p53凋亡刺激蛋白抑制因子表达水平与鼻咽癌临床病理学特征的关系

目的探讨p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)表达水平与鼻咽癌临床病理学特征的关系。方法采用免疫组化法检测iASPP在62例鼻咽癌患者鼻咽癌组织中的表达情况,比较不同临床病理特征者的iASPP表达情况。结果 62例患者中iASPP阳性表达者44例(71.0%),阴性表达者18例(29.0%)。不同性别、年龄、病理分型、T分期和临床分期患者的i ASPP阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P均>0.05),而不同N分期患者的iASPP阳性表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。N分期与iASPP阳性表达率呈正相关(r=0.368,P=0.003)。结论鼻咽癌患者的N分期与i ASPP阳性表达有关,iASPP的表达水平有可能成为鼻咽癌预后的预测指标。

p53凋亡刺激蛋白抑制因子的研究进展

p53凋亡刺激蛋白抑制因子(inhibitory member of the ASPP family,iASPP),属于ASPP蛋白家族的一员,人类的iASPP由PPP1R13L基因编码合成。iASPP与同一家族的ASPP1、ASPP2功能相反,能够特异性抑制野生型p53的诱导目的基因转录活化和促细胞凋亡功能,导致肿瘤的发生,在乳腺癌和急性白血病中高表达,因此被认为是一种新的癌蛋白,本文就近年来iASPP基因的研究进展简要综述。

沉默p53凋亡刺激蛋白抑制因子抑制结直肠癌细胞的增殖

目的探索p53凋亡刺激蛋白抑制因子(iASPP)在结直肠癌组织/细胞中的表达及iASPP沉默后对结直肠癌细胞增殖的影响。方法该研究首先检测临床样本结直肠癌组织和癌旁正常组织中iASPP mRNA的表达差异、结直肠癌细胞系和正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC)mRNA和蛋白质iASPP表达差异;然后在人结肠癌细胞SW480中转染iASPPsiRNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测iASPP mRNA表达效率,用免疫印迹试验(Western blot)检测iASPP的蛋白表达水平;最后用MTT法和Brd U法检测沉默iASPP对SW480细胞增殖的影响。结果结直肠癌组织中,iASPP mRNA表达相比癌旁正常组织上调;结直肠癌细胞LoVo、SW620和SW480中iASPP mRNA和蛋白质表达相比正常结肠上皮细胞系(HCoEpiC)均上调;在SW480细胞中转染iASPP-siRNA可下调iASPP的表达;沉默iASPP可抑制结直肠癌细胞的增殖。结论沉默iASPP基因抑制结直肠癌细胞的增殖。

p53凋亡刺激蛋白抑制因子在人类恶性肿瘤的研究进展

P53凋亡刺激蛋白（apoptosis stimulating protein of p53, ASPP）是卢欣教授的研究组在2001年发现的一个新的蛋白家族［1］。p53凋亡刺激蛋白抑制因子(in-hibitory member of the ASPP family, iASPP)是ASPP （apoptosis stimulating protein of p53）蛋白家族的一员，另外两个成员为ASPP1、ASPP2。这一家族蛋白的结构特点是在羧基端上都含有大量锚蛋白重复，SH3结构域和脯氨酸富集区［2］（图1）。

微小RNA-103a-3p通过肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1/P53对骨质疏松症的影响

