hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53在体内外的相互作用

与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocyticleukemiaprotein ,PML)在体内相互作用共定位于细胞核PML致癌结构域 (PMLoncogenicdomains,PODs)的人Daxx(humanDaxx ,hDaxx) ,能结合Fas死亡结构域诱导细胞凋亡。细胞肿瘤抑制子p5 3抑制细胞及病毒转录 ,提高细胞内Fas的表达并调节细胞凋亡。为了探索hDaxx与 p5 3在诱导细胞凋亡中有无相互作用及其作用效果 ,利用酵母双杂交体系测定发现p5 3通过C端与hDaxx结合 ,共免疫沉淀反应及Westernblot结果显示hDaxx与 p5 3能在体内外直接结合。hDaxx与 p5

p53-MDM2相互作用的分子力学和动力学研究

p53-MDM2相互作用的抑制已经成为治疗癌症的新方法.本文将分子动力学模拟和MM-PBSA(molecular mechanics/passion-Boltzman surface area)方法结合起来研究MDM2-p53相互作用机制。结果证明范德华相互作用驱动了MDM2与p53的结合.基于残基-残基相互作用的计算不仅证明p53的三个残基Phe19′,Trp23′和Leu26′与MDM2有较强的相互作用,而且还发现另外两个残基Leu22′和Pro27′也与MDM2有较强的相互作用,这为抗癌药物的设计提供了新靶标.同时也证明CH-CH,CH-π和π-π相互作用驱动了p53在MDM2疏水性裂缝中的结合.

石墨烯与抑癌基因p53 DNA片段相互作用的分子模拟与光谱学验证

石墨烯(graphene,G)及其衍生物由于具有独特的理化性质,被广泛应用于能源、生物医学等领域,但尚缺乏其对生物体和环境潜在危害的研究。采用分子动力学模拟并结合光谱学方法(紫外可见吸收光谱、紫外变温实验及荧光光谱),分析了石墨烯与抑癌基因p53启动子区DNA片段(p53-DNA)间的相互作用,并探讨了相关作用机制。石墨烯的部分芳香环与p53-DNA碱基的芳香环之间存在π-π堆积作用,两者可以通过嵌插作用进行结合,同时还通过沟槽作用进一步结合。光谱实验进一步证实,在石墨烯作用下,p53-DNA的熔点(Tm)值升高,EB-DNA体系发生静态荧光淬灭,说明石墨烯能与p53-DNA结合;同时,p53-DNA与石墨烯结合后在260 nm处的吸光度升高,说明石墨烯对p53-DNA的双螺旋结构具有一定的破坏作用。上述研究结果从分子水平上分析了石墨烯与p53-DNA间的相互作用机制,有助于进一步阐明石墨烯的毒性作用机理。

SOX4能与p53蛋白发生相互作用

目的:研究SOX4和p53蛋白之间的相互作用。方法:应用GSTpull-down、免疫共沉淀实验验证相互作用。结果:GSTpulldown实验证实SOX4能结合GST-p53融合蛋白,但不能结合GST蛋白;免疫共沉淀实验也证明,SOX4与p53能在细胞内发生相互作用。结论:SOX4能与p53发生相互作用,为p53信号通路的研究提供了新的线索。

mdm2与p53基因相互作用分子机理研究新进展

mdm2基因是与人类肿瘤密切相关的癌基因,它与p53基因间存在相互调节关系,p53能刺激mdm2基因的表达,mdm2’基因可以促进p53蛋白降解、抑制p53基因介导的反式激活和细胞凋亡功能.mdm2对p53基因功能的负性调节在部分含有野生型p53基因肿瘤的发生、发展中可能起着重要的作用,阻断两者间的相互作用以恢复p53基因的抑癌功能为恶性肿瘤基因治疗的研究提供了新思路.本文综述两者相互作用分子机理研究的最新进展.

