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p62基因对黑素瘤A375细胞生物学特性的影响 被引量:3
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作者 易娟娟 刘龙阳 +4 位作者 黄慧珍 唐妍 岑丽卿 蔡艳桃 毛越苹 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期9-11,60,共4页
目的研究p62基因在黑素瘤A375细胞生长增殖及细胞周期调控等方面的作用。方法取对数生长期的A375细胞,用干扰p62基因表达的siRNA慢病毒载体转染细胞;MTT法检测转染及正常A375细胞的平均OD值;流式细胞术检测两组的细胞周期分布。结果转... 目的研究p62基因在黑素瘤A375细胞生长增殖及细胞周期调控等方面的作用。方法取对数生长期的A375细胞,用干扰p62基因表达的siRNA慢病毒载体转染细胞;MTT法检测转染及正常A375细胞的平均OD值;流式细胞术检测两组的细胞周期分布。结果转染组的平均OD值较正常组小(P<0.05);转染组的G0/G1期比例(0.73±0.01)较正常组(0.64±0.02)高(P=0.002);转染组的凋亡率(0.10±0.02)较正常组(0.03±0.01)高(P=0.004)。结论干扰p62表达后,细胞周期阻滞于G0/G1期,p62在维持细胞周期和肿瘤细胞凋亡中起着重要的作用。 展开更多
关键词 p62基因 SIRNA 黑素瘤A375细胞 生物学特性
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RNA干扰抑制p62基因表达对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响 被引量:1
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作者 陈推 袁运水 陈惠祯 《蚌埠医学院学报》 CAS 2018年第1期13-15,共3页
目的:研究shRNA降低p62基因表达对人宫颈腺癌HeLa细胞增殖的影响。方法:构建具有沉默p62表达的慢病毒载体短发夹RNA(shRNA)序列,采用Polybrene将其转染入宫颈腺癌HeLa细胞中(shRNA组),设立shNC作为阴性对照组,另设未加慢病毒转染载体的... 目的:研究shRNA降低p62基因表达对人宫颈腺癌HeLa细胞增殖的影响。方法:构建具有沉默p62表达的慢病毒载体短发夹RNA(shRNA)序列,采用Polybrene将其转染入宫颈腺癌HeLa细胞中(shRNA组),设立shNC作为阴性对照组,另设未加慢病毒转染载体的空白对照组。采用实时荧光定量qRT-PCR技术检测各组相对空白对照组的p62基因相对表达量;采用CCK-8实验检测3组细胞的增殖情况,采用集落克隆形成实验检测3组细胞的克隆形成率。结果:沉默p62基因表达的宫颈癌HeLa细胞成功构建;shRNA组p62mRNA相对空白对照组的相对表达量为(0.18±0.08),而shNC组的p62mRNA相对空白对照组的相对表达量为(1.01±0.12)(t=9.97,P<0.01);shRNA的干扰效率为81.00%;shRNA组较阴性对照组和空白对照组细胞增殖速度变慢(P<0.05),克隆形成率减少(P<0.01)。结论:p62基因沉默后,宫颈癌HeLa细胞的增殖速度变慢。p62基因在宫颈癌HeLa细胞的增殖中起着重要的作用。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 短发夹RNA p62基因 宫颈癌HELA细胞 增殖
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p62基因敲除后食管鳞状细胞癌EC109细胞生物学行为变化 被引量:2
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作者 陈秀英 于莉 +2 位作者 周君阳 丁妍 谭玉洁 《山东医药》 CAS 2020年第2期10-13,21,共5页
