人红细胞膜上可能存在4．1－血型糖蛋白C与p55蛋白的相互作用

人红细胞膜上可能存在４．１－血型糖蛋白Ｃ与ｐ５５蛋白的相互作用卢义钦，刘俊凡（湖南医科大学生化教研室，长沙４１００７８）关键词人红细胞膜，蛋白ｐ５５，相互作用人红细胞膜的一些膜蛋白，通过彼此间的相互作用可形成错综复杂的膜下网络，呈现一定的双向或立体结...

卡氏肺孢子虫P55抗原表位与蛋白特性的分析

目的预测p55抗原表位及蛋白性质。方法运用生物信息学方法推测p55抗原表位及蛋白性质,分析预测结果。结果p55蛋白存在多个潜在的抗原表位,T细胞表位按预测积分高低排列位于141-158,54-68,123-137,349-364,397-414位氨基酸残基;B细胞表位在37-41,74-79,111-119,148-161,199-210,240-250,256-266,295-314,322-360位氨基酸残基等部位。P55重组融合蛋白为可溶性蛋白的概率是92%。结论p55抗原表位可能主要存在于148-161、295-320、337-356氨基酸序列区域内或其附近。该预测p55抗原表位可以有目的地克隆重组基因片段,为研究高效的表位疫苗奠定基础。

HIV P55-gag蛋白促进骨髓间充质干细胞的老化

探索HIV P55-gag蛋白对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)老化的影响,进一步阐明HIV P55-gag蛋白抑制BMSC成骨分化的机理。原代分离、培养、纯化BMSC,再将其分两组进行处理,一组为常规培养对照组(BMSC_(con)),另一组为添加HIV P55-gag蛋白培养组(BMSC_(gag));通过计算培养5、10、15及20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)的群体倍增水平,比较增殖能力;将培养20天的BMSC_(con)和BMSC_(gag)分别标记Brdu,免疫荧光法检测Brdu掺入率,比较两组细胞的增殖水平;通过检测细胞衰老生物标记β-半乳糖苷酶,比较两组细胞的衰老程度;Western检测两组细胞衰老相关蛋白P21的表达强度;将两组细胞诱导成骨分化,比较其成骨分化能力。在培养15天和20天时,BMSC_(gag)群体倍增水平明显低于BMSC_(con);BMSC_(gag)的Brdu掺入率明显低于BMSC_(con),分别为(26±4.1)%和(45±3.7)%;β-半乳糖苷酶染色检测显示,BMSC_(gag)的衰老细胞数明显多于BMSC_(con),分别为(21±4.7)%和(8±2.1)%;BMSC_(gag)的P21的表达强度明显强于BMSC_(con);成骨诱导后,茜素红染色和ALP染色均显示,BMSC_(gag)的成骨分化能力明显弱于BMSC_(con)。HIV P55-gag蛋白促进BMSC老化,进而抑制其成骨分化能力。

HIV-1 CN54 Gag P55和P24蛋白的高效表达、纯化和鉴定

目的 探讨HIV 1中国株CN5 4GagP5 5和P2 4重组蛋白的高效表达并纯化 ,为研究HIV疫苗和诊断试剂创造条件。方法 分别将CN5 4GagP5 5和P2 4基因克隆至 pBV2 2 0和 pThioHisC载体 ,构建非融合表达载体 ;将重组质粒转化大肠杆菌BL2 1codonplus RIL ,对工程菌进行诱导表达。Western Blot检测目的蛋白 ,用DEAE SeparoseFF阴离子交换层析柱纯化目的蛋白 ;纯化的P5 5和P2 4抗原蛋白分别包被酶标板作ELISA检测。结果 P5 5以包涵体的形式表达 ,表达量占菌体总蛋白的 30 % ,P2 4实现了可溶性表达 ,表达量占总菌体总蛋白的4 0 % ;纯化后P5 5纯度达到 80 % ,P2 4纯度超过 90 %。Western Blot和ELISA检测均显示了良好的的灵敏度和特异性。结论 HIV 1CN5 4GagP5 5和P2 4抗原蛋白可在大肠杆菌中高效表达 ,纯化的抗原蛋白具有良好抗原性 。

肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析

目的构建肺孢子虫(菌)p55蛋白嵌合基因的原核表达载体,分析、鉴定及纯化表达产物。方法自NCBI网站的蛋白数据库中获取p55抗原及4个变异体信息,运用生物信息学方法预测可能的抗原表位,设计包含多个可能抗原表位的多肽,根据遗传中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化,将氨基酸序列转化为核苷酸序列,将人工合成的嵌合基因(CAG)片段连接到质粒pGEX-6p-1(含GST标签)上,构建原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,酶切、测序鉴定。pGEX-6p-1/CAG转化大肠杆菌,异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组融合蛋白CAG-GST。表达产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western-blotting分析鉴定。结果双酶切及测序结果显示重组质粒pGEX-6p-1/CAG构建成功。SDS-PAGE显示重组融合蛋白相对分子量约为69 000。Western-blotting结果显示,表达的融合蛋白为CAG-GST。结论成功构建表达p55蛋白嵌合基因的原核表达载体pGEX-6p-1/CAG,建立表达重组蛋白的原核表达系统。

TNF-α及可溶性受体P55在病毒性心肌炎小儿血清表达及意义

目的:探讨病毒性心肌炎患儿血清TNF-α及受体P55表达的意义。方法:采用比色法检测72名病毒性心肌炎患儿(患儿组)血清TNF-α及P55的表达水平,并同60正常健康同龄儿童(对照组)对照,比较病毒性心肌炎患儿同正常健康儿童血清TNF-α及P55表达差异。结果:患儿组血清TNF-α及P55表达水平正常儿童组差异具有统计学意义。结论:TNF-α及P55在小儿病毒性心肌炎血清高表达,其同心肌损伤有关,同时可能参与抗病毒等保护作用。

可溶性Ⅰ型肿瘤坏死因子受体蛋白对免疫诱导肝硬化大鼠药物致肝功能衰竭的保护作用

目的 观察长效可溶性I型TNF受体（TNFR p55,sTNFR：IgG-Fc）蛋白对免疫诱导肝硬化大鼠药物致肝功能衰竭的保护作用.方法 人血清白蛋白（HAS）与完全弗氏佐剂乳化后皮下注射大鼠,使其免疫致敏,末次免疫后10 d采血,检测抗人白蛋白抗体阳性后,每周2次尾静脉注射HSA,6周后形成免疫诱导型肝硬化.成模大鼠分3组,每组15只.模型对照组在肝硬化基础上予D-GalN和脂多糖腹腔注射急性攻击,预处理组在急性攻击前18 h予长效可溶性TNFR p55蛋白腹腔注射,另设0.9％氯化钠溶液正常对照组.观察各组大鼠的一般情况、存活率、肝功能、病理学改变,ELISA法检测血IL-6、IL-22和肝组织中IL-6水平.分光光度法检测肝细胞裂解液中Caspase 3活性.实时PCR检测增殖细胞核抗原（PCNA）、bcl-2、bax和IL-22受体mRNA表达.组间比较采用方差分析.结果 模型对照组大鼠12h后精神萎靡、反应减弱,15只中仅存活3只,预处理组大鼠12h均存活（P=0.029 8）,且反应灵敏;两组血ALT分别为（6 533±360）和（105±7）U/L（F=151.60,P＜0.01）.模型对照组大鼠肝组织再生结节内发生大块或亚大块坏死,纤维间隔保留;TNFR p55蛋白能减轻肝组织炎性反应坏死程度.模型对照组和预处理组大鼠血清IL-6分别为（842.0±12.9）和（91.9±1.6） pg/mL（F=380.30,P＜0.01）,肝组织中分别为（26.2±1.2）和（11.1±0.8） pg/mL（F=176.90,P＜0.01）,血清中IL-22分别为（167.0±27.8）和（988.0±109.6） pg/mL（F=37.91,P＜0.01）.TNFR p55蛋白预处理可使Caspase 3活性减少近60％（F=303.70,P＜0.01）bax表达减少22％（F=108.80,P＜0.01）,而bcl-2和PCNA表达分别增加3.6倍和23.0倍（F=115.60,P＜0.01;F=594.20,P＜0.01）.结论 长效可溶性TNFR p55蛋白可明显改善免疫诱导肝硬化大鼠药物致肝功能衰竭的存活率、肝功能和炎性反应,显示其潜在的临床应用价值.