恶性肿瘤组织中HSP70、P53表达与中医热证的关系

目的探讨中医热证和非热证恶性肿瘤患者瘤组织中HSP70和P5 3的表达。方法采用S P免疫组化法进行HSP70、P5 3阳性检测以及采用ELISA法和RT PCR法检测恶性肿瘤组织中HSP70和HSP70mRNA表达含量。结果 ( 1 )结肠癌热证组、热证合计组HSP70、P5 3阳性率均明显高于各非热证组(P <0 0 5 ) ;( 2 )结肠癌热证组、鼻咽癌热证组、肺癌热证组以及热证合计组中HSP70表达含量均高于各非热证组 (P <0 0 1 ) ;( 3 )结肠癌热证组、肺癌热证组以及热证合计组中HSP70mRNA的表达含量均高于非热证组 (P <0 0 1 )。结论在恶性肿瘤的热证阶段HSP70和P5 3阳性表达率以及HSP70表达含量显著高于非热证阶段。

补肾增效液对辐射损伤小鼠脾组织p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响

目的:研究以补肾填精为主的补肾增效液对辐射损伤小鼠p53 mRNA及Caspase-3蛋白表达的影响。方法:设正常对照组、模型组、中药高、中、低剂量组和阳性药组,共灌胃8天。灌胃7天后,除正常对照组外,其余各组以^(60)Coγ射线照射小鼠造成辐射损伤。造模1天后取脾检测。p53 mRNA表达的检测采用原位杂交法;Caspase-3蛋白表达检测采用免疫组化法。结果:运用病理图像分析系统分析,各用药组均能上调辐射后小鼠脾组织p53 mRNA的表达,且与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01);各用药组能下调Caspase-3蛋白表达,其中,阳性药组、高剂量组和中剂量组与模型组比较,差异具有非常统计学意义(P<0.01)。结论:补肾增效液通过调控与DNA损伤密切相关的p53基因及相关Caspase-3蛋白的表达而促进辐射损伤的修复。

ER、bcl-2和p53在鸡与鹌鹑属间杂交种早期胚胎中的mRNA表达

通过人工授精获得鸡（♂10只）与鹌鹑（♀100只）属间杂交种蛋并同机入孵，采用Wpkci引物和多重PCR鉴定66～120h的鸡（♂）与鹌鹑（♀）属间杂交种活胚的性别后，选取不同时间点雌、雄胚胎共300枚，以β-actin为内标，通过RT-PCR分别测定雌激素受体（职）和细胞凋亡因子（bcl-2、p53）的mRNA相对丰度；探讨ER、bcl-2和p53对杂交种早期胚胎发育及性别分化的影响。结果表明：（1）杂交种胚胎ERmRNA表达在66～84h期间雌性极显著高于雄性（P〈0．01=，由此推测杂交种的性分化时间大致在胚胎发育的66～84h范围内；（2）bcl-2和p53的mRNA表达在杂交胚胎发育过程中具有明显的时序性，说明bcl-2和p53基因对早期杂交胚的发育具有重要的影响。

病理性瘢痕中p53和cyclinD_1的mRNA表达的实验研究

目的 探讨病理性瘢痕中p5 3、cyclinD1的表达及在瘢痕疙瘩与增生性瘢痕中表达的区别,以进一步了解瘢痕疙瘩与增生性瘢痕的形成及发展的机理。方法 手术切取病理性瘢痕标本作为实验组,以普通瘢痕作为对照组,运用RT -PCR方法测定病理性瘢痕中p5 3和cyclinD1的mRNA表达情况。结果 病理性瘢痕中p5 3和cyclinD1的mRNA表达与对照组比较差异有显著意义(P <0 .0 5 ) ;而瘢痕疙瘩中p5 3的mRNA表达明显高于增生性瘢痕,两者比较差异有显著意义(P <0 .0 5 )。结论 病理性瘢痕中p5 3和cyclinD1的异常表达,在病理性瘢痕的形成及发展中起重要作用。

