核因子NF-κB p65亚基TAD的克隆及表达

目的获得NF-κB p65亚基转录激活区域(transcription activation dom ain,TAD),构建真核表达载体并在内皮细胞中检测其表达。方法培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,经RT-PCR得到p65 TAD基因片段,测序正确后插入带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1,构建表达载体pEGFP-N1-p65 TAD,然后转染内皮细胞,荧光显微镜下观察表达情况,同时用W estern b lot分析蛋白的表达。结果有效地扩增了p65 TAD 783 bp的目的基因片段。酶切结果表明所构建的含p65 TAD基因的质粒与设计相同。p65 TAD在脐静脉内皮细胞中得到了高效的表达。结论成功地构建了p65 TAD的真核表达载体并实现了在内皮细胞中的高效表达。

核因子κB p65亚基与大肠癌的相关性研究

目的探讨NF-κB p65亚基表达与大肠癌临床病理指标的关系。方法采用免疫组化En Vision二步法测定65例大肠癌组织及42例癌旁组织中NF-κB p65亚基的表达。结果大肠癌组织中NF-κB p65亚基表达阳性率明显高于癌旁组织(P<0.01),中高分化大肠癌阳性率高于低分化大肠癌(P<0.01);不同性别、年龄、淋巴结转移、Dukes分期、肿瘤大小及部位p65表达无显著性差异(P>0.05)。结论NF-κB p65亚基是大肠癌相关因子,在大肠癌的发生发展中起重要作用。

IGF⁃1、TNF⁃α、NF⁃κB p65亚基预测胫骨平台骨折术后愈合延迟的价值

目的探究血清胰岛素样生长因子⁃1(IGF⁃1)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)和核转录因子κB亚基p65(NF⁃κB p65)在胫骨平台骨折术后愈合延迟患者中的表达水平,分析其对骨折愈合延迟的预测价值。方法选取2019年8月至2020年8月本院骨科收治的178例胫骨平台骨折患者,根据患者术后骨折愈合情况分为延迟愈合组(n=34)和正常愈合组(n=144),比较两组患者不同时间点血清IGF⁃1、TNF⁃α和NF⁃κB p65亚基的表达水平,采用受试者工作特征曲线(ROC)评估以上指标预测患者愈合延迟的价值。结果术后4、8和12周,延迟愈合组患者的血清IGF⁃1水平明显低于正常愈合组,差异均有统计学意义(P<0.05)。术后1、4、8和12周,延迟愈合组患者的TNF⁃α、NF⁃κB p65亚基表达水平明显高于正常愈合组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,IGF⁃1、TNF⁃α和NF⁃κB p65三者联合检测胫骨平台骨折术后愈合延迟的敏感度和特异度分别为92.30%、76.90%,AUC值为0.863,明显高于单个指标检测(P<0.05)。结论血清IGF⁃1、TNF⁃α和NF⁃κB p65亚基的表达水平与胫骨平台骨折术后愈合延迟密切相关,可作为预测胫骨平台骨折术后愈合延迟的良好指标,联合检测可提高预测准确性。

重组人核因子κB亚基p65在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

将扩增得到的核因子(NF)κB亚基p65基因片段克隆至测序载体pGEM-T,测序验证该序列为预期目的片段后,再将该基因片段克隆至表达载体pGEX-4T2中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,用GST蛋白亲和柱纯化融合蛋白p65/GST,Western印迹验证该蛋白具有NF-κB抗原活性。结果表明,构建了NF-κBp65/GST融合表达载体,并表达和纯化了NF-κBp65/GST融合蛋白,为进一步研究NF-κB的功能和筛选NF-κB拮抗分子奠定了基础。

