间充质干细胞外泌体调节哺乳动物雷帕霉素靶点/p70核糖体蛋白S6激酶/盘卷肌球蛋白样Bcl-2-相互作用蛋白通路改善糖尿病肾病大鼠肾损伤的机制研究

目的探讨间充质干细胞外泌体(MSC-EVs)通过调节哺乳动物雷帕霉素靶点(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(S6K1)/盘卷肌球蛋白样Bcl-2-相互作用蛋白(Beclin 1)通路改善糖尿病肾病(DN)大鼠肾损伤的机制。方法采用高脂饮食联合腹腔链脲佐菌素(STZ)注射的方法建立SD大鼠DN模型,随机分为模型组、MSC-EVs组、MSC-EVs+MHY1485(mTOR激活剂)组,每组12只。另取12只SD大鼠以正常饲料喂养6周后,腹腔注射同等剂量柠檬酸钠溶液作为对照。以MSC-EVs和MHY1485分组处理后,检测大鼠血糖及肾功能指标[血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、尿微量白蛋白(UmALB)]水平。采用苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肾组织病理形态;采用免疫组化检测各组大鼠肾组织mTOR/S6K1/Beclin 1通路相关蛋白表达;采用蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肾组织mTOR/S6K1/Beclin 1通路及自噬相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠肾组织形态发生损伤,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著升高(P<0.05),微管相关蛋白1A/1B轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著降低(P<0.05);与模型组相比,MSC-EVs组大鼠肾组织形态损伤减轻,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著降低(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著升高(P<0.05);与MSC-EVs组相比,MSC-EVs+MHY1485组大鼠肾组织形态损伤加重,血糖、BUN、Scr、UmALB、p-mTOR及p-S6K1相对阳性表达、p-mTOR/mTOR、p-S6K1/S6K1显著升高(P<0.05),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin 1蛋白表达、Beclin 1相对阳性表达显著降低(P<0.05)。结论MSC-EVs可增强自噬,降低DN大鼠血糖、SCr、BUN和尿蛋白水平,减轻肾组织损伤,其机制可能与抑制mTOR/S6K1/Beclin 1通路激活有关。

核糖体S6蛋白激酶p90^(rsk)与卵母细胞减数分裂

丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)信号途径对减数分裂有重要调节作用 ,p90 rsk是迄今研究最清楚的MAPK下游靶分子 ,介导MAPK途径在卵母细胞减数分裂中的多种功能 ,包括卵母细胞减数分裂的启动、MⅠ /MⅡ期转化和MⅡ期阻滞的维持等 .p90 rsk的磷酸化是MAPK激活的结果 ,而细胞退出减数分裂时 ,p90 rsk的去磷酸化也发生在MAPK失活以后 .介绍了在卵母细胞中 p90 rsk的研究进展 .

p90核糖体S6蛋白激酶家族与恶性肿瘤

p90核糖体S6蛋白激酶(ribosomal S6 kinase,RSK)为Ras信号转导通路下游途径的重要调控因子,对Ras通路起调控作用。近年发现RSK家族与恶性肿瘤发生、发展密切相关。本文就RSK家族与恶性肿瘤的关系作简要综述。

核糖体S6蛋白激酶4和热休克蛋白90在乳腺癌中的表达情况及其与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨核糖体S6蛋白激酶4(RSK4)和热休克蛋白90(HSP90)在乳腺癌中的表达情况及其与患者临床病理及预后的关系。方法采用免疫组织化学法检测72例手术切除的乳腺癌组织和72例癌旁组织的RSK4和HSP90蛋白的表达情况,分析不同临床病理特征患者RSK4和HSP90蛋白的表达情况,比较不同RSK4和HSP90表达水平患者的生存期。结果 RSK4蛋白在乳腺癌癌旁组织中的阳性表达率高于癌组织(P<0.05),HSP90蛋白在乳腺癌癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织(P<0.05),在乳腺癌组织中RSK4与HSP90蛋白的表达呈负相关(P<0.05)。不同分化程度、TNM分期患者的乳腺癌组织RSK4蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),不同肿瘤大小、有无淋巴结转移、不同组织学分化、不同TNM分期患者乳腺癌组织的HSP90蛋白阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RSK4蛋白阳性表达患者的中位生存期为71个月,多于RSK4蛋白阴性表达患者的54个月(P<0.05),HSP90蛋白阳性表达患者的中位生存期为41个月,少于HSP90蛋白阴性表达患者的82个月(P<0.05)。结论乳腺癌组织中RSK4的表达降低,HSP90的表达升高,RSK4和HSP90在乳腺癌中可能通过某些通道存在相互影响的关系。