P53蛋白与SV40大T抗原之间相互作用的研究

为确定一种定量研究酵母体内蛋白质 -蛋白质之间相互作用的简便、快捷的方法 ,为抗癌小分子化合物药物筛选提供一条可行性途径。本文选择P5 3蛋白与SV4 0大T抗原为靶蛋白对 ,首先用酵母双杂交系统 (LiAc法质粒共转化酵母细胞 )方法定性证明了两者之间存在相互作用 ,然后通过α -半乳糖苷酶活力定量测定了相互作用力的大小 ,并确定了最佳酶活测定时间 ,并与 β-半乳糖苷酶活力测定进行了比较 ,认为α-半乳糖苷酶活力定量测定是研究蛋白质 -蛋白质间相互作用的一种更加简便快捷的方法。

DNA损伤致p53-Mdm2相互作用的非线性动力学模型(英文)

p53-Mdm2相互作用在DNA损伤的细胞响应方面起着非常重要的作用。最新实验结果表明,在受到各种辐射损伤而引起DNA损伤后,细胞中的p53蛋白浓度在单体细胞和群体细胞情况下,表现为非衰减振荡和衰减振荡两种不同的动力学行为。通过研究p53-Mdm2负反馈回路的非线性动力学,分析了各种(特别是DNA损伤,p53和Mdm2浓度三者之间的)动力学关系,提出了一个能同时描述这两种不同动力学行为的非线性模型。

氯氰菊酯与p53-DNA相互作用的光谱研究

采用紫外、荧光分光光度法研究了农药氯氰菊酯与人类肿瘤抑制基因p53-DNA之间的相互作用。实验出现紫外减色、荧光猝灭等结果表明氯氰菊酯可能是以嵌插模式与p53-DNA结合作用;紫外变温实验得出p53-DNA熔点温度略有升高等结果则进一步证实氯氰菊酯是部分嵌插入DNA的沟区,影响了DNA的双螺旋结构的稳定性。

鼻咽癌细胞中p53相互作用蛋白质的分离和鉴定

鼻咽癌中p5 3基因突变罕见 ,但绝大部分鼻咽癌中存在p5 3蛋白过表达 /聚集且功能失活 .然而 ,到目前为止p5 3蛋白失活的机制仍然不清楚 .为揭示鼻咽癌中p5 3蛋白功能失活的机制 ,采用免疫共沉淀技术分别富集鼻咽癌细胞系HNE1和HNE2的p5 3结合蛋白 ,SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)对免疫沉淀复合物进行分离 ,从胶中切取p5 3结合蛋白条带 ,胶内酶解后进行电喷雾串联质谱 (LC ESI MS/MS)分析 ,得到相应的肽序列标签 (peptidesequencetags ,PST) ,通过搜索数据库在鼻咽癌细胞系中鉴定了 9个p5 3结合蛋白 .分别是热休克蛋白 70 (HSP70 )家族成员GRP 78和GRP 75、HSP90家族成员GRP 94、核纤层蛋白A/C (LaminA/C)、α actinin 4、Ezrin/Cytovillin、DNA复制准许因子 /MCM3蛋白 (DNAreplicationlicensingfactor/minichromosomemaintenance 3protein ,MCM3)、CD98/ 4F2heavychain和蛋白激酶C (PKC) .并用免疫共沉淀和蛋白质印迹分析技术对HNE1细胞蛋白条带 3鉴定的p5 3相互作用蛋白之一HSP78进行了验证 .首次在鼻咽癌细胞中鉴定了 9个p5 3结合蛋白 ,为阐明鼻咽癌中p5 3蛋白聚集及失活的机制提供了重要依据和线索 .

HBxAg、P53相互作用与乙型肝炎相关性肝细胞癌发病机制的研究进展

HBx基因编码乙型肝炎x抗原(HBxAg),抑癌基因p53编码P53蛋白,HBxAg、P53相互作用与乙型肝炎相关性肝细胞癌的发病机制密切相关。干预HBxAg、P53的相互作用可能阻断乙型肝炎相关性肝细胞癌的发病。

人MDM2基因真核表达载体的构建及其与p53的相互作用

目的:构建带Flag标签的MDM2真核表达载体,并检测MDM2与p53的相互作用。方法:从人乳腺文库中PCR扩增MDM2编码序列,将其插入pcDNA3.0-Flag载体,转染293T细胞后用Western印迹检测其在293T细胞中的表达,并通过免疫共沉淀实验检测MDM2与p53的相互作用。结果:双酶切和测序结果表明,Flag-MDM2真核表达载体构建成功,转染293T细胞后成功表达;免疫共沉淀实验证明Flag-MDM2与p53存在相互作用。结论:构建了带Flag标签的人MDM2真核表达载体,并检测了MDM2与p53之间的相互作用,为研究MDM2的功能奠定了基础。