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及LOX-1、NF-κBp65表达的影响

目的探讨3-羟-3-甲基戊二酰辅酶A(HMG-Co A)还原酶抑制剂瑞舒伐他汀对载脂蛋白E(Apo E)基因缺陷小鼠动脉粥样硬化及主动脉凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB p65(NF-κB p65)表达的影响。方法 20只6周龄雄性Apo E基因缺陷小鼠随机分为高脂模型组(n=10)、瑞舒伐他汀药物干预组(n=10),高脂饮食喂养13周;10只6周龄C57BL/6J(野生型,W T)雄性小鼠作为正常对照组,正常饮食喂养13周。13周后,摘眼球取血测定血浆总胆固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的水平。处死小鼠取主动脉,行HE染色;采用Western blotting和RT-PCR检测定量分析主动脉组织LOX-1、NF-κB p65表达变化。结果与高脂模型组比较,瑞舒伐他汀药物干预组血清中TCH、TG、LDL-C水平明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常对照组相比,高脂模型组主动脉粥样硬化病变程度明显加重,瑞舒伐他汀药物干预组主动脉粥样硬化病变程度减轻。与正常对照组相比,高脂模型组主动脉LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均明显增加(P<0.05),瑞舒伐他汀药物干预组LOX-1、NF-κB p65蛋白和m RNA的表达均减少(P<0.05)。结论瑞舒伐他汀可明显降低血脂,减轻Apo E基因缺陷小鼠主动脉组织粥样硬化病变程度,其抗动脉粥样硬化作用可能与下调LOX-1、NF-κB p65的表达有关。

人外周血中NF-κB p65定量检测方法的建立及临床应用

目的建立一种能定量测定人外周血中核转录因子-κB(nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB)p65活化量的检测方法。方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,从细胞核成分中提取核蛋白,应用Bradford法进行核蛋白定量,以识别NF-κB p65不同抗原表位的2种抗NF-κB单克隆抗体为基础,建立可定量检测人外周血NF-κBp65活化量水平的双抗体夹心酶联免疫吸附实验法。应用已建立的NF-κB p65定量检测方法测定了68例微小病变型肾病综合征患者和20名健康人外周血中NF-κB p65活化量。结果本方法批内、批间变异系数分别为(9.78±3.99)%、(12.51±4.53)%,灵敏度为0.030mg/L,平均回收率为95.8%。与NF-κB突变型寡核苷酸不发生交叉反应。微小病变型肾病综合征患者治疗前外周血中NF-κB p65活化量较健康人显著增高(P<0.01),治疗后与治疗前NF-κB p65活化量差异有统计学意义(P<0.01),但与健康人NF-κB p65活化量差异无统计学意义(P>0.05)。结论本研究建立的人外周血中NF-κB p65活化量定量检测方法快速、特异且可靠,为临床监测NF-κB p65活化情况提供了条件。

早期百草枯中毒大鼠肺和肝组织NF-кB p65、MCP-1 mRNA表达的变化

目的探讨百草枯(PQ)中毒的分子机制。方法应用半定量RT-PCR法检测PQ中毒大鼠染毒4h后肺、肝组织核因子-κB p65(NF-кB p65)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达,并与正常对照组比较。结果大鼠PQ染毒4h后,肺、肝组织NF-кB p65、MCP-1 mRNA的表达明显上调,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论PQ中毒大鼠4h内肺、肝组织NF-кB p65、MCP-1 mRNA表达就已明显上调,提示在PQ致机体中毒的毒性过程中,早期就有细胞因子的参与。

血红素氧合酶-1对大鼠肝脏缺血再灌注NF-κBp65和细胞凋亡的影响

目的探讨血红素氧合酶-1(HO-1)对大鼠肝脏缺血再灌注NF-κB P65、细胞凋亡的影响。方法SD大鼠采用随机数字表法分成5组:正常组(N),假手术组(S),手术组(I/R建立肝脏缺血再灌注损伤模型),手术给药Ⅰ组(I/R+hemin),手术给药Ⅱ组(I/R+Zn PP),手术后6 h、12 h下腔静脉取血分离血清检测血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)。Western blot方法测定肝脏NF-κB p65的表达,免疫组化方法测定肝脏Fas蛋白的表达。结果 1hemin组ALT、AST较I/R组及Zn PP组明显降低(P<0.01);2肝组织NF-κB p65的表达:hemin组NF-κB p65表达比同期I/R组减少(P<0.01);Zn PP组NF-κB p65表达比同期I/R组增多(P<0.01);3肝组织Fas:hemin组Fas表达减少(P<0.05),Zn PP组Fas表达明显增多(P<0.01)。结论 HO-1对肝脏缺血/再灌注损伤的保护作用与NF-κBP65密切相关,可能通过抑制NF-κB p65的活性来减少细胞凋亡。