食管鳞状细胞癌组织中RSK4、p63的表达变化及意义

目的探讨食管鳞状细胞癌(鳞癌)组织中核糖体S6蛋白激酶4(RSK4)、p63的表达变化及意义。方法收集食管鳞癌活检标本72例份,应用免疫组织化学EnVision两步法检测癌组织中RSK4、p63蛋白表达,染色结果采用半定量分析。选取食管鳞状细胞癌细胞系TE-11、TE-10及正常食管细胞Het-1A,分别采用qRT-PCR法、Western blotting法检测RSK4、p63 mRNA及蛋白表达。采用Kaplan-Meier法及Cox风险回归模型对患者进行生存分析。结果食管鳞状细胞癌组织中RSK4蛋白阳性表达率为62.5%(45/72),p63蛋白阳性表达率为83.3%(60/72)。食管鳞状细胞癌细胞系(TE-11、TE-10)中RSK4、p63基因的mRNA和蛋白表达均高于正常食管细胞Het-1A(P均<0.05)。Kaplan-Meier法生存分析结果显示,RSK4阳性表达与食管癌患者预后不良相关(P<0.05),且分期、组织分化程度、淋巴结转移等均是影响患者生存期的因素(P均<0.05);p63表达与患者临床病理特征及预后均无关(P均>0.05)。Cox回归模型分析结果显示,RSK4阳性表达、pT分期、组织分化程度、淋巴结转移与食管癌患者生存有关(P均<0.05)。结论RSK4与p63在食管鳞状细胞癌组织中呈异常表达,RSK4可作为潜在食管癌分期的分子标志物及预后评估因子。

补虚化瘀法对产后抑郁低雌激素大鼠海马核糖体S6激酶和丝裂原活化细胞外调节激酶1的影响

探讨补虚化瘀方药参归仁合剂对产后抑郁大鼠海马神经元内胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路的影响,测定P90核糖体S6激酶(RSK1)和丝裂原活化细胞外调节激酶1(MEK1)蛋白表达量。用56只雌性大鼠分为正常组、模型组、参归仁高、中、低剂量组(7、3.6、1.8 g·kg^(-1)·d^(-1))、盐酸舍曲林组(4.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、苯甲酸雌二醇组(10μg·d^(-1))。除正常组外,其余各组均采用苯甲酸雌二醇和黄体酮造模,模拟产后抑郁状态。使用蛋白质免疫印迹法检测其海马P-RSK1和P-MEK1的蛋白表达量。结果与模型组比较,参归仁中剂量组和舍曲林组在海马组织中P-RSK1蛋白表达水平明显增加(P<0.01);与模型组比较,参归仁中剂量组、舍曲林组和苯甲酸雌二醇组在海马组织中P-MEK1蛋白表达水平明显增加(P<0.01)。证明参归仁合剂可增加海马组织中P-RSK1和P-MEK1蛋白表达量,且参归仁中剂量组效果显著,参归仁合剂可起到抗抑郁作用。