应用酵母双杂交技术筛选与p53相互作用的蛋白质

应用酵母双杂交技术筛选与p53发生相互作用的蛋白质,有助于进一步阐明其在肿瘤发生、发展中发挥重要作用的调控机制。采用酵母双杂交技术,以p53C末端(62-393aa)作为诱饵筛选人乳腺cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质,并运用报告基因等实验提供的信息,经过重复验证排除假阳性以确定最后的阳性克隆。以p53C末端(62-393aa)作为诱饵最终筛选出了一个阳性克隆,经测序及生物信息学分析,这一个阳性克隆为:PIAS3(Protein inhibitor of activated stat3)。说明TPIAS3蛋白能与p53(62-393aa)发生特异性的相互作用。

基于原子力显微镜研究p53蛋白与PBR322 DNA的相互作用

肿瘤(癌症)是由于细胞在复制过程中,DNA损伤不能修复导致细胞凋亡或者细胞无限增殖而形成的。DNA在细胞中转录和翻译都会涉及蛋白与DNA的结合,肿瘤抑制蛋白也是参与这一过程的关键蛋白之一。然而,众多研究发现,肿瘤抑制蛋白p53具有识别和修复损伤DNA的效果,对于细胞的凋亡、基因的保护和避免癌症发生有着重要的意义。有研究表明,金属镁离子和锌离子可以增强p53蛋白的结构稳定性和p53-DNA的亲和力。因此,我们基于原子力显微镜(AFM),直观地呈现出p53蛋白与PBR322环状DNA相互作用的图像,同时发现p53蛋白可以使环状DNA自身形成聚集或者相交。但是,对于长度相当的5 000bp的线状DNA几乎没有这样的效果,而对于20 000bp DNA不会出现这样的现象。然而,在高浓度镁离子环境下,环状DNA会扭转成为麻花状,即形成超螺旋结构。这一现象,可为p53蛋白功能和作用机理研究提供指导,也为癌症治疗、癌症药物开发以及癌症检测方法提供启发。

CBX2-1与p53相互作用的机制

目的:检测CBX2-1与p53是否存在相互作用,并一步检测CBX2-1与p53发生相互作用的结构域。方法:在大肠杆菌中表达GST-CBX2-1融合蛋白,GST pull down纯化出蛋白与细胞裂解液混合,Western blot检测两个蛋白相互作用。同样的方法进一步检测CBX2-1与p53发生相互作用的结构域。结果:Western blot结果显示CBX2-1与p53存在直接相互作用,相互作用的结构域是CBX2-1蛋白N端1-288肽段和259-600肽段及p53蛋白的98-292肽段。结论:CBX2-1蛋白通过N端1-288肽段和259-600肽段与p53蛋白98-292肽段相互作用,为进一步研究研究CBX2-1参与神经性列腺癌的机制提供了一定的理论基础。

关于BCCIP与P53相互作用的研究

BCCIP是一个与BRCA2和p21相互作用的蛋白质,在众多细胞进程中具有重要作用。p53是一种重要的肿瘤抑制基因,也是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的基因。本文通过引入P53基因来研究BCCIP抑制肿瘤的生物学功能,验证BCCIP与P53之间的蛋白相互作用关系。

同源结构域相互作用蛋白激酶2的研究进展

同源结构域相互作用蛋白激酶2(HIPK2)是一个核内丝氨酸／苏氨酸激酶,作为辅助因子,广泛参与转录调控。HIPK2位于核斑,在Sp100和TP53INPls的辅助下能够磷酸化p53的46位丝氨酸,加速p53的乙酰化,拮抗MDM2对p53的抑制作用,强化p53的功能。通过磷酸化,HIPK2加速CtBP和c- Myb被蛋白酶体降解,引起细胞发生不依赖p53的凋亡或分化。许多肿瘤细胞低表达HIPK2,表明HIPK2 可能是一个重要的抑癌基因。