GST-pulldown体外研究LRP16与NF-κB/p65相互作用的功能表位

目的:构建核转录因子NF-κB/p65亚基的功能表位载体,采用GST-pulldown探究p65与LRP16体外相互作用的功能表位。方法:以真核表达质粒pcDNA3.1-p65为模板,PCR扩增一组p65功能表位的基因片段,经测序后,克隆至pcDNA3-flag载体上,用BamHⅠ/XhoⅠ双酶切重组质粒鉴定目的片段大小,然后采用GST-pulldown实验验证LRP16与p65之间的相互作用。结果:构建了p65的5个功能表位的表达载体且可用于体外转录翻译,GST-pulldown体外研究表明,p65蛋白N端RHD结构域是与LRP16相互作用所必需的,p65的RHD结构域的缺失完全消除了p65与LRP16的体外相互作用。结论:GST-pulldown实验验证了LRP16与p65存在体外直接相互作用,并具体分析了LRP16与p65相互作用的表位。

己酮可可碱抑制人卵巢癌HO-8910PM细胞AnnexinⅡ、NF-κB p65蛋白的表达

目的观察己酮可可碱(PTX)对体外培养的人卵巢癌细胞增殖及其AnnexinⅡ、NF-κB p65蛋白表达的影响。方法不同浓度PTX作用于人卵巢癌细胞HO-8910PM,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对HO-8910PM增殖的影响;采用免疫细胞化学方法检测PTX作用前后HO-8910PM细胞AnnexinⅡ、NF-κBp65蛋白表达的变化。结果 MTT结果显示:不同浓度PTX(0.25～2.0mg/ml)作用于HO-8910PM细胞12、24、48、72h,均可不同程度抑制细胞增殖,同一时间段各浓度PTX作用组与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),各浓度PTX作用组组内两两相比差异有统计学意义(P<0.05)。PTX同一浓度组各时间点两两相比细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学显示:以不同浓度的PTX(0.5～2.0mg/ml)作用HO-8910PM细胞24、48、72h后,AnnexinⅡ蛋白较空白对照组有所降低;同一时间段内AnnexinⅡ蛋白表达呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05),同一剂量组AnnexinⅡ蛋白表达呈时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度PTX(0.5～2.0mg/ml)作用于HO-8910PM细胞24、48、72h后,NF-κBp65蛋白的表达均有所降低,也呈时间和浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PTX可能通过抑制HO-8910PM卵巢癌细胞AnnexinⅡ、NF-κBp65蛋白表达而抑制其增殖。

低压冷停搏液灌注对大鼠心肌NF-κB p65表达水平的影响

目的:研究观察不同压力心脏停搏液灌注对离体大鼠心脏核因子κB亚基p65亲和肽(NF-κBp65)表达的影响,为体外循环术中心肌保护提供新的方法和思路。方法:选择健康SD大鼠30只,随机分为对照组、低压灌注组和高压灌注组,每组10只。对照组于麻醉后切开胸腔取正常心肌备检;低压灌注组麻醉后切开胸腔取出心脏,建立离体Langendorff灌注模型,以50mmHg的压力灌注4℃的St.Thomas心脏停搏液5min,然后取出心肌标本备检;高压灌注组麻醉后切开胸腔取出心脏,建立离体Langendorff灌注模型,以100mmHg的压力灌注4℃的St.Thomas心脏停搏液5min,然后取出心肌标本备检。运用Westernblot免疫组化的方法从蛋白水平观察大鼠心肌NF-κBp65在不同实验组中的表达规律。结果:免疫组化提示,与正常对照组(80.1±9.10)相比,不同压力停搏液灌注后大鼠心肌NF-κBp65表达均升高,但低压灌注组心肌的NF-κBp65表达水平(117.5±15.5)明显低于高压灌注组(226.7±12.5)(P<0.05);同样,Westernblot方法检测出的NF-κBp65蛋白相对光密度值也有相同的结果,高压灌注组NF-κBp65相对光密度值(1.58±0.13)明显高于对照组(0.44±0.05)和低压灌注组(0.95±0.05)(P<0.05)。结论:不同压力心脏停搏液灌注下,大鼠心肌的NF-κBp65均有不同程度的表达,但低压灌注组的NF-κBp65的表达水平明显低于高压灌注组,可能对心肌会有更好的保护作用。

脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-9的影响及可能机制

目的探讨脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth musch cell,VSMC)表达基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的影响及可能的分子机制。方法贴块法进行血管平滑肌细胞培养,细胞免疫化学检测MMP-9的蛋白表达及核因子NF-κB激活情况,原位分子杂交分析MMP-9mRNA表达。结果LPS是MMP-9的强诱导物,可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达,LPS对其诱导作用强度与LPS的浓度呈正相关。与正常组比较LPS刺激15min即有NF-κB p65核转移,30min达高峰,1h后减弱。结论LPS诱导平滑肌细胞MMP-9表达,其作用呈浓度时间依赖性,MMP-9表达升高可能与LPS激活NF-κB有关。MMP-9表达升高和NF-κB激活提示LPS在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用。