基于mTOR/P70S6K通路研究上调miR-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响

目的基于哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)通路研究上调微小核糖核酸(miR)-205-5p对肝癌细胞增殖、侵袭的影响。方法肝癌HepG2细胞株经过细胞培养、转染后,分为上调miR-205-5p组、肝癌组和阴性对照组。实时荧光定量(RT)-聚合酶链反应(PCR)检测miR-205-5p表达,观察肝癌细胞增殖、凋亡、侵袭能力,Western印迹检测p-mTOR、p-P70S6K、mTOR、P70S6K蛋白表达。结果上调miR-205-5p组miR-205-5p表达显著高于肝癌组和阴性对照组,阴性对照组显著高于肝癌组(均P<0.05)。在24、48、72 h,上调miR-205-5p组细胞光密度值均显著低于阴性对照组和肝癌组,阴性对照组光密度值均显著低于肝癌组,在72 h差异表现最为明显(P<0.05),阴性对照组和肝癌组随着时间延长,光密度值逐渐显著升高,上调miR-205-5p组光密度值逐渐显著降低(均P<0.05)。上调miR-205-5p组72 h细胞增殖数、细胞侵袭数显著低于肝癌组和阴性对照组,细胞凋亡数显著高于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。上调miR-205-5p组mTOR、P70S6K、p-mTOR、p-P70S6K蛋白表达显著低于肝癌组和阴性对照组(均P<0.05)。结论上调miR-205-5p可以影响mTOR/P70S6K信号通路的活性,参与肝癌细胞侵袭、增殖、凋亡的过程。

基于mTOR-p70S6K/4EBP1信号通路探讨淫羊藿苷抑制病毒性心肌炎模型小鼠心肌损伤的实验研究

目的探讨淫羊藿苷对病毒性心肌炎小鼠雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)/真核细胞起始因子4E结合蛋白1(4EBP1)信号通路的影响。方法健康雄性BALB/c小鼠65只,分为对照组(n=11)和模型组(n=54)。模型组采用柯萨奇病毒B3标准株腹腔接种建立病毒性心肌炎小鼠模型,对照组给予等体积不含病毒的培养液腹腔注射。将造模成功的小鼠随机分为模型组(n=11)、淫羊藿苷低浓度组(n=12)、淫羊藿苷高浓度组(n=12)和卡托普利组(n=11)。模型组与对照组分别予以0.5%羧甲基纤维素钠;淫羊藿苷低、高浓度组分别予以8、16 mg/mL淫羊藿苷混悬液;卡托普利组予以10 mg/mL卡托普利混悬液;各组药物灌胃剂量均为10 mL/kg,每日1次,连续干预60 d。检测比较各组小鼠心脏超声指标,心肌组织病理评分,心肌胶原容积分数(CVF),血清Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)、Ⅲ型前胶原氨基端原肽(PⅢNP)、转化生长因子β1(TGF-β1)含量,以及心肌组织磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化p70S6K(p-p70S6K)、磷酸化4EBP1(p-4EBP1)表达水平。结果干预后,与模型组比较,各组小鼠左室收缩末期内径(LVEDs)、左室舒张末期内径(LVEDd)较低,左室内径缩短率(FS)水平较高,心肌组织病理学评分较低,心肌CVF较低,血清PⅠCP、PⅢNP、TGF-β1含量较低,心肌组织p-mTOR、p-p70S6K、p-4EBP1表达水平较低,差异有统计学意义(P<0.05),且淫羊藿苷干预组呈一定量效关系。结论淫羊藿苷能剂量依赖性地改善病毒性心肌炎小鼠心脏收缩舒张功能,减轻心肌组织病理损伤,延缓心肌纤维化,其作用可能与抑制mTOR-p70S6K/4EBP1信号通路活性有关。

