、迁移、侵袭的能力下降,有参测序发现其明显影响p53信号通路的基因表达,富集分析发现与细胞周期有关,同时影响了自噬相关基因的差异表达。结论ATG5下调可抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭,同时可通过影响p53信号通路促进HCC发展。

柠檬醛通过MDM2/p53信号通路对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨柠檬醛(citral)对小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞的作用和机制。方法:采用不同质量浓度(0~120 mg/L)的柠檬醛处理38B9细胞,通过CCK-8法检测细胞活力,并计算柠檬醛的半数抑制浓度(IC_(50))。根据IC_(50)值设置低、中、高三个浓度(5、10、20 mg/L)处理38B9细胞,并检测柠檬醛对38B9细胞增殖的影响。采用瑞氏-吉姆萨染色观察38B9细胞形态变化。通过流式细胞术检测38B9细胞凋亡及细胞周期。利用RT-qPCR和Western blot检测38B9细胞凋亡及细胞周期相关因子的mRNA和蛋白表达水平,小鼠抑瘤实验观察柠檬醛对38B9细胞生长的作用。通过PubChem在线预测柠檬醛可能的靶点,并绘制蛋白质互作网络图。使用ClusterProfile对结果进行GO富集分析并使用ggplot2绘制可视化柱状图。利用Western blot检测38B9细胞MDM2/p53信号通路相关蛋白的表达水平。结果:柠檬醛能有效抑制小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞的活力,诱导其凋亡并阻滞其细胞周期,促进Puma、Noxa、Bax和p21的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制Bcl-2和CDK2的mRNA和蛋白表达(P<0.05或P<0.01),抑制MDM2的蛋白表达(P<0.05),促进p53的蛋白表达(P<0.05)。结论:柠檬醛能够显著抑制小鼠B细胞淋巴瘤38B9细胞的增殖,同时诱导细胞凋亡并引起细胞周期阻滞,其机制可能与MDM2/p53信号通路有关。

基于p53信号通路探讨木香烃内酯对H9C2心肌细胞过氧化损伤的保护作用

目的:研究木香烃内酯对于心肌细胞氧化损伤的保护作用及其与凋亡相关通路的相关性。方法:培养H9C2心肌细胞,分3组,分别为:正常组(Control)、氧化损伤组(Oxidative Damage Group, ODG)、木香烃内酯组(Costunolide);其中氧化损伤组H9C2心肌细胞通过双氧水构建氧化损伤模型,木香烃内酯组在氧化损伤组的基础上使用木香烃内酯预处理;通过CCK8实验测定各组细胞活力值,流式细胞仪检测各组细胞培养基上清液氧化应激及抗氧化应激指标的表达,Western blot检测各组p53通路蛋白的表达。结果:与Control组相比,ODG组与Costunolide组细胞活力值均明显下降(均P<0.05),ROS、MDA表达量均明显上升(均P<0.05),SOD、GSH表达量均明显下降(均P<0.05);与ODG组相比,Costunolide预处理后,细胞活力值明显提升(P<0.05),ROS、MDA表达量均明显下降(均P<0.05),SOD、GSH表达量均明显上升(均P<0.05),Caspase-3、p53的表达量明显降低(均P<0.05),Bcl-2表达量明显上升(P<0.05)。结论:木香烃内酯预处理可有效发挥对双氧水致心肌细胞氧化损伤的保护作用,其机制可能与p53相关信号通路相关。

汉黄岑素通过调节P53信号通路增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性

目的:探究汉黄岑素增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性的作用机制。方法:体外培养CC细胞株,建立顺铂敏感性的CC细胞株CaSki/DDP并检测CaSki和CaSki/DDP的IC50值,分为:空白对照组(Control)、贝伐单抗组(BVZ 2.5μg/ml)、顺铂组(DDP 10 mg/L)、低剂量汉黄岑素组(DDP 10 mg/L+WG 5μmol/L)、中剂量汉黄岑素组(DDP10 mg/L+WG 10μmol/L)、高剂量汉黄岑素组(DDP 10 mg/L+WG 20μmol/L)、P53抑制剂组(DDP+PFT-α)和汉黄岑素+P53抑制剂组(DDP+WG 20μmol/L+PFT-α)。使用CCK8检测细胞生长;使用蛋白质印迹法检测Ki67、PCNA Bcl-2、Bax、cytC、Caspase3、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1、P62的表达水平;流式细胞术分析检测细胞凋亡;使用免疫荧光检测自噬LC3核转位;使用蛋白印迹法检测P53水平;使用P53抑制剂Pifithrin-α处理后,使用蛋白印迹法、CCK8、流式和免疫荧光检测P53水平和细胞生长、凋亡、自噬情况。结果:宫颈癌细胞株CaSki/DDP的IC50值为50 mg/L;相比空白对照组,贝伐单抗组宫颈癌细胞Ki67、PCNA、Bcl-2、P62表达水平和细胞存活率显著降低(P<0.05),Bax、cytC、Caspase3表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值、细胞凋亡率、细胞内荧光强度显著升高(P<0.05);相比顺铂组,使用汉黄岑素处理各组宫颈癌细胞Ki67、PCNA、Bcl-2、P62表达水平、细胞存活率显著降低,Bax、cytC、Caspase3表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值、细胞凋亡率、细胞内荧光强度显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;相比P53抑制剂组,汉黄岑素+P53抑制剂组P53宫颈癌细胞凋亡率、单个细胞内LC3+荧光点数显著升高(P<0.05),宫颈癌细胞存活率显著降低(P<0.05)。结论:汉黄岑素可以通过调节P53信号通路增强宫颈癌细胞的自噬和凋亡,抑制其增殖,实现增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性,且在一定剂量范围内呈剂量依赖性。