清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡相关基因p53和bcl-2表达的影响

目的:观察清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜凋亡相关基因的影响。方法:采用牛Ⅱ型胶原制备大鼠胶原性关节炎模型,提取滑膜细胞总RNA,采用RTPCR技术,检测药物对滑膜细胞p53mRNA、bcl2mRNA的影响。结果:胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53mRNA、bcl2mRNA表达较正常组明显升高(P<0.01),清络通痹颗粒7.2g/kg可明显下调胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53mRNA、bcl2mRNA的水平(P<0.05,P<0.01)。结论:清络通痹颗粒可能通过下调滑膜细胞凋亡相关基因p53mRNA、bcl2mRNA表达,促进滑膜细胞的凋亡而发挥治疗作用。

镉致鸡脾淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响

应用吖啶橙/溴化乙锭荧光染色(AO/EB)法、DNA琼脂糖凝胶电泳及半定量RT-PCR法检测了氯化镉在浓度0～30μmol/L范围内对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞凋亡及对p53mRNA表达的影响.结果表明,浓度为0～30μmol/L的镉能引起鸡脾脏淋巴细胞凋亡及干扰p53mRNA的表达,低浓度镉引起的细胞凋亡与p53mRNA的表达密切相关,而高浓度的镉能够导致鸡脾脏淋巴细胞坏死.

缺血再灌注诱导交界区心肌细胞凋亡与Caspase-3的活化及p53、bcl-2基因表达的关系

目的探讨缺血再灌注(IR)损伤诱导交界区心肌细胞凋亡与Caspase-3的活化及p53、bcl-2基因动态表达的关系。方法建立家兔心肌IR模型,采用半定量RT-PCR技术,原位杂交技术,免疫组化技术等,观察缺血交界区Caspase-3mRNA变化规律,及p53、bcl-2、mRNA动态表达与细胞凋亡的关系。结果(1)IR损伤激发了Caspase-3的活化,交界区Caspase-3mRNA与心肌细胞凋亡在IR损伤8h后开始升高,12h达高峰,二者之间存在着明显的正相关性(r=0.9286,P<0.001)。(2)p53mRNA于IR8h开始升高。bcl-2mRNA在IR8h时开始激活,并持续维持低水平状态。p53mRNA和bcl-2mRNA二者的表达之间存在着明显的负相关性(r=-0.9648,P<0.001)。结论Caspase-3b、cl-2、p53三者之间形成一种网络调控构象,负责凋亡的促进和凋亡的抑制,共同调控着心肌细胞凋亡的发生发展。

诊断超声照射后人早孕绒毛细胞p53 mRNA bcl-2 mRNA表达改变

目的 探讨诊断超声与人早孕绒毛 p5 3 m RNA和 bcl-2 m RNA表达的关系。方法 对拟进行人工流产的 2 4例早孕 (4 5～ 60 d)妇女随机分为 4组 :对照组、10 m in组、2 0 min组和 3 0 min组。应用 HP-85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用原位杂交技术检测上述各组绒毛滋养层细胞 p5 3 m RNA和 bcl-2 m RNA表达情况。结果 超声照射后 10 min组绒毛滋养层细胞 p5 3 m RNA和 bcl-2 m RNA表达率与对照组差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ,2 0 min组和 3 0 min组滋养层细胞 p5 3 m RNA表达率明显增加 ,显著大于对照组和 10 min组 (P<0 .0 1) ;而 bcl-2 m RNA表达率却明显下降 ,显著低于对照组和 10 min组 (P<0 .0 1)。结论 诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10 min可引起绒毛滋养层细胞 p5 3 m RNA表达率增加和 bcl-2 m RNA表达率下降 ,从而诱导滋养层细胞凋亡增加。

SLE患者外周血T淋巴细胞p53基因表达及其与DNA甲基化的相关性

目的观察系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞p53基因表达情况及探讨其与DNA甲基化的相关性。方法收集34例SLE患者与23例健康对照者,均取外周血T淋巴细胞,分别用5-甲基胞嘧啶抗体与流式细胞仪检测DNA甲基化状态和反转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)分析p53mRNA表达情况。结果 SLE患者DNA甲基化水平活动期(8.50±1.42)与正常人(11.31±1.34)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。SLE患者p53基因表达活动期(1.15±0.33)与正常人(0.81±0.27)相比,差异也有统计学意义(P<0.01)。SLE患者p53基因的表达与狼疮疾病活动指数(SLEDAI)正相关(P<0.01);而与DNA甲基化水平没有明显的相关性(P>0.05)。结论 p53基因在外周血T淋巴细胞中的异常表达与SLE的发病相关,p53基因的异常表达在SLE表观遗传学发病机制的作用有待进一步研究。

