p62-Keap1-Nrf2信号通路在减轻NOD/SCID小鼠心肺复苏后心肌损伤中的作用

目的探讨p62-Keap1-Nrf2抗氧化信号通路在严重联合免疫缺陷小鼠心脏骤停(CA)心肺复苏(CPR)后心肌缺血-再灌注(I/R)损伤过程中的作用机制.方法应用免疫功能正常的雄性C57BL/6小鼠(80只)和严重联合免疫缺陷(NOD/SCID)小鼠(80只)复制高钾合并窒息心脏骤停心肺复苏模型,根据复苏后取材时间点不同将两种品系小鼠分别分为复苏前组和复苏后2h组、复苏后12 h组、复苏后24 h组及复苏后48 h组.观察各组小鼠自主循环恢复率(ROSC)、自主呼吸恢复率及48 h存活率.Western blot检测不同时间点两种小鼠心肌细胞中p62-Keap1-Nrf2信号通路相关蛋白的表达水平.透射电镜观察复苏后不同时间点线粒体形态.结果①两种小鼠心脏骤停心肺复苏后ROSC率和自主呼吸恢复率差异无统计学意义(P>0.05),但NOD/SCID小鼠较C57BL/6小鼠心脏骤停心肺复苏后48 h存活率明显降低(P<0.05).②与复苏前比较,C57BL/6小鼠心肌细胞p62和P-p62(Ser351)蛋白表达在复苏后2h时降低(P<0.01),复苏后12 h时升高(P<0.01),复苏后24 h和48 h时差异均无统计学意义(P>0.05),而在复苏后各时间点,NOD/SCID小鼠心肌细胞p62和P-p62(Ser351)蛋白表达呈逐渐增高趋势(P<0.叭).并且,NOD/SCID小鼠在复苏后2、24、48 h时心肌细胞中p62和P-p62(Ser351)蛋白表达均较C57BL/6小鼠明显增高(P<0.01).与复苏前比较,C57BL/6小鼠和NOD/SCID小鼠在心脏骤停心肺复苏后各时间点心肌细胞Keap1蛋白和细胞核Nrf2蛋白表达均明显增高.此外,与C57BL/6小鼠比较,NOD/SCID小鼠在复苏后各时间点心肌细胞Keap1蛋白表达均明显增高,而在复苏后2、12、48 h时NOD/SCID小鼠心肌细胞细胞核Nrf2蛋白均呈明显高表达(P<0.01).③C57BL/6小鼠在心肺复苏后心肌I/R损伤2h和12 h可见心肌组织中线粒体明显肿胀,大量自噬小体形成;而NOD/SCID小鼠在复苏后2h和12h也可见到线粒体明显肿胀,但自噬体形成却发生在复苏后24 h和复苏后48 h,并且自噬小体数目较少.结论 NOD/SCID小鼠由于存在线粒体自噬缺陷,其在心脏骤停心肺复苏后心肌I/R损伤早期并未及时启动线粒体自噬机制,机体主要通过p62-Keap1-Nrf2抗氧化信号通路来发挥保护作用.

茵陈蒿汤对重症急性胰腺炎大鼠相关急性肝损伤的作用及p62-keap1-Nrf2信号通路的影响

目的观察茵陈蒿汤对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠相关急性肝损伤的作用及p62-keap1-Nrf2信号通路的影响。方法将雄性8周龄SD大鼠30只均分为3组:假手术组、模型组和茵陈蒿汤组。模型组与茵陈蒿汤组用逆行胰胆管注射5%牛磺胆酸钠建立SAP模型,以0.2 m L/min的均匀速度注射到胆管内。假手术组注射等量生理盐水。造模2 h后茵陈蒿汤组以5 g/kg进行灌胃,对照组和模型组给予等量生理盐水。24 h后处死大鼠后进行相关检测。结果假手术组未见病理损害,模型组和茵陈蒿汤组出现不同程度的小叶中心肝细胞坏死,肝细胞颗粒变性,炎性细胞浸润,但茵陈蒿汤组的病理损伤较模型组明显减轻。与假手术组比较,模型组和茵陈蒿汤组大鼠肝脏系数均增高、血清中血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(GOT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量均增高,肝组织中p62、keap1和Nrf2蛋白表达均增高;与模型组比较,茵陈蒿汤组大鼠肝脏系数降低,血清中AMY、ALT、GOT、TNF-α和IL-1β含量均降低,肝组织中p62、keap1和Nrf2蛋白表达均降低。结论茵陈蒿汤能通过抑制p62-keap1-Nrf2信号通路从而减轻SAP大鼠急性肝损伤。