目的观察p62基因敲除后对食管鳞状细胞癌EC109细胞生物学行为的影响。方法使用CRISPR/Cas9技术构建p62敲除的EC109细胞株作为敲除组,选择野生型EC109细胞作为对照组。采用T7E1核酸内切酶检测打靶效果,Western blotting法检测细胞p62蛋白... 目的观察p62基因敲除后对食管鳞状细胞癌EC109细胞生物学行为的影响。方法使用CRISPR/Cas9技术构建p62敲除的EC109细胞株作为敲除组,选择野生型EC109细胞作为对照组。采用T7E1核酸内切酶检测打靶效果,Western blotting法检测细胞p62蛋白,倒置显微镜下观察细胞形态变化,实时无标记动态细胞分析技术观察细胞增殖能力,细胞划痕实验观察细胞的迁移能力,流式细胞仪检测细胞周期。结果T7E1酶切后,敲除组在800 bp左右有敲除后的特异性条带,对照组只在870 bp左右有一条带。敲除组p62蛋白相对表达量低于对照组,细胞合胞体数量多于对照组(P均<0.01);敲除组细胞形态与对照组相比,细胞较圆且边界不清。敲除组10~80 h细胞增殖的CI值均低于同时点的对照组,细胞克隆数量少于对照组(P均<0.05);敲除组96 h划痕愈合率低于对照组,细胞周期中阻滞于G 0/G 1期的细胞比例高于对照组(P均<0.05)。结论p62基因敲除后食管鳞状细胞癌EC109细胞形成较多合胞体,且细胞的恶性行为受到抑制;p62有望成为治疗食管癌的有效基因靶点。 展开更多
关键词 食管癌 p62基因 基因敲除 细胞形态 细胞增殖 细胞迁移 细胞周期
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CRISPR/Cas9介导下高效敲除SQSTM1/p62基因的Hela细胞模型的建立
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作者 姚建凤 李明 +5 位作者 黄荣富 彭维林 林建生 连建烽 杨晓煜 郑鸣 《解剖学杂志》 CAS 2019年第1期1-5,共5页
目的 :探讨针对p62双sgRNA向导CRISPR/Cas9基因编辑效率。方法 :采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除p62基因,通过细胞有限稀释法和嘌呤霉素筛选,免疫印迹法验证双sgRNA和单sgRNA向导的基因编辑成功率;流式细胞仪验证p62缺失对Hela细... 目的 :探讨针对p62双sgRNA向导CRISPR/Cas9基因编辑效率。方法 :采用CRISPR/Cas9基因编辑技术成功敲除p62基因,通过细胞有限稀释法和嘌呤霉素筛选,免疫印迹法验证双sgRNA和单sgRNA向导的基因编辑成功率;流式细胞仪验证p62缺失对Hela细胞凋亡的影响。结果 :免疫印迹分析得出双sgRNA导向的p62敲除效率高于单sgRNA导向的敲除,靶序列测序比对分析确认p62编码基因发生大片段缺失突变。H_2O_2处理稳定敲除的Hela细胞系显示,p62基因敲除能明显抑制Hela细胞H_2O_2诱导的早期细胞凋亡。结论 :成功建立了p62敲除的Hela细胞系,双sgRNA向导的CRISPR/Cas9基因编辑体系可能是一种更有效的编辑工具。 展开更多
关键词 CRISpR/Cas9基因编辑 p62基因 过氧化氢 细胞凋亡 HELA细胞
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p62基因沉默对宫颈癌Hela细胞生长和药物敏感性的影响 被引量:1
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作者 娄欢 马金平 +1 位作者 武明莉 杨小风 《实验与检验医学》 CAS 2019年第2期172-174,218,共4页
目的探讨p62基因沉默对宫颈癌Hela细胞生长和对顺铂敏感性的影响。方法选取宫颈癌Hela细胞株,随机分为对照组、空白shRNA组和p62-shRNA组,其中空白shRNA组转染空白慢病毒载体,p62-shRNA组转染沉默p62表达的慢病毒载体,采用RT-PCR检测各... 目的探讨p62基因沉默对宫颈癌Hela细胞生长和对顺铂敏感性的影响。方法选取宫颈癌Hela细胞株,随机分为对照组、空白shRNA组和p62-shRNA组,其中空白shRNA组转染空白慢病毒载体,p62-shRNA组转染沉默p62表达的慢病毒载体,采用RT-PCR检测各组p62 mRNA表达,CCK法检测各组细胞增殖以及在不同顺铂浓度下细胞存活情况,采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果 p62-shRNA组p62 mRNA相对表达量为(0.241±0.096),明显低于对照组和空白shRNA组(P<0.05);p62-shRNA组培养24h、48h、72h细胞OD值明显低于对照组和空白shRNA组(P<0.05);p62-shRNA组细胞凋亡率为(23.20±2.91)%,明显高于对照组和空白shRNA组(P<0.05);0.05mg/L、0.5mg/L和5mg/L顺铂作用下,p62-shRNA组细胞存活率分别为(60.11±3.10)%、(34.38±2.91)%和(22.10±3.00)%,明显低于对照组和空白shRNA组(P<0.05)。结论 p62基因沉默可抑制宫颈癌Hela细胞增殖,促进细胞凋亡,增加对顺铂的敏感性。 展开更多
关键词 p62基因 宫颈癌 HELA细胞 增殖 化疗敏感性
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川芎嗪对老年闭塞性动脉硬化症血瘀证患者CD62p基因表达的调控 被引量:4