LPS触发的TLR4对NF-κB和IRF3信号通路的调控差异

目的探讨脂多糖(LPS)触发的Toll样受体4(TLR4)对NF-κB和干扰素调节因子3(IRF3)信号通路的调控差异。方法 LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞,用免疫荧光法检测TLR4及两种转录因子p65及IRF3的定位,用Western blot方法检测转录因子p65和IFR3的磷酸化水平。结果巨噬细胞经LPS刺激30 min内,细胞膜上的TLR4荧光强度增加(P<0.01),胞质中TLR4荧光强度显著增加(P<0.01),且与早期内体抗原1(early endosome antigen 1,EEA1)共定位;当LPS刺激90和180 min时,胞膜和胞质内的TLR4信号均显著下降(P<0.01),与EEA1共定位的信号也明显减少(P<0.01)。静息状态下,TLR4的下游信号通路分子p65和IRF3的荧光信号均出现在胞质中;LPS刺激后,两者的荧光信号在细胞核中逐渐增加(P<0.05),但p65荧光信号比IRF3增强得更早,且更持久。p65磷酸化的修饰也明显早于IRF3,且持续时间更长。结论 TLR4活化后的定位变化导致其下游IRF3信号通路的传递时间明显延后,且比NF-κB信号通路短暂。

探究芩柏加减方通过NF-κB/TNF-α信号通路对溃疡性结肠炎的保护机制

目的通过网络药理学和动物实验探讨芩柏加减方通过核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)信号通路对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的保护机制。方法将48只SPF级SD大鼠利用2,4,6-三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)建立UC模型,造模成功后随机分为模型组(以生理盐水灌肠)、奥沙拉嗪组(以200 mg/kg奥沙拉嗪灌肠)、芩柏加减方低剂量组(以1.43 g/kg芩柏加减方灌肠)和芩柏加减方高剂量组(以2.86 g/kg芩柏加减方灌肠),每组12只,每天灌肠2次,连续14 d,另取12只正常饲养的SD大鼠作为正常对照组。于给药第1、7、14天每组随机取4只大鼠进行麻醉采血并取结肠组织。采用免疫组织化学法检测结肠组织中核因子κB亚基p65亲和肽(nuclear factorκB p65,NF-κB p65)、TNF-α、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达来评价芩柏加减方对UC大鼠的影响,同时采用TUNEL荧光法检测评价大鼠结肠组织细胞调亡情况;利用ELISA法评价血清中细胞因子NF-κB p65、TNF-α、IL-10、Caspase-3的水平差异变化情况。结果通过网络药理学富集分析发现芩柏加减方中5种主要活性成分与UC成明显相关性且与NF-κB p65/TNF-α信号通路密切相关。经UC造模发现:与正常对照组比较,模型组大鼠结肠组织中TNF-α、Caspase-3和NF-κB p65水平均升高(P<0.05),IL-10水平显著降低(P<0.05)。HE染色结果显示,正常对照组大鼠结肠腺体排列整齐,未见炎性浸润;模型组的结肠腺体排列紊乱,肌底膜断裂且伴有明显的炎性浸润,凋亡指数相比正常对照组均升高(P<0.05);奥沙拉嗪组及芩柏加减方低、高剂量组随着给药时间的延长,结肠病理损伤均得到不同程度的缓解。经检测给药14 d后,血清中TNF-α、Caspase-3、IL-10和NF-κB p65水平结果与组织病理检测结果高度一致性。相比模型组,奥沙拉嗪组、芩柏加减方高剂量组大鼠血清中TNF-α、Caspase-3和NF-κB p65含量明显降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05)。结论芩柏加减方对TNBS诱导的UC模型具有一定保护作用,能降低细胞凋亡指数,可能是通过调节NF-κB/TNF-α信号通路来降低炎症因子分泌、减轻机体炎症反应、提高抗炎因子表达、促进黏膜愈合来实现。