针灸对溃疡性结肠炎大鼠维生素D受体及p53信号通路调节作用的研究

目的:维生素D(VD)缺乏与溃疡性结肠炎(UC)发病相关,针灸对UC有显著的疗效,起效机制尚未完全阐明,因此我们从维生素D受体(VDR)及与VDR相关的p53信号通路角度,观察针灸对UC大鼠调节的作用机制。方法:采用3%DSS制备UC大鼠模型。将大鼠随机分为正常组,模型组,电针组,隔药灸组和维生素D组。对双侧天枢穴采用电针或隔药灸干预1周,维生素D灌胃1周。分析大鼠结肠黏膜形态并评分,采用免疫组织化学法和QPCR检测结肠VDR蛋白和mRNA的表达,Western blotting检测结肠p53、PUMA和Caspase-3蛋白的水平。结果:与正常组比较,模型组组织病理学评分显著升高,经电针、隔药灸和VD干预后各组显著降低;与正常组比较,模型组VDR蛋白和mRNA表达显著降低,p53、PUMA和Caspase-3蛋白表达显著升高,与模型组比较,电针组、隔药灸组和维生素D组的VDR蛋白和mRNA表达显著升高,p53、PUMA和Caspase-3蛋白表达显著降低。结论:电针、隔药灸可以显著改善UC大鼠结肠黏膜炎性反应,该效应可能与针灸对VDR及下游p53信号通路的调节作用有关。

姜黄素通过PI3K/p53信号通路调控人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和周期

目的探讨姜黄素(Cur)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法采用不同浓度梯度Cur(0、10、20、40μmol/L)处理正常培养的SGC-7901细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测在不同时间点(24、48、72 h)细胞增殖能力变化;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况;流式细胞术检测细胞凋亡水平及周期变化;Western blot检测PI3K/p53信号通路相关蛋白表达变化。结果 MTT结果显示,与对照组比较,Cur呈浓度依赖性抑制SGC-7901细胞增殖;细胞荧光染色结果显示Cur处理组的细胞亮蓝色荧光强度减弱;流式细胞术结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur处理组细胞凋亡率增加(P<0.05,P<0.01),G0/G1期细胞出现阻滞(P<0.01);Western blot结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur组细胞PI3K蛋白表达量、Akt磷酸化水平均降低(P<0.01),而p21和p53蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01)。结论 Cur能抑制SGC-7901细胞的增殖效应,通过诱导细胞发生G0/G1期阻滞进而促进其凋亡进程,这可能与其对PI3K/p53信号通路的调控密切相关。

奥沙利铂通过p53信号通路抑制肝癌细胞增殖的机制研究

目的:研究奥沙利铂(L-OHP)对突变型肝癌细胞HuH-7、野生型肝癌细胞HepG2增殖与凋亡的影响,探讨p53信号通路相关蛋白在其中的作用。方法:MTT法检测L-OHP对HuH-7、HepG2细胞增殖的抑制效应;倒置显微镜观察L-OHP作用后2种细胞株形态的变化;流式细胞术检测L-OHP作用后细胞周期分布;Western blot法检测p53信号通路相关蛋白表达变化。结果:L-OHP能抑制HuH-7、HepG2细胞增殖,具有时间浓度依赖性(P<0.01);L-OHP作用后,可观察到细胞形态发生改变,细胞变圆、脱壁;L-OHP能够诱导HuH-7、HepG2细胞阻滞在细胞周期的S期,S期细胞的比例随L-OHP作用浓度增加而明显增加(P<0.01);L-OHP可激活p53信号通路,L-OHP改变2种细胞中p21、Bax、Bcl-2、p53、磷酸化p53(p-p53)蛋白表达(P<0.05),但对HuH-7细胞p-p53的表达无明显影响。结论:L-OHP可通过激活p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能与调控p53通路相关蛋白p53、p-p53、p21、Bax、Bcl-2的表达有关。