对乙酰氨基酚诱导小鼠急性肝损伤中p62-keap1-Nrf2信号通路变化

目的检测对乙酰氨基酚(acetaminophen,APAP)诱导小鼠急性肝损伤中p62-keap1-Nrf2抗氧化信号通路变化。方法 40只C57/BL6小鼠建立急性肝损伤剂量-反应模型,随机分为4组:对照组、APAP低剂量组(180 mg/kg)、APAP中剂量组(300 mg/kg)和APAP高剂量组(500 mg/kg),每组10只。禁食12 h后,腹腔注射0.9%氯化钠溶液或APAP溶液,24 h后摘眼球取血。另取60只小鼠建立时间-反应模型,对照组给0.9%氯化钠溶液,染毒组腹腔注射300 mg/kg APAP后,分别于3、6、12、24和48 h各取10只小鼠摘眼球取血测生化指标。以上小鼠均剪取肝同一部位做病理切片,HE染色检测病理损伤。并匀浆肝组织提取蛋白,利用Western blot检测p62-keap1-Nrf2信号通路相关蛋白的表达水平,荧光定量PCR技术检测抗氧化基因的相对表达。结果剂量-反应模型中,APAP处理组与对照组相比,肝脏系数明显增大(P<0.05);ALT、AST水平显著升高(P<0.05);肝病理切片显示APAP处理组出现不同程度肝细胞坏死;p62-keap1-Nrf2通路相关蛋白p62、p-p62、Keap1、Nrf2胞浆及胞核蛋白表达增加;而抗氧化基因HO-1、GCLC相对表达量下降。时间-反应模型中,APAP处理组小鼠ALT、AST水平明显高于对照组,呈时间反应趋势,24 h达到峰值;抗氧化基因HO-1、GCLC在3和6 h表达明显增加(P<0.05),12、24和48 h急剧下降至较低水平。结论对乙酰氨基酚诱导的小鼠急性肝损伤中,p62-keap1-Nrf2信号通路激活,Nrf2可能在APAP肝损伤早期通过激活抗氧化相关基因表达发挥作用。

下调脂滴包被蛋白2抑制人胃癌细胞系NCI-N87增殖

目的研究脂滴包被蛋白2(perilipin2)在胃癌中的表达及对癌细胞增殖、侵袭及迁移的影响及其机制。方法采用人正常胃黏膜细胞系GES-1和人胃癌细胞系NCI-N87,将NCI-N87细胞分为对照组(不作任何处理)、NC-shRNA组(转染10μg NC-shRNA重组慢病毒质粒)、perilipin2-shRNA组(转染10μg perilipin2-shRNA重组慢病毒质粒)。用CCK8法检测细胞增殖率;用Transwell小室法检测细胞侵袭能力;用划痕实验检测细胞迁移能力;用Western blot检测细胞中perilipin2、p62、Kelch样ECH相关蛋白1(keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)通路相关蛋白表达。结果NCI-N87细胞中的perilipin2蛋白表达量显著高于GES-1细胞(P<0.05);6、12、24、36和48 h时,perilipin2-shRNA组NCI-N87细胞增殖率较对照组、NC-shRNA组低(P<0.05);perilipin2-shRNA组穿过小室膜细胞数较对照组、NC-shRNA组低(P<0.05);perilipin2-shRNA组划痕间距较对照组、NC-shRNA组宽(P<0.05);perilipin2-shRNA组NCI-N87细胞中的perilipin2、p62、keap1、Nrf2蛋白表达量较对照组、NC-shRNA组低(P<0.05)。结论Perilipin2在胃癌中呈高表达,下调perilipin2表达能够抑制NCI-N87细胞增殖、侵袭及迁移,其机制可能与p62-keap1-Nrf2通路受阻有关。