四硝酸戊赤藓醇和小鼠核因子κB亚基p65亲和肽在上皮性卵巢癌中的表达及与顺铂耐药性的研究

目的探讨四硝酸戊赤藓醇(PTEN)和小鼠核因子κB亚基p65亲和肽(NFκB p65)在上皮性卵巢癌中的表达以及与患者顺铂耐药性及预后的关系。方法选取2009年1月-2015年12月在河北医科大学第四医院妇产科治疗的161例上皮性卵巢癌患者,并根据患者对顺铂化疗的敏感性分为敏感组82例和耐药组79例。免疫组化检测患者肿瘤组织中PTEN和NFκB p65蛋白的表达,分析PTEN和NFκB p65蛋白表达与上皮性卵巢癌患者顺铂耐药的关系。Cox回归模型分析上皮性卵巢癌患者预后的独立危险因素。结果 68.29%的敏感组患者肿瘤组织中表达NFκB p65蛋白,明显低于耐药组患者(94.94%);50.0%的敏感组患者肿瘤组织中表达PTEN蛋白,明显高于耐药组患者(17.72%)。上皮性卵巢癌患者卵巢组织中NFκB p65蛋白表达与PTEN蛋白呈显著负相关(r_s=-0.246,P=0.002)。NFκB p65和PTEN蛋白以及手术分期是卵巢癌患者发生耐药的独立危险因素(P<0.05)。结论 PTEN蛋白低表达或NFκB p65蛋白高表达是上皮性卵巢癌患者发生耐药性的独立危险因素。

肾康灵汤剂联合强的松治疗阿霉素肾病大鼠的作用机制

目的:研究肾康灵联合强的松治疗阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy)大鼠的作用机制。方法:除正常对照组18只外,雄性SD大鼠48只经尾静脉一次性注射阿霉素5.5mg/kg建立大鼠阿霉素肾病模型。造模2周后将造模成功的大鼠随机分成模型组、强的松组、肾康灵组及肾康灵加强的松组,每组12只,分别予相应的药物灌胃治疗。于造模2周及治疗后1、2、3周收集尿液检测24h尿蛋白含量;从眼眶后静脉丛采血,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量,硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(nitric oxide,NO)含量;于造模2周和治疗3周后,取大鼠脾脏及肾脏,采用ActiveMotif的专利技术检测脾脏单个核细胞中核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65含量变化,并分析以上指标间的相关性;透射电子显微镜观察肾小球足突改变。结果:单独应用强的松或肾康灵治疗后,大鼠NF-κB p65、TNF-α、NO及24h尿蛋白含量较模型组降低(P<0.01),融合的足突仅有部分恢复正常。肾康灵加强的松联合治疗可显著降低模型大鼠单个核细胞的NF-κB p65含量(P<0.01)、血清NO水平(P<0.01)和24h尿蛋白的排出量(P<0.05),并使融合的足突大部分恢复正常。肾康灵和强的松对血清TNF-α含量的降低无交互作用。结论:肾康灵加强的松联合治疗能延缓和改善阿霉素引起的肾损害,其作用机制可能与抑制NF-κB的异常活化,减少血清TNF-α及NO等炎症性因子的产生有关。

HIF-1α和RelA基因在急进高原正常人外周血单个核细胞中的表达及其与急性高原反应的关联性

目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入高原后48h采集外周血,提取单个核细胞中的mRNA和蛋白,采用RT-PCR方法检测RelA和HIF-1αmRNA表达水平,Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达水平。Spearman相关分析法分析RelA和HIF-1α基因表达与AMS发生的相关性。结果:与急进高原前比较,进入高原后HIF-1α和RelA mRNA及HIF-1α蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);HIF-1αmRNA和RelA mRNA表达呈正相关关系(r=0.806,P<0.01);HIF-1α蛋白表达与AMS的发生率呈正相关关系(r=0.875,P<0.01);HIF-1α和RelA表达不同性别之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HIF-1α蛋白表达水平可作为预测和干预AMS的监测指标。急进高原后HIF-1α和RelA mRNA表达水平显著增加且呈显著正相关关系,提示在其信号传导通路之间存在cross-talk现象。