高强度次声作用小鼠后海马内P53mRNA表达的变化

目的:研究高强度次声作用小鼠后海马内P53mRNA表达的变化。方法:BALB/C小鼠暴露于16Hz声压130dB次声。每天作用2h,分别作用1、7、14、21和28d后,采用原位杂交的方法观察小鼠海马内P53mRNA表达的改变。结果:130dB次声作用后,海马区域内P53mRNA表达明显增多;在相同声压级强度的次声作用下,随着作用次数的增加,海马内P53mRNA的杂交阳性反应产物增多。结论:一定参数次声作用后,脑内P53mRNA表达的增高,提示脑组织的结构和功能发生变化,导致DNA损伤,神经元受到损害。这一效应与次声的声强和暴露时间有关。P53mRNA在次声导致脑组织损害过程中亦起着非常重要的作用。

脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β、Fas、p53基因mRNA的表达

目的:研究脑胶质瘤组织中DNA聚合酶β(polβ)、Fas、p53基因mRNA的表达。方法:采用RT-PCR扩增及半定量分析方法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及其相应瘤旁正常脑组织中DNApolβ、Fas、p53基因mR-NA进行检测。结果:与相应瘤旁正常脑组织相比,脑胶质瘤及良性脑肿瘤组织中DNApolβ、Fas基因mRNA高表达,p53基因mRNA低表达(P均<0.01)。脑肿瘤组织中DNApolβ与Fas基因mRNA的表达呈正相关((r=0.611,P<0.05)),与p53基因mRNA的表达无关;p53与Fas基因mRNA的表达亦无关。结论:p53基因mRNA低表达及DNApolβ和Fas基因mRNA高表达与脑肿瘤的发生发展及恶性程度有关。

脑胶质瘤细胞polβ基因突变及其与Fas、p53基因mRNA水平表达的研究

目的研究脑胶质瘤细胞中DNA聚合酶β(polβ)基因突变及其与Fas、p53基因mRNA水平表达的关系。方法应用RNA提取、逆转录、PCR扩增、基因克隆及DNA序列分析法,对22例脑胶质瘤、7例良性脑肿瘤及1例肺部转移性鳞状细胞癌标本中的polβ基因进行检测;半定量分析法对脑胶质瘤和良性脑肿瘤标本及其周围正常脑组织中的polβ、Fas、p53基因进行mRNA水平检测及对比。结果30例脑肿瘤标本中,polβ基因突变7例,其中胶质瘤6例,突变率为27.3%(6/22),肺部转移性鳞状细胞癌1例。2例polβ基因二级结构图有明显变异。脑胶质瘤组织中均存在polβ和Fas基因mRNA水平高表达及p53基因低表达,有显著性差异(P<0.01),良性脑肿瘤与正常脑组织p53基因表达无显著性差异(P>0.05);各种脑肿瘤中polβ与Fas基因表达具有正相关性,而polβ、Fas与p53基因表达呈负相关性。结论脑胶质瘤细胞存在polβ基因突变,其突变率为27.3%。脑胶质瘤组织中均存在polβ和Fas基因mRNA水平高表达及p53基因低表达,提示脑胶质瘤的发生和发展可能与polβ基因突变有关,且恶性程度越高,突变越明显;另外,p53基因低表达及polβ、Fas基因高表达可能与脑胶质瘤的发生发展及恶性程度相关。