目的探讨微小RNA(miR)-103a-3p调控细胞肿瘤蛋白53调控凋亡抑制剂1(TRIAP1)对成骨细胞分化以及去卵巢小鼠骨量的影响。方法MC3T3-E1细胞分为正常对照(NC)组、miR-103a-3p-NC组、miR-103a-3p模拟(mimc)组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1-NC组、miR-103a-3p mimic+TRIAP1 mimic组。Real-time PCR检测细胞miR-103a-3p、TRIAP1、P53的mRNA表达,MTT法和流式细胞术检测细胞增殖及凋亡,免疫荧光染色和茜红素染色检测细胞骨架F-actin表达和矿化情况,ELISA检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性。24只雌性小鼠设为sham组、骨质疏松症(OP)组、miR-103a-3p antagonist-NC组和miR-103a-3p antagonist组,每组6只摘取双侧卵巢制备OP模型,sham组仅分离卵巢组织周围脂肪。测定骨组织miR-103a-3p、TRIAP1、P53、ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达,microCT测定骨密度(BMD)、骨矿物质含量(BMC),HE染色观察骨组织病理改变。结果细胞转染miR-103a-3p mimic后,miR-103a-3p及P53表达升高、TRIAP1表达降低,细胞增殖降低、凋亡增加,F-actin表达减弱,钙结节数量减少,ALP活性降低(P<0.01);而在增加转染TRIAP1 mimic后,以上miR-103a-3p mimics导致的结果均得到显著逆转(P<0.01)。OP组小鼠骨组织miR-103a-3p、P53表达升高,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达降低,BMD、BMC降低,骨组织结构破坏(P<0.05);miR-103a-3p antagonist组小鼠骨组织miR-103a-3p及P53表达降低,TRIAP1、ALP、OCN、OPN基因表达升高,BMD、BMC升高,骨组织结构改善(P<0.05)。结论MiR-103a-3p可介导TRIAP1/P53抑制成骨细胞增殖及矿化,而miR-103a-3p拮抗治疗可减少OP小鼠骨量丢失。

肝细胞癌组织p53凋亡刺激蛋白2表达及临床意义

目的探讨肝细胞癌组织p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)表达及临床意义。方法选取2016年6月至2019年6月在首都医科大学附属北京同仁医院接受手术切除治疗的80例肝细胞癌患者为研究对象,收集所有患者的肝细胞癌组织及癌旁正常组织,比较两种组织ASPP2表达水平;分析肝细胞癌组织ASPP2蛋白表达与临床病理特征、预后以及与X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)、p53蛋白表达的关系。结果肝细胞癌组织ASPP2 mRNA表达水平、蛋白高表达率和蛋白表达评分均明显低于癌旁正常组织(均P<0.05)。肝细胞癌组织ASPP2蛋白表达与病理分期、临床分期、脉管浸润等有关(均P<0.05),与性别、年龄、HBV感染、肝硬化、甲胎蛋白水平、肿瘤数量、包膜侵犯等均无关(均P>0.05)。ASPP2蛋白高表达患者累积无病生存率和累积5年总生存率均明显高于ASPP2蛋白低表达患者(均P<0.05)。ASPP2蛋白高表达的肝细胞癌组织XIAP蛋白表达水平明显低于ASPP2蛋白低表达的肝细胞癌组织,而p53蛋白表达水平明显高于ASPP2蛋白低表达的肝细胞癌组织,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论肝细胞癌组织ASPP2低表达与病理进展、预后不良有关,其作用机制可能与调控XIAP、p53有关。

人完整p53凋亡刺激蛋白家族抑制成员多克隆抗体的制备及鉴定

目的:p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族可调节p53抑癌功能,其抑制成员(iASPP)具有特异性抑制p53诱导细胞凋亡的能力。为了对iASPP进行系统研究,文中报道制备完整的iASPP分子多克隆抗体的方法。方法:在完整iASPP独有的N端选择3个免疫原肽段,制备了3个多克隆抗体。用ELISA检测抗体效价,Western blot比较3个抗体检测内源性抗原的效果,并用体外转录翻译系统制备的完整iASPP蛋白作为对照标准。结果:1号抗体效价>1∶32000,2号和3号抗体效价>1∶16000。Western blot确定100000为完整iASPP蛋白的条带位置。结论:成功地制备了iASPP的多克隆抗体,为深入研究完整iASPP提供了有用的工具。