核因子NF-κB p65下调对蛋白激酶抑制宫颈癌HeLa细胞增殖及侵袭的影响

目的 :探讨下调核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)p65对宫颈癌HeLa细胞体外增殖和侵袭能力的影响及可能的分子机制。方法 :构建靶向NF-κB p65基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)重组载体pSilencer-NF-κB p65-shRNA,并用脂质体法转入HeLa细胞;采用半定量RT-PCR法检测转染pSilencer-NF-κB p65-shRNA后对NF-κB p65及蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)mRNA表达的影响;蛋白质印迹法检测对NF-κB p65和PKR蛋白,以及PKR和其下游底物真核细胞翻译启始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)蛋白磷酸化的影响;采用MTT法检测NF-κB p65基因沉默后对HeLa细胞增殖活性的影响;Transwell小室法检测对HeLa细胞侵袭能力的影响。结果 :成功构建了重组载体pSilencer-NF-κB p65-shRNA;在沉默NF-κB p65 mRNA及蛋白表达的基础上,PKR mRNA及蛋白(包括磷酸化-PKR)的表达水平均明显上调(P均<0.05),磷酸化-eIF2α蛋白的表达水平亦明显上调(P<0.05),而HeLa细胞的增殖及侵袭能力显著降低(P<0.05和P<0.01)。结论 :NF-κB p65可通过下调PKR的表达及活性,抑制PKR/eIF2α转导通路的激活,促进HeLa细胞的增殖及侵袭能力,在宫颈癌的发生和发展过程中可能起重要作用。

利多卡因对肿瘤坏死因子α诱导中性粒细胞凋亡的影响(英文)

背景:利多卡因被认为有抗炎作用,而其作用机制不清。核转录因子κB是炎症反应的关键环节。目的:观察利多卡因对人体中性粒细胞核转录因子κB激活和中性粒细胞凋亡的影响。设计、时间及地点:对比观察,于2006-10/2007-02在江苏省麻醉学重点实验室完成。材料:肿瘤坏死因子α(O127:B8)购于Sigma公司;外周血标本健康者,受试者知情同意。方法:人体中性粒细胞分为5组:生理盐水对照组、肿瘤坏死因子α组、肿瘤坏死因子α+利多卡因1.0mmol/L组、肿瘤坏死因子α+利多卡因2.0mmol/L组、肿瘤坏死因子α+利多卡因4.0mmol/L组,共同孵育3h。主要观察指标:以反转录聚合酶链反应及免疫印迹法检测利多卡因对核转录因子κBmRNA和I-κBmRNA表达及蛋白含量的影响。孵育12h和24h,以流式细胞术分析对中性粒细胞凋亡的影响。结果:利多卡因组核转录因子κBmRNA表达显著降低,而I-κBmRNA表达显著增加。并且利多卡因2.0mmol/L组和4.0mmol/L组显著优于1.0mmol/L组(P<0.05),而2.0mmol/L组和4.0mmol/L组之间差异不显著(P>0.05)。利多卡因在12h和24h都可以显著抑制肿瘤坏死因子α诱导的外周血中性粒细胞凋亡(P<0.05),而4.0mmol/L组显著优于1.0mmol/L组(P<0.05)。结论:利多卡因1.0,2.0,4.0mmol/L都可以显著下调肿瘤坏死因子α诱导的外周血中性粒细胞P65mRNA的表达,并且在12和24h可以部分逆转肿瘤坏死因子α诱导的中性粒细胞凋亡。

利多卡因对中性粒细胞NF-κB的表达和TNF-α诱导的中性粒细胞凋亡的离体研究

目的:观察利多卡因(lidocaine)对人体中性粒细胞(PMN)NF-κB的激活和PMN凋亡的影响。方法:将分离的人体PMN分为以下几个给药组:生理盐水对照组;TNF-α组(200ng/L);TNF-α+lidocaine组(1.0mmol/L);TNF-α+lidocaine组(2.0mmol/L);TNF-α+lidocaine组(4.0mmol/L)共同孵育3h,用免疫蛋白印迹法观察利多卡因对NF-κB mRNA及其抑制因子(I-κB)mRNA表达,PCR法观察对蛋白含量的影响,以及流式细胞仪方法观察孵育12、24h后对PMN凋亡的影响。结果:利多卡因组NF-κB mRNA表达显著降低,而I-κB mRNA表达显著增加;并且利多卡因2.0mmol/L组和4.0mmol/L组显著优于1.0mmol/L组(P<0.05),而2.0mmol/L组和4.0mmol/L组之间差异无统计学意义。利多卡因在12、24h(P<0.05)都可以显著抑制TNF-α诱导的PMN凋亡,而4.0mmol/L组显著优于1.0mmol/L组抗凋亡效果(P<0.05)。结论:利多卡因1.0、2.0、4.0mmol/L都可以显著下调TNF-α诱导的PMNp65mRNA的表达,并且在12、24h可以部分逆转TNF-α诱导的PMN凋亡。