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作者 马民 张桂娟 +1 位作者 李德辉 马义 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期327-328,共2页
目的观察川芎嗪对老年闭塞性动脉硬化症血瘀证患者CD62p基因表达的影响,从基因水平探索川芎嗪治疗作用的微观实质。方法以病证结合方式,严格按照诊断标准选取160例老年闭塞性动脉硬化症血瘀证和非血瘀证患者,给予川芎嗪治疗。用流式细... 目的观察川芎嗪对老年闭塞性动脉硬化症血瘀证患者CD62p基因表达的影响,从基因水平探索川芎嗪治疗作用的微观实质。方法以病证结合方式,严格按照诊断标准选取160例老年闭塞性动脉硬化症血瘀证和非血瘀证患者,给予川芎嗪治疗。用流式细胞技术,观察治疗前后患者CD62p基因的表达,并以健康人为对照。结果血小板CD62p的表达水平治疗前为(4.35±1.91)%,治疗后下降为(2.98±1.05)%(P<0.05)。血小板CD62p的表达水平气虚血瘀组(5.24±2.92)%,气滞血瘀组(8.17±2.05)%,阴虚血瘀组(5.59±2.78)%,痰浊血瘀组(5.78±2.85)%,较正常对照组〔(2.08±1.07)%〕显著升高(P<0.01)。结论川芎嗪可有效抑制CD62p基因的异常表达。 展开更多
关键词 川芎嗪 闭塞性动脉硬化症 血瘀证 CD62p基因
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行气活血复方对闭塞性动脉硬化症血瘀证患者CD62p基因表达的调控 被引量:3
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作者 马民 张桂娟 陈利国 《江苏中医药》 CAS 北大核心 2006年第4期22-24,共3页
目的:从基因水平对行气活血复方的微观机理进行探索。方法:以病证结合方式,严格按照诊断标准选取160倒闭塞性动脉硬化症血瘀证和非血瘀证患者,用流式细胞技术,进行治疗前后CD62p基因表达的观察、对比、分析,并以健康人为对照。结果:(1)... 目的:从基因水平对行气活血复方的微观机理进行探索。方法:以病证结合方式,严格按照诊断标准选取160倒闭塞性动脉硬化症血瘀证和非血瘀证患者,用流式细胞技术,进行治疗前后CD62p基因表达的观察、对比、分析,并以健康人为对照。结果:(1)闭塞性动脉硬化症患者组血小板 CD62p的表达水平高于正常对照组(P<0.01)。(2)与正常对照组比较,血瘀证组和非血瘀证组血小板 CD62p的表达水平均升高(P<0.01或P<0.05)。血瘀证组血小板CD62p的表达水平显著高于非血瘀证组(P<0.01)。(3)血小板CD62p的表达水平,气虚血瘀组、气滞血瘀组及阴虚血瘀组、痰浊血瘀组均高于正常对照组(P<0.01);气滞血瘀组明显高于气虚血瘀组、阴虚血瘀组和痰浊血瘀组(P<0.01);气虚血瘀组、阴虚血瘀组和痰浊血瘀组之间相比较,血小板CD62p的表达水平无明显差异。(4)治疗后闭塞性动脉硬化症患者CD62p的表达水平低于治疗前(P<0.05)。结论:闭塞性动脉硬化症血瘀证患者存在CD62p基因的异常表达,并且其指标异常与基因表达水平的高低与血瘀证各型之间存在密切关系,行气活血中药可有效抑制CD62p基因的异常表达。 展开更多
关键词 行气活血 闭塞性动脉硬化症 血瘀证 微观辨证 CD62p基因
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血瘀证患者血小板CD62p基因、白细胞HSP70基因的表达 被引量:12
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作者 马民 陈利国 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期307-310,共4页
目的从基因水平探讨血瘀证微观实质。方法以病证结合方式,严格按照诊断标准选取16 0例高血压病和2型糖尿病血瘀证(10 0例)和非血瘀证患者(6 0例) ,用血液生化指标和实验技术,进行血小板CD6 2 p基因、白细胞HSP70基因的表达的观察、对比... 目的从基因水平探讨血瘀证微观实质。方法以病证结合方式,严格按照诊断标准选取16 0例高血压病和2型糖尿病血瘀证(10 0例)和非血瘀证患者(6 0例) ,用血液生化指标和实验技术,进行血小板CD6 2 p基因、白细胞HSP70基因的表达的观察、对比、分析,并以健康人为对照。结果血瘀证患者存在CD6 2 p基因、HSP70基因的异常表达,两者表达水平较健康人显著升高(P <0. 0 1) ,且基因异常表达水平的高低与血瘀证各型之间存在密切关系。结论CD6 2p基因和HSP70基因为与血瘀证有密切相关的基因。 展开更多