白血病抑制因子对K562细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的探讨白血病抑制因子(LIF)体外对K562细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法取对数生长期K562细胞接种于96孔板中,随机分为对照组和观察1～3组,分别加入质量浓度为0、5、10、40μg/L的重组人LIF,继续培养61、2、24、48 h;应用MTT法、Hoechst染色法观察各组K562细胞增殖活性、凋亡率,采用免疫组化法检测观察3组和对照组p53蛋白表达情况。结果观察1～3组不同时间细胞增殖活性均显著低于对照组,且观察1组>观察2组>观察3组、6 h>12 h>24 h>48 h(P均<0.05);观察1～3组不同时间细胞凋亡率均显著高于对照组,且观察1组<观察2组<观察3组、6 h<12 h<24 h<48 h(P均<0.05);观察3组各时间点p53蛋白阳性表达率均明显高于对照组,且6 h<12 h<24 h<48 h(P均<0.05)。结论 LIF能以浓度—时间依赖性抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,机制可能为上调p53蛋白表达。

p53凋亡刺激蛋白2通过稳定β-catenin-E-cadherin复合体抑制骨肉细胞转移

目的探讨p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)对骨肉瘤细胞转移的影响及其机制。方法 Q-PCR检测骨肉瘤组织和细胞中ASPP2 mRNA的表达;western blot检测骨肉瘤细胞中ASPP2蛋白表达;transwell检测细胞转移能力;co-IP实验检测β-catenin和E-cadherin相互作用水平;免疫荧光检测β-catenin在细胞核中表达水平。结果 8例手术标本Q-PCR检测发现,骨肉瘤组织中ASPP2 mRNA的表达较癌旁组织明显降低;4株骨肉瘤细胞系中(OS187、SAOS2、HOS和MG63)ASPP2 mRNA和蛋白的表达较正常成骨细胞明显减少。过表达ASPP2蛋白的SAOS2其转移能力明显减弱,同时β-catenin和E-cadherin相互作用水平增加,而β-catenin核转位减少。结论 ASPP2可以减少骨肉瘤细胞SAOS2的转移,其机制可能的通过稳定β-catenin-E-cadherin复合体,抑制β-catenin核转位。

p53凋亡刺激蛋白2在HepG2.215细胞中通过抑制自噬来发挥抗乙型肝炎病毒的作用

目的研究p53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2 of p53,ASPP2)对乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBs Ag)和乙型肝炎E抗原(hepatitis Be antigen,HBe Ag)表达的影响。方法 HepG2. 215细胞用3-甲基腺嘌呤处理来抑制自噬,或用人ASPP2重组腺病毒感染来诱导ASPP2过表达,或转染GFP-LC3质粒后观察绿色LC3-Ⅱ颗粒(自噬标志物)的变化。酶联免疫吸附测定检测培养上清和胞内HBs Ag和HBe Ag的水平、免疫荧光检测LC3-Ⅱ颗粒的水平、免疫印记检测自噬相关蛋白的水平、免疫沉淀检测ASPP2与自噬相关蛋白的结合。结果 ASPP2过表达明显下调了绿色LC3-Ⅱ颗粒的水平和LC3-Ⅱ/Ⅰ比例、以及明显上调p62的水平,说明ASPP2过表达可抑制HepG2. 215细胞的自噬。但是ASPP2并非通过抑制Atg5、Atg14和Beclin-1等自噬相关基因的表达来抑制自噬,而是通过与Atg14结合来抑制Atg14与Beclin-1的结合,阻断自噬体膜的形成,从而抑制自噬。抑制自噬和ASPP2过表达均导致培养上清和细胞内的HBs Ag和HBe Ag水平明显下调,表明在Hep2. 215中,ASPP2通过抑制自噬来抑制HBs Ag和HBe Ag的产生。结论ASPP2通过抑制自噬的作用具有抗乙型肝炎病毒感染的潜力。

