中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞P53泛素化降解途径的实验研究

目的从细胞生物学及分子生物学水平探讨中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制及P53泛素化降解途径中各个蛋白表达的情况,研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用。方法以4%含药血清培养液作用于SiHa细胞,设立正常对照组、空白血清组、清毒栓组及保妇康组、安达芬组,通过MTT法检测含药血清对细胞增殖抑制的影响;同时运用Western-Blot的方法检测HPV16E6、P53、UBcH8、E6-AP蛋白的表达情况。结果经含药血清培养液作用后各组细胞数量减少,其中以4%浓度含药血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白血清组比较,差异有统计学意义(P<0.01);同时含药血清可升高P53、UBcH8蛋白的表达,降低HPV16E6、E6-AP的表达。结论清毒栓含药血清可能是通过调控P53泛素化降解途径而达到抑制肿瘤的目的。

CSNK1α1通过介导p53泛素化降解途径影响胆管癌细胞周期阻滞及调亡水平的作用研究

目的:探究酪蛋白激酶1α1(CSNK1α1)在胆管癌细胞中的表达水平及其对肿瘤细胞周期和凋亡的影响及机制。方法:采用qRT-PCR法和Western blot法检测人胆管癌细胞系QBC939、FRH0201、RBE与正常肝内胆管上皮细胞系HIBE中CSNK1αl的表达差异;将人胆管癌细胞系RBE随机分为对照组、sh-NC组、sh-CSNK1αl组,利用慢病毒感染RBE细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白表达,qRT-PCR法和Westernblot法测定CSNK1α1表达,PI染色检测细胞各周期分布比例,流式细胞术和TUNEL染色观察细胞凋亡情况;RBE细胞转染sh-CSNK1αl慢病毒并给予蛋白酶体抑制剂MG132处理,Westernblot测定细胞内p53途径相关蛋白表达,免疫共沉淀实验分析CSNK1α1与p53结合情况及p53泛素化水平。结果:与人正常肝内胆管上皮细胞系HIBE比较,胆管癌细胞系QBC939、FRH0201、RBE中CSNK1αlmRNA相对表达量与蛋白相对表达量均上调(P<0.05);与对照组和sh-NC组比较,sh-CSNK1αl组细胞中CSNK1αlmRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调(P<0.05),出现G2/M期阻滞(P<0.05),细胞凋亡率和TUNEL阳性率均增加(P<0.05)。与对照组比较,sh-CSNK1α1组和MG132组细胞中p53、MDM2、p21及BAX的蛋白相对表达量均上调(P<0.05);与MG132组比较,sh-CSNK1αl+MG132组细胞中p53、MDM2、p21及BAX的蛋白相对表达量均进一步上调(P<0.05);CSNK1αl与p53能够形成复合物,且sh-CSNK1αl组细胞中p53蛋白泛素链明显低于对照组,p53蛋白表达则明显高于对照组。结论:CSNK1αl在人胆管癌细胞中高表达,靶向下调CSNK1αl能够使胆管癌细胞发生G2/M期阻滞,并促进细胞凋亡,该作用可能与其介导p53泛素化降解途径有关。

p53修饰及其相互作用的研究进展

p53是一个重要的抑癌分子,在抑制肿瘤发生发展过程中起关键作用.正常生理状况下,p53水平很低,细胞受到外界刺激后,p53水平升高,稳定性增强,继而参与细胞周期阻滞、细胞衰老、DNA修复或细胞凋亡等重要的生命过程.p53功能的精确调控至关重要,涉及一系列翻译后修饰(泛素化、乙酰化、磷酸化、甲基化、泛素样蛋白质修饰等等),这些作用互相协作、相互影响,从而精密调节p53的活性.本文探讨p53的各种修饰作用,并分析其各种修饰与肿瘤发生的相互关系,为肿瘤的治疗提供一些参考价值.