关键词 CD62p基因 HSp70基因 血小板 白细胞 患者 糖尿病血瘀证 血液生化指标 基因异常表达 基因水平 结合方式 非血瘀证 高血压病 诊断标准 实验技术 密切关系 健康人 基因
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myc-p62融合蛋白的表达及其对ERK磷酸化的抑制
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作者 张云静 冯滢滢 +5 位作者 张立 徐小洁 王涛 范忠义 叶棋浓 张蓉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期596-598,604,共4页
目的构建带myc标签的自噬标志蛋白P62基因真核表达载体,获得myc-p62融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测。方法利用聚合酶链式反应从乳腺文库中体外扩增人P62基因编码序列,将其与空p XJ-40-myc载体正确连接,重组质粒myc-p62转染HEK293... 目的构建带myc标签的自噬标志蛋白P62基因真核表达载体,获得myc-p62融合表达蛋白,并对其功能进行初步检测。方法利用聚合酶链式反应从乳腺文库中体外扩增人P62基因编码序列,将其与空p XJ-40-myc载体正确连接,重组质粒myc-p62转染HEK293T细胞,用Western blot法检测该融合蛋白的表达情况,并检测该蛋白对细胞外信号调节激酶(ERK)磷酸化的影响。结果构建得到myc-P62基因的真核表达载体,双酶切鉴定得到与预期片段大小相符的外源性基因插入片段,经测序与目的序列完全一致;经Western blot法检测,融合蛋白成功表达,并能够抑制ERK磷酸化。结论成功表达了myc-p62融合蛋白并能抑制ERK磷酸化。 展开更多
关键词 p62基因 真核表达载体 自噬 ERK磷酸化
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P62、PCNA在结肠癌中的表达及其与抗核抗体的相关性研究 被引量:2
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作者 乔维洲 刘卫红 《国际检验医学杂志》 CAS 2014年第6期691-692,共2页
目的探讨P62、增殖细胞核抗原(PCNA)在结肠癌中的表达及其与血清抗核抗体(ANA)的相关性,评估其在结肠癌早期诊断、恶性程度及预后评价中的应用价值。方法采用免疫组化方法检测64例结肠癌组织及42例结肠腺瘤组织P62、PCNA的表达情况;用EL... 目的探讨P62、增殖细胞核抗原(PCNA)在结肠癌中的表达及其与血清抗核抗体(ANA)的相关性,评估其在结肠癌早期诊断、恶性程度及预后评价中的应用价值。方法采用免疫组化方法检测64例结肠癌组织及42例结肠腺瘤组织P62、PCNA的表达情况;用ELISA和Western blot检测患者血清P62抗体水平;血清ANA水平采用间接免疫荧光方法检测。结果结肠癌患者血清P62抗体阳性率为23.4%,血清ANA的阳性率为82.8%,均高于结肠腺瘤患者(P<0.05);64例患者的结肠癌组织标本中有48例出现P62阳性表达,而PCNA在所有结肠癌患者的组织中均可见阳性表达。结论 P62、PCNA和ANA三种指标的联合检测对鉴别结肠癌的良、恶性鉴别,结肠癌早期诊断,恶性程度及预后评估均有重要参考意义。 展开更多
关键词 结肠肿瘤 基因 p62 抗体 抗核 增殖细胞核抗原 genes p62
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p62 expression in primary carcinomas of the digestive system
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作者 Hong-LiuQian Xuan-XianPeng +2 位作者 Shou-HuiChen Hui-MingYe Jing-HuaQiu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2005年第12期1788-1792,共5页