开心胶囊对糖尿病大鼠心肌p53 mRNA表达的调节

目的 :探讨糖尿病大鼠心肌细胞 p5 3 m RNA表达和开心胶囊的影响。方法 :建立大鼠链尿佐菌素诱导的糖尿病动物模型 ,设立对照组、非治疗组及开心胶囊组 ,用逆转录聚合酶链式反应检测病程 4周和 8周大鼠心肌细胞 p5 3水平。结果 :诱发糖尿病 4周后糖尿病大鼠心肌细胞 p5 3m RNA未见明显表达增强 ,8周时表达较明显 ( P<0 .0 5 ) ;给开心胶囊 8周后 ,p5 3m RNA表达明显下降 ( P<0 .0 5 )。结论 :糖尿病状态下 ,心肌细胞p5 3m RNA高表达可能是高血糖诱发结果 ,开心胶囊可通过减轻 p5 3m RNA异常表达缓解糖尿病心肌损伤。

大肠肿瘤石蜡标本P53 mRNA RT-PCRIS比较研究

目的 :探讨大肠肿瘤P5 3mRNA转录改变。方法 :对 9例大肠癌和 3例良性大肠肿瘤石蜡标本的肿瘤灶、移行区和自身正常肠组织 ,应用反转录原位PCR技术进行了研究。结果 :3例良性肿瘤中仅 1例在肿瘤区组织检出弱阳性。 9例大肠癌中 ,肿瘤区检出 7例阳性 ,移行区检出 4例阳性 ,自身正常肠组织检出 1例阳性。结论 :在肿瘤早期即可能出现P5 3基因mRNA改变 ,应用RT CPRIS检出p5 3mRNA的阳性率高于常规免疫组化法。RT PCRIS具有很高的灵敏度和特异性 。

hTERT mRNA、p53蛋白在胃黏膜病变中的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系

目的:探讨人端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA、p53蛋白在胃黏膜病变中的表达和幽门螺杆菌(Hp)感染的关系。方法:对未经抗Hp治疗且被确诊为慢性浅表性胃炎(CSG)和胃癌前病变者,检测胃黏膜Hp感染状况,并分别用RT-PCR和SP免疫组化方法检测hTERT mRNA和p53蛋白的表达。结果:在胃癌前病变组中,hTERT mRNA和p53蛋白的阳性表达率均显著高于CSG组(P<0.05)。在胃癌前病变组中,Hp阳性亚组hTERTmRNA和p53蛋白的表达率分别显著高于Hp阴性亚组的表达率(P<0.05)。在CSG组中,Hp感染和hTERTmRNA、p53蛋白的表达无明显关系。在24例Hp阳性的胃癌前病变组中,p53蛋白和hTERT mRNA的表达有相关性,Pearson相关系数为0.608(P<0.05)。结论:在Hp致胃癌前病变的发生过程中,p53基因的变异和hTERT基因的激活起重要作用,且存在相关关系,这可能是Hp引起胃黏膜病变发生发展的作用机制之一。

P53蛋白质N末端的二级结构预测及其三维构象

以编码Ｐ５３Ｎ末端１２０个残基的ｍＲＮＡ二级结构为基础，结合Ｃｈｏｕ－Ｆａｓｍａｎ蛋白质二级结构预测原则，预测出Ｐ５３蛋白质Ｎ端的９３个残基包含四段α螺旋结构（１４－２６；３８－４６；５１－５６；６８－７０），没有发现β片层。与四种以多重序列联配为基础的蛋白质二级结构预测方法（准确率均为７３．２０％左右）相对照，结果十分相近。在ＳＧＩ工作站上以此为初始结构建立的三维构象提示，Ｐ５３Ｎ末端前８０个氨基酸肽段呈弧型板块结构，其转录激活区由两段主要螺旋组成，呈上下构形，占据弧型板块的顶部及底部外侧缘。Ｃ端１３个富含脯氨酸肽段则呈弯曲松散状。