基因芯片筛选LNCaP与C4-2细胞中P53信号通路相关差异表达基因

目的运用基因芯片筛选雄激素依赖性前列腺癌细胞系LNCaP与雄激素非依赖性前列腺癌细胞系C4-2中p53信号通路相关差异表达基因,寻找去势抵抗性前列腺癌的可能发生机制。方法体外培养前列腺癌细胞系LNCaP和C4-2,TRIzol试剂提取两种细胞的总RNA并纯化,按Agilent芯片说明对总RNA进行杂交,所得荧光信号采用Aligent Scanner、Imagene和Genespring软件进行分析和显示。结果以LNCaP为对照,C4-2细胞中3组均表达差异的基因共417个,上调基因301个,下调基因116个。KEGG转录域覆盖率分析显示,差异表达基因中与p53信号通路相关的占9.3%;p53信号通路中表达差异的基因分别为ATR、p21、CDK4/6、Cyclin E、Gadd45、PIGs、CytC、IGFBP3、TSP1、p53R2、Sestrins和Cyclin G,其中p21、CDK4/6、Cyclin E的表达差异最显著。结论筛选出在LNCaP和C4-2细胞系p53信号通路中差异表达基因12个,其中p21、CDK4/6、Cyclin E可能参与了CRPC的发生发展,为进一步研究前列腺癌的进展机制奠定了基础。

环状RNA_0003028靶向微小RNA-498调控生殖器形成抑制基因-1/p53信号通路对人肝癌细胞系Huh7的影响

目的探讨环状RNA(circ)_0003028对人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及分子机制。方法人肝癌细胞系Huh7分为小干扰RNA(si)-NC组、si-circ_0003028组、微小RNA(miR)-NC组、miR-498模似物(mimics)组、si-circ_0003028+anti-miR-NC组、si-circ_0003028+anti-miR-498组;Real-time PCR检测肝癌组织及各组细胞中circ_0003028和miR-498表达水平;MTT检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭数;Western blotting检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ_0003028和miR-498的靶向调控关系。结果肝癌组织中circ_0003028表达水平升高(0.98±0.02 vs 1.36±0.01),miR-498表达水平降低(0.98±0.02 vs 0.63±0.02)(P<0.05)。抑制circ_0003028表达或miR-498过表达后,Huh7细胞中Ki-67(0.85±0.02 vs 0.41±0.02或0.95±0.11 vs 0.37±0.02)、基质金属蛋白酶(MMP)-2(0.71±0.02 vs 0.43±0.03或0.83±0.02 vs 0.41±0.03)、MMP-9(0.74±0.02 vs 0.37±0.02或0.78±0.02 vs 0.39±0.02)蛋白表达水平降低,细胞活性(1.53±0.03 vs 1.05±0.02或1.68±0.02 vs 1.11±0.02)降低;迁移(111.40±2.12 vs 77.22±2.38或108.90±2.30 vs 78.44±1.46)和侵袭(87.89±2.18 vs 49.78±1.98或80.22±1.79 vs 38.22±1.52)细胞数减少,生殖器形成抑制基因-1(SMG-1)(0.76±0.02 vs 1.39±0.02或0.79±0.02 vs 1.39±0.02)、p53(0.77±0.02 vs 1.24±0.03或0.82±0.03 vs 1.45±0.03)、p53-ser15(0.78±0.03 vs 1.50±0.02或0.82±0.02 vs 1.49±0.04)蛋白表达水平升高(P<0.05)。Circ_0003028靶向调控miR-498,沉默miR-498逆转了抑制circ_0003028表达对Huh7细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论抑制circ_0003028表达通过靶向miR-498影响SMG-1/p53信号通路而抑制人肝癌细胞增殖、迁移和侵袭。

P53信号通路的余维一分岔分析

细胞中的DNA受损后,肿瘤抑制蛋白p53表现出丰富的动力学,并在决定细胞命运中起到关键的作用.基于PDCD5调控p53-Mdm2振子模型,增加了ATM感应模块,并探讨了在不同PDCD5表达水平下,ATM二聚体转为单体的速率对p53动力学的影响.通过余维一分岔分析,可以看出在不同速率下,p53表现出丰富的动力学,包括单稳态、双稳态、三稳态、振荡以及振荡与单稳态共存.通过对p53动力学的研究,对理解DNA损伤后的细胞命运起到一定的指导作用.