AIM: To characterize p62 expression and define the relationship between p62 expression and cell proliferation in primary carcinomas of the digestive system.METHODS: p62 expression was characterized in surgically resec... AIM: To characterize p62 expression and define the relationship between p62 expression and cell proliferation in primary carcinomas of the digestive system.METHODS: p62 expression was characterized in surgically resected tumor specimens from 60 patients with primary carcinomas of the digestive tract (including 22 esophageal carcinomas, 17 gastric carcinomas, and 21 colorectal carcinomas) and 40 patients with hepatocellular carcinoma (HCC) by immunohistochemistry (IHC). The cell proliferation was determined by IHC of Ki-67 in 40 patients with HCC.RESULTS: Twenty-two cases of esophageal carcinomawere histopathologically diagnosed as squamous cell carcinoma. We combined the gastric and colorectal carcinomas based on the equivalent histology. The 38tumors in the combined groups, consisted of 17 welldifferentiated, eight moderately differentiated, nine poorly differentiated carcinomas, and four mucinous adenocarcinomas. According to the criteria of Edmondson and Steiner, 40 patients with HCC were graded (2 grade Ⅰ, 17 grade Ⅱ and 21 grade Ⅲ). p62 expression in primary carcinomas of the gastrointestinal tract (60/60,100%)was higher than that (27/40, 67.5%) of HCC (P<0.01,χ2 = 19.63). High expression levels of p62 were positively correlated with histological grades in gastric and colorectal carcinomas (P<0.0001) and inversely associated with those in HCC (P = 0.0322). No significant correlations were observed for esophageal carcinomas (P = 0.8246).p62 expression was also detected in the cytoplasm of morphologically normal columnar epithelial cells adjacent to the cancer foci of gastric and colorectal carcinomas.In 40 HCC specimens, the mean Ki-67 labeling index (LI)was (19.6±16.0)%. It was (28.3±18.73)% in 12 cases with high p62 expression (+++), (7.53±14.83)% in 13 cases without p62 expression(-). Patients with a high p62expression showed a significantly higher level of Ki-67 staining than those without p62 expression (P<0.05, t = 2.069).CONCLUSION: p62 expression is common in carcinomas of the digestive system and higher in carcinomas of the gastrointestinal tract than in primary HCC. p62 is a cellular differentiation-related protein. Cancer cells with a high p62 expression exhibited highgrowth fractions in HCC. 展开更多