基于mTOR/p70S6K信号通路探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤的影响

目的:探究紫丁香苷对高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号通路的影响。方法:将小鼠足细胞MPC5分为:对照组(5.5mmoL/L葡萄糖)、高糖诱导组(30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷低浓度组(2.5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷中浓度组(5μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)、紫丁香苷高浓度组(10μmoL/L紫丁香苷+30mmoL/L葡萄糖)。各组向RPMI 1640培养基中加入上述浓度的相应试剂或药物,培养72h。酶标仪测定各组MPC5细胞吸光度值,计算细胞活力;流式细胞仪测定各组MPC5细胞凋亡情况;鬼笔环肽染色观察各组MPC5细胞骨架形态;荧光定量PCR和蛋白印迹法分别测定各组MPC5细胞mTOR、p70S6K信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达。结果:对照组MPC5细胞骨架形态正常,细胞长轴呈线性分布,荧光染色明显;与对照组比较,高糖诱导组MPC5细胞骨架断裂,细胞萎缩,荧光染色黯淡,吸光度值、细胞活力显著降低,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与高糖诱导组比较,紫丁香苷低、中、高浓度组MPC5细胞骨架结构恢复清晰,荧光强度逐渐变亮,足突趋于明显,吸光度值、细胞活力依次升高,凋亡率、mTOR、p70S6K mRNA和蛋白表达水平依次降低(P<0.05)。结论:紫丁香苷对高糖诱导的MPC5细胞损伤具有保护作用,能明显促进MPC5细胞增殖,抑制其凋亡;其机制可能与紫丁香苷抑制高糖状态下MPC5细胞中mTOR/p70S6K通路的激活有关。

补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期产妇脐带血浆细胞样树突状细胞中PI3K、mTOR、p70S6K、IFN-α表达的影响

目的:研究补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期产妇脐带血浆细胞样树突状细胞(pDCs)中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6k)、干扰素-α(IFN-α)表达的影响。方法:收集HBV感染免疫耐受期产妇脐带血10例,分离培养pDCs。同时制备补肾方、解毒方、补肾解毒方含药血浆及无药血浆。将培养至第7天的pDCs随机分为5组,即补肾组、解毒组、补肾解毒组、无药血浆组及空白组,干预48 h后,分别收集细胞及上清液,实时PCR检测pDCs PI3K、mTOR、p70S6K mRNA的表达,Western Blot技术检测pDCs PI3K、mTOR、p70S6K蛋白表达,ELISA检测pDCs培养上清IFN-α水平。结果:补肾方和补肾解毒方能提高HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中PI3K、mTOR、p70S6K mRNA、蛋白及IFN-α的表达,以补肾解毒方更明显,而解毒方不能明显提高HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中PI3K、mTOR、p70S6K mRNA、蛋白及IFN-α的表达。结论:补肾解毒方能明显提高HBV感染免疫耐受期产妇脐带血pDCs中PI3K、mTOR、p70S6K mRNA、蛋白的表达,使IFN-α分泌增加,改善HBV感染患者pDCs的功能。

1,25(OH)_2D_3对人肾小球系膜细胞增殖及mTOR/p70s6K表达的影响

目的：探讨1,25-二羟基维生素D3[1,25（OH）2D3]对人肾小球系膜细胞增殖的影响及其在肾小球系膜细胞调控中对mTOR/p70s6K信号通路的作用。方法体外培养人肾小球系膜细胞，取传代培养至3～7代细胞分为4组：正常对照组（加含5%胎牛血清DMEM培养基），VD组[加1,25（OH）2D310-8 mol/L]，R组（加雷帕霉素5 mg/L），R＋VD组[加雷帕霉素5 mg/L及1,25（OH）2D310-8 mol/L]，干预48 h。采用细胞增殖与活性检测试剂盒CCK-8检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞周期时相分布，免疫荧光法检测细胞中mTOR、p70s6K的表达情况。结果正常对照组、VD组、R组、R＋VD组：（1）吸光度值（A450）依次降低，组间多重比较差异均有统计学意义（均P＜0.05）；抑制率（IR）依次升高。（2）G1期细胞比例依次增加，S期、G2/M期依次减少，增殖指数（PI）依次降低，除R组与VD组比较差异无统计学意义外，其余组间多重比较差异均有统计学意义。（3）系膜细胞中mTOR、p70s6K蛋白表达强度均依次降低，除R组与VD组比较差异无统计学意义外，其余组间多重比较差异均有统计学意义。结论1,25（OH）2D3可显著抑制人系膜细胞增殖，且其可能通过抑制mTOR/p70s6K信号通路调控肾小球系膜细胞增殖。