p53凋亡刺激蛋白2抑制奥沙利铂诱导的结肠癌细胞自噬并促进凋亡

目的研究p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)p53依赖以及非依赖的自噬抑制作用,在提高奥沙利铂(OXA)促细胞凋亡中的作用。方法 HCT116(p53-/-)细胞分为雷帕霉素(rapamycin)联合ASPP2组、ASPP2组、p53组、ASPP2联合p53组、3-甲基嘌呤(3-MA)组、对照组(OXA或单独饥饿处理)6组。凋亡检测时添加单独空病毒(GFP-Ad)组、rapamycin组作为对照。各组细胞转染绿色荧光蛋白微管相关蛋白1轻链3(GFP-LC3)质粒,在荧光显微镜下观察并计数LC3阳性细胞数;Western blot法检测各组自噬相关分子表达水平;annexinⅤ-FITC/PI双染色结合流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果 3-MA处理组与ASPP2处理组具有相同的自噬抑制作用,且能够促进OXA或饥诱导的细胞凋亡,但促凋亡作用低于ASPP2组;rapamycin联合ASPP2处理能够有效抵消ASPP2的自噬抑制作用,但仍具有促进OXA或饥饿诱导的细胞凋亡,且促凋亡作用同样低于ASPP2组。结论OXA增强结肠癌细胞自噬,而ASPP2过表达能够抑制OXA的自噬诱导作用;ASPP2能够通过P53依赖以及P53非依赖途径促进细胞凋亡;ASPP2通过p53依赖以及p53非依赖途径所引起的促细胞凋亡并非完全通过抑制自噬来实现。

p53凋亡刺激蛋白基因5′端非编码区CpG岛高甲基化与其mRNA表达的改变

目的了解ASPP1和ASPP2基因5′端非编码区CpG岛在野生型p53肿瘤细胞中的甲基化状况及其与mRNA异常表达的关系。方法用RT-PCR方法测定mRNA表达,甲基化特异的PCR方法测定DNA甲基化。结果肿瘤细胞中ASPP1和ASPP2mRNA表达减少,同时ASPP基因的5′端非编码区出现异常高甲基化。结论ASPP基因的异常高甲基化可能是引起ASPP mRNA表达降低的影响因素之一。

凋亡相关因子聚集蛋白、P53及Bax在大肠腺癌中的表达及相关性研究

目的探讨大肠腺癌进展过程中凋亡相关因子聚集蛋白(Clusterin)、P53及Bax的表达情况与作用,并分析三者之间的相关性。方法利用免疫组织化学法检测Clusterin、P53及Bax蛋白的表达情况,分析其表达结果与临床病理间的关系。结果 Clusterin在大肠腺癌中的表达明显高于大肠正常黏膜,蛋白表达情况与性别及年龄无关,而与肿瘤组织分化程度、有无淋巴结转移、Dukes分期及浸润程度呈正相关。Clusterin与P53的表达呈正相关(r=0.63,P<0.01),与Bax的表达呈负相关(r=-0.58,P<0.01)。P53与Bax的表达呈负相关(r=-0.65,P<0.01)。结论 Clusterin及P53高表达与Bax的低表达在大肠腺癌的发生过程中起到重要作用。

P53凋亡刺激蛋白2在gp120诱导的神经细胞凋亡中的作用

目的研究P53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)在人类免疫缺陷病毒外膜糖蛋白(gp120)诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法体外培养小鼠大脑皮质神经细胞,给予gp120处理,免疫荧光技术检测P53和ASPP2在细胞内的表达与分布,蛋白印迹法检测活性caspase-3表达情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡。分析gp120对神经细胞内P53、ASPP2表达影响,微小RNA干扰技术反向验证ASPP2的作用。结果 gp120处理前,神经细胞内无P53表达,ASPP2表达在细胞浆中;gp120处理后,神经细胞出现P53表达并定位于细胞核,部分ASPP2由细胞浆移位到细胞核,与P53定位于同一部位。gp120处理前,caspase-3无活性,神经细胞凋亡率为5%,gp120处理后caspase-3被激活,神经细胞凋亡率为50%,微小RNA干扰ASPP2表达后,神经细胞凋亡率由50%降低到15%。结论 ASPP2参与了gp120诱导的经P53介导的神经细胞凋亡。