系统性红斑狼疮外周血单个核细胞p53基因及蛋白的表达

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)p53mRNA及蛋白表达水平变化,从而了解p53是否通过异常的凋亡调节参与SLE的发病。方法以SLE疾病活动指数(SLEDAI)评价疾病活动性,流式细胞术检测p53 蛋白,半定量RT PCR检测p53mRNA。结果(1)SLE患者PBMC p53蛋白表达水平显著高于正常人(P<0 05)。(2)活动期与缓解期SLE患者PBMC p53蛋白的表达无显著差异, p53 蛋白水平与SLEDAI评分无关(P>0 05)。(3)SLE患者PBMC p53mRNA表达量与阳性率与正常相比无显著性差异(P>0 05)。结论(1)p53蛋白通过增加表达量而导致异常的淋巴细胞凋亡参与SLE发病,但与疾病活动性无关。(2) SLE患者PBMCp53mRNA表达未见异常。

大鼠胃黏膜组织Syk、Survivin蛋白、P53及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性

目的探讨大鼠胃黏膜组织Syk、P53、Survivin及AMP-18 mRNA表达和胃癌病变程度的相关性。方法将48只体重180~200 g SD大鼠分为A、B、C、D 4组。A组给予生理盐水作为对照组。B组、C组和D组,采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)诱导建立大鼠胃癌模型,1~8周给予大鼠自由饮水,水中的MNNG溶液浓度为100μg/ml(内含4 mg/l吐温20和20 mg/l的维生素D3);9~16周MNNG溶液浓度增加至150μg/ml,17~24周MNNG溶液浓度为180μg/ml。分别于第8周(B组)、第16周(C组)及第24周(D组)处死大鼠取材。HE染色切片观察大鼠胃黏膜组织病理改变,并采用Western blot检测胃黏膜Syk蛋白和Survivin蛋白水平,Q-PCR法测定胃黏膜P53和AMP-18 mRNA的表达。结果HE染色结果显示A组、B组胃黏膜组织结构正常,无炎性细胞浸润;C组胃黏膜局部有破损,细胞核增大、轻度异型,提示胃癌早期;D组胃黏膜下层及肌层有炎性细胞浸润,细胞形态不规则,核质比增大,表明胃癌进展期。免疫组化提示B组、C组和D组胃黏膜组织Syk蛋白水平明显下降(P<0.05),Survivin蛋白含量显著增加,与A组均有统计学差异(P<0.05)。Q-PCR表明C组和D组胃黏膜组织P53 mRNA表达上调,AMP-18 mRNA表达下调,且D组胃癌进展后,P53和AMP-18 mRNA水平与B组有统计学差异(P<0.05)。结论大鼠胃黏膜组织Syk蛋白、AMP-18 mRNA表达随着胃癌病变程度的进展明显下降,而Survivin蛋白、P53表达则显著上升。

宫颈癌患者放疗敏感性与癌组织中HPV16-E6、p53 mRNA表达的关系分析

目的探讨宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒(HPV)16-E6、p53 mRNA表达及与放疗敏感性的关系。方法选取2018年1月~2020年1月在我院治疗的宫颈癌患者76例,均给予根治性放射治疗,采用RT-PCR检测放疗前后HPV16-E6、p53 mRNA表达。结果76例患者中,放疗疗效达到完全缓解(CR)10例,部分缓解(PR)45例,疾病稳定(SD)14例,疾病进展(PD)7例,放疗敏感率为72.37%。放疗敏感者放疗后HPV16-E6 mRNA相对表达量为0.22±0.05,明显低于放疗抗拒者(P<0.05),而p53 mRNA相对表达量为1.97±0.21,明显高于放疗抗拒者(P<0.05);放疗前、放疗后HPV16-E6与p53 mRNA相对表达量呈负相关(r=-0.530和-0.754,P<0.05)。结论宫颈癌组织中HPV16-E6、p53m RNA表达与患者放疗敏感性有关。

p53β在肾细胞癌中的表达及其临床意义的研究

目的探讨p53β在肾癌中的表达与肾细胞癌的病理类型、分期以及核分级的相关性。方法采用逆转录PCR对47例肾细胞癌标本和癌旁正常肾组织进行了检测,并结合肾癌的分级和临床分期进行统计学分析。结果 p53β在肾癌组织中的表达显著高于正常肾组织,其表达与其临床分期有关与病理类型、核分级无关。结论 p53β的表达与肾细胞癌的发生发展有密切关系。p53β可以进一步研究作为肾细胞癌新的诊断分子标记和基因治疗的新的靶点。