关键词 p62 KI-67 Hepatocellular carcinoma primary carcinomas of the digestive tract RNA-binding protein
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大潮气量机械通气对大鼠肺内自噬和线粒体损伤的影响 被引量:2
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作者 胡召锟 荆忍 +2 位作者 戴惠军 张随随 潘灵辉 《中华危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期325-330,共6页
目的探讨不同潮气量(VT)机械通气(MV)与大鼠肺内自噬和线粒体损伤的关系。方法采用随机数字表法将120只清洁级雄性SD大鼠分为5组(n=24),依次给予0(自主呼吸)、10、20、30、40 mL/kg VT进行MV;各组再按照通气时间分为1、2、3、4 h 4个亚... 目的探讨不同潮气量(VT)机械通气(MV)与大鼠肺内自噬和线粒体损伤的关系。方法采用随机数字表法将120只清洁级雄性SD大鼠分为5组(n=24),依次给予0(自主呼吸)、10、20、30、40 mL/kg VT进行MV;各组再按照通气时间分为1、2、3、4 h 4个亚组,每个亚组6只大鼠。收集各组肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),并体外培养肺泡巨噬细胞(AMs)和Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)或蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肺组织自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3B -Ⅱ(LC3B -Ⅱ)和自噬相关基因Beclin1、p62的mRNA及蛋白表达;透射电镜下观察肺组织自噬体形成情况;并检测三磷酸腺苷(ATP)、活性氧簇(ROS)和线粒体膜电位(MMP)水平,从而评估线粒体损伤情况。结果通气1 h各组间肺组织LC3B -Ⅱ、p62、Beclin1的mRNA及蛋白表达比较差异均无统计学意义。随通气时间延长,MV各组LC3B -Ⅱ、p62、Beclin1的mRNA及蛋白表达水平均逐渐升高,2~3 h达峰值,以30 mL/kg VT组升高更为显著,与自主呼吸组比较差异有统计学意义〔通气2 h:LC3B -ⅡmRNA(2^-ΔΔCt)为2.44±0.24比1.12±0.04,LC3B -Ⅱ/LC3B -Ⅰ为1.42±0.16比0.57±0.03,p62 mRNA(2^-ΔΔCt)为2.96±0.14比1.14±0.02,Beclin1 mRNA(2^-ΔΔCt)为2.80±0.13比1.14±0.02;通气3 h:p62/β-actin为1.14±0.15比0.55±0.04,Beclin1/β-actin为1.27±0.06比0.87±0.04,均P<0.05〕。透射电镜下观察显示,30 mL/kg VT通气2 h可在AECⅡ中观察到自噬体及自噬溶酶体,而在AECⅠ中均未观察到。与自主呼吸组比较,30 mL/kg VT通气2 h AMs内ATP合成明显下降(A值:0.82±0.05比1.00±0.00,P<0.05),AMs和AECⅡ中ROS累积明显增加〔AMs中ROS:(33.83±4.00)%比(6.90±0.62)%,AECⅡ中ROS:(80.68±0.90)%比(2.16±0.19)%,均P<0.05〕;且随着VT增加及通气时间延长,AMs和AECⅡ中ATP、ROS水平逐渐下降,40 mL/kg VT通气4 h AMs中ATP(A值)为0.41±0.05,AMs中ROS为(12.95±0.88)%,AECⅡ中ROS为(40.43±2.29)%。随VT增加及通气时间延长,MMP水平逐渐增加,30 mL/kg VT通气2 h AMs中MMP的绿色/红色荧光强度比值为1.11±0.17,AECⅡ中为0.96±0.04;40 mL/kg VT通气4 h AMs中MMP的绿色/红色荧光强度比值为0.51±0.07,AECⅡ中为0.49±0.06。结论大VT的MV可导致大鼠肺组织自噬激活和线粒体损伤,且随着通气时间延长,肺内自噬现象越来越明显。 展开更多
关键词 自噬 线粒体损伤 微管相关蛋白1轻链3B 自噬相关基因p62 自噬相关基因Beclin1
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