重组人白血病抑制因子体外诱导人巨核细胞白血病DAMI细胞株凋亡与P73蛋白表达

目的探讨重组人白血病抑制因子(rh-LIF)诱导人巨核细胞白血病DAMI细胞株凋亡和P73蛋白表达,探讨其作用机制。方法应用锥虫蓝拒染法、CCK-8法观察不同质量浓度(1～40μg/L)rh-LIF作用6、12、24、48h后对DAMI细胞株增殖及活力影响,用流式细胞仪测定早期凋亡指标Annexin V,免疫组织化学法检测用药前后P73蛋白表达变化。结果低质量浓度(1、2μg/L)rh-LIF对DAMI细胞增殖无明显抑制,诱导凋亡作用不明显,P73蛋白阳性表达低(P>0.05);当质量浓度>5μg/L时其作用随培养时间延长及药物质量浓度增加而增强(P<0.05)。结论低水平rh-LIF对DAMI细胞增殖无明显抑制,高水平rh-LIF抑制DAMI细胞增殖并诱导其凋亡,用药后P73蛋白阳性表达有明显增高。

X染色体相关凋亡抑制蛋白及P53在卵巢上皮肿瘤的表达及意义

p53基因是较早被认识的肿瘤抑制基因，是重要的细胞周期的调节及凋亡基因。p53基因的突变、缺失、失活广泛存在于各种肿瘤中。由于p53基因编码序列的改变，可导致野生型P53蛋白功能的丧失，突变型P53蛋白在细胞内蓄积．进而可导致细胞的恶性转化。

p53凋亡刺激蛋白2与肿瘤细胞的自噬和凋亡

p53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)是ASPP家族的一个重要成员,能够通过对细胞促凋亡靶基因转录的调节来促进细胞的凋亡。另外,ASPP2与自噬也具有一定的关系,它能通过提高p53通路介导的自噬来诱发肿瘤细胞凋亡增加,从而达到抑制和杀灭肿瘤的作用。在肝癌细胞中,ASPP2过表达可增强p53诱导的自噬调节蛋白(DRAM)介导的自噬对肝癌细胞的促凋亡作用。DRAM的发现使p53与自噬之间建立了联系,也进一步丰富了ASPP2的功能机制,这也为肿瘤的基因治疗提供了新的思路。

生长抑制因子1剪接变异体调控p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨生长抑制因子(ING1)调控p53信号通路诱导肝癌细胞凋亡的途径。方法通过脂质体转染的方法在体外培养的肝癌细胞株HepG2中过表达ING1基因3种剪接变异体,采用流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡率和细胞周期变化,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法检测ING1、p53及其下游信号基因bcl-2、bax、p21waf1、mdm2、p14arfmRNA和蛋白表达情况,荧光素酶双标报道基因检测下游p21waf1启动子活性,Western blot检测野生型p53蛋白半衰期变化,使用免疫共沉淀法(IP)观察ING1剪接体与mdm2、p14arf蛋白间的结合情况。结果 HepG2细胞转染过表达ING1不同剪接变异体,pcDNA3-ING1b[(24.36±0.97)%]和pcDNA3-ING1c[(27.33±1.12)%]组细胞凋亡率显著高于空载体组[(8.22%±0.86)%](P<0.01),而pcDNA3-ING1a组细胞凋亡率[(8.90±1.03)%]与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空载体组比较,pcDNA3-ING1b和pcDNA3-ING1c组均出现G0/G1期阻滞(P<0.05);而pcDNA3-ING1a组各细胞周期的比例与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR及Western blot法结果显示过表达ING1b或ING1c使HepG2细胞内源性bax、p21waf1、p14arfmRNA及蛋白表达量明显增高(P<0.01);内源性bcl-2、mdm2 mRNA及蛋白表达量明显降低(P<0.01);过表达ING1a的HepG2细胞bax、bcl-2、p21waf1、mdm2、p14arfmRNA及蛋白表达与空载体组比较差异无统计学意义(P>0.05)。ING1b和ING1c增强p21waf1启动子活性,延长野生型p53蛋白的半衰期,促进p53蛋白乙酰化,并且与p53反馈调节环路基因mdm2和p14arf结合,维持p53蛋白的稳定性和促进p53蛋白的活性。结论 ING1剪接变异体通过与p53负反馈调节基因mdm2竞争性结合p53蛋白,延长野生型p53蛋白半衰期,并促进p53蛋白乙酰化,增强p53蛋白下游基因bax、p21waf1、p14arf表达,抑制bcl-2、mdm2基因表达,促进肝癌细胞凋亡。