GSK-3及P70S6K在胰岛素抵抗大鼠肌肉中的表达及意义

目的:观察饮食诱导的胰岛素抵抗(IR)大鼠骨骼肌中糖原合成酶-3(GSK-3)及核糖体S6蛋白激酶(P70S6K)的表达及变化情况,并探讨GSK-3和P70S6K在IR发生中的作用及意义。方法:将40只4周龄Wistar大鼠随机分为正常对照组、高糖组、高脂组、高脂高糖饲养组,喂养8周后用高胰岛素-正葡萄糖钳夹技术(钳夹试验)对大鼠进行胰岛素敏感性的评估,采用Westernblot法检测各组大鼠骨骼肌中GSK-3及P70S6K的含量,同时测定各组大鼠的附睾脂肪垫重量、血糖(BG)、胰岛素(INS)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)及游离脂肪酸(FFA)水平、超敏C反应蛋白(hsCRP)。结果:高脂高糖组、高脂组大鼠产生明显IR,体重增加(P<0.01),以附睾脂肪垫的重量增加更为显著(P<0.01),TG、TC及FFA水平、hsCRP增加(P<0.01),GSK-3、P70S6K在IR大鼠肌肉中的表达明显升高。结论:高脂高糖饮食可诱导大鼠产生IR,IR大鼠的hsCRP、TG、TC及FFA水平明显增高,大鼠产生IR与炎症反应有关,GSK-3、P70S6K在IR大鼠中的表达明显升高,在胰岛素信号传导中起负相调节作用。

胃癌组织中Cx43与p70S6K的表达及其临床意义

目的:探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)与p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)在胃癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:利用蛋白印迹(Westernblot WB)实验技术检测胃癌及正常胃黏膜组织中Cx43及p70S6K蛋白表达情况;利用实时定量PCR技术检测Cx43及p70S6K mRNA表达情况。结果:在蛋白表达水平,胃癌组织中Cx43的表达量M(0.39,0.98)低于正常胃黏膜组织中的表达量M(1.62,3.80),p70S6K的表达量M(0.94,1.55)则高于正常胃黏膜组织的表达量M(0.54,1.02),差异均具有统计学意义(均P<0.01);在基因表达水平,Cx43 mRNA在胃癌组织中的表达量M(0.33,0.66)低于正常胃黏膜组织表达量M(1.00,1.00),p70S6K mRNA在胃癌组织中的表达量M(2.14,4.14)明显高于正常胃黏膜组织表达量M(1.00,1.00),差异均具有统计学意义(均P<0.01)。无论在蛋白表达水平还是基因表达水平,随着胃癌分化越差,TNM分期越高、浸润胃壁越深、伴淋巴转移的胃癌患者中Cx43的阳性表达率更低,反之p70S6K的阳性表达率明显增高(P均<0.05)。在胃癌组织中Cx43与p70S6K蛋白的表达均成负相关(r=-0.746,P<0.01);Cx43与p70S6K mRNA的表达亦成负相关(r=-0.759,P<0.01)。结论:Cx43与p70S6K在胃癌组织中的异常表达,可能在胃癌的发生发展机制中起重要作用,有望成为胃癌诊断及治疗的新靶点。