结肠癌组织中p53凋亡刺激蛋白家族表达水平及其与临床病理学特征的相关性研究

目的:探讨结肠癌组织中p53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族表达水平及其与临床病理学特征的相关性。方法:选取结肠癌患者的结肠癌组织共50例,以及健康人的正常结肠组织共30例。分析ASPP家族与结肠癌的组织分化程度、浸润深度和淋巴结转移等临床特征的相关性。结果:结肠癌组织与正常结肠组织中ASPP1和ASPP2的阳性表达率差异均无统计学意义(P>0.05);而结肠癌组织中i ASPP的阳性表达率显著高于正常结肠组织(P<0.05);结肠癌组织中i ASPP的阳性表达率在肿瘤病理分级间差异均无统计学意义(P>0.05),而ASPP1和ASPP2的阳性表达在肿瘤病理分级间差异均有统计学意义(P<0.05和P<0.01);结肠癌组织中ASPP1与i ASPP的阳性表达在肿瘤浸润深度间差异均无统计学意义(P>0.05),ASPP2的阳性表达在肿瘤浸润深度间差异有统计学意义(P<0.05);而结肠癌组织中ASPP1、ASPP2和i ASPP的阳性表达均在淋巴结有无转移间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:i ASPP在结肠癌组织和正常组织的阳性表达的差异,表明其有可能成为结肠疾病良、恶性的诊断及鉴别指标之一;ASPP2的阳性表达与结肠癌病理分期和分级有相关关系,表明其有可能成为结肠癌预后指标之一。

p53促凋亡刺激蛋白2在非小细胞肺癌中表达的临床意义

目的探讨p53促凋亡刺激蛋白2（ASPP2）在非小细胞肺癌（NSCLC）诊断和治疗中的临床意义。方法建立检测ASPP2 mRNA表达的实时荧光定量（RT—PCR）方法，并应用该方法检测非小细胞肺癌患者肿瘤组织和外周血单个核细胞ASPP2 mRNA表达，并监测化疗前后ASPP2 mRNA表达的变化。结果建立的RT—PCR方法获得较好的扩增曲线和标准曲线，并且熔解曲线峰型单一，具有良好的稳定性与重复性；NSCLC患者肺癌组织和外周血中ASPP2 mRNA表达分别为（2．34±0．75）×10^3，（7．00±1．17）×10^3。肺癌组外周血中ASPP2 mRNA明显低于对照组（1．20±0．18）×10^4（P〈0．05），术后化疗一个月后ASPP2 mRNA的表达明显高于化疗前（P〈0．05）。结论ASPP2mRNA的表达水平变化可以反映NSCLC疾病的状况，可在基因水平检测肿瘤的发生。ASPP2 mRNA的表达与化疗药物的敏感性相关，有望成为抗肿瘤治疗的新的分子靶点。