子宫颈鳞癌患者中mTOR、PI3K及p70S6K的表达及临床价值

目的探讨子宫颈鳞癌患者中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)及p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)的表达水平及其临床价值。方法选取2017年1月至2021年1月温州医科大学附属第二医院妇科诊治的子宫颈鳞癌患者术后组织蜡块80例作为观察组,选取同期入院检查的正常宫颈组织80例作为对照组。采用免疫组化测定两组患者组织中mTOR、PI3K及p70S6K的表达水平,分析其与临床病理特征之间的关系及三者之间的相关性。结果子宫颈鳞癌组织中mTOR、PI3K及p70S6K的阳性表达率均显著高于对照组(χ^(2)=64.475、75.584、55.298,P<0.05)。其中,子宫颈鳞癌组织中mTOR的表达与间质浸润深度、淋巴结转移均有关(χ^(2)值分别为15.810、7.373,P<0.05);PI3K的表达与组织学分级、淋巴结转移均有关(χ^(2)值分别为12.626、4.747,P<0.05);p70S6K的表达与淋巴结转移有关(χ^(2)=11.241,P<0.05)。且子宫颈鳞癌组织中mTOR的表达与PI3K、p70S6K均呈显著正相关(r值分别为0.522、0.323,P<0.05)。结论mTOR、PI3K以及p70S6K在子宫颈鳞癌组织中的表达显著高于正常组织,且mTOR的表达与PI3K、p70S6K均呈现正相关,可能为靶向治疗潜在标志物。

基于mTOR/p70S6K信号通路探讨中医药治疗甲状腺恶性肿瘤作用机制进展

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是高度保守的丝/苏氨酸蛋白激酶,可感知并整合多种生物信号,调节细胞的生长、凋亡、自噬,参与免疫抑制以及细胞迁移,其过度表达为肿瘤细胞的生长和转移提供了物质基础和动力。mTOR/p70S6K信号传导的异常表达可以影响甲状腺细胞的生长代谢,调节甲状腺癌细胞的生长和转移。现针对mTOR信号通路上与甲状腺恶性肿瘤发生发展相关的分子予以探讨,并探究中医药通过该信号通路抑制甲状腺恶性肿瘤进展的现代研究,为临床治疗甲状腺恶性肿瘤提供新思路。

Bufalin通过细胞外信号调节激酶／P90核糖体S6激酶2通路对人食管癌细胞裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响

目的探讨bufalin通过细胞外信号调节激酶（ERK）／P90核糖体s6激酶2（RSK2）通路对裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影响。方法建立裸鼠食管癌细胞移植瘤模型，并分为模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组，观察bufalin对裸鼠食管癌移植瘤的影响，显微镜下观察各组移植瘤的组织学表现。采用原位末端转移酶标记技术（TUNEL）检测各组移植瘤的凋亡指数，采用实时定量PCR法检测各组移植瘤组织中ERK、RSK2mRNA的表达，采用Westernblot和免疫组化法检测移植瘤组织中ERK、RSK2、糖原合成激酶3β（GSK313）、Bad及其磷酸化水平。结果模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的裸鼠肿瘤体积分别为（1．758±0．181）cm3、（1．680±0．150）cm3、（1．285±0．134）cm3、（0．873±0．095）cm3、（0．815±0．108）cm3和（0．530±0．104）cm3。HE染色显示，各组移植瘤组织均有不同程度的坏死，以联合用药组最为明显。TUNEL法显示，模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的凋亡指数分别为（6．0±0．6）％、（11．0±0．7）％、（19．1±0．9）％、（25．1±1．4）％、（20．0±1．2）％和（17．1±0．7）％，以bufalin高剂量组凋亡指数最高。实时定量PCR检测显示，模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的ERKmRNA的Act值分别为0．270±0．084、0．293±0．081、0．596±0．224、0．857±0．183、0．868±0．187和1．313±0．282；RSK2mRNA的Act值分别为0．340±0．062、0．337±0．071、0．642±0．226、0．915±0．170、0．923±0．176和1．413±0．269，ERK和RSK2mRNA表达均呈降低趋势。Westernblot和免疫组化检测显示，各组ERK、RSK2、Bad蛋白水平的差异均无统计学意义（均P〉0．05）；模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的P-ERK蛋白相对表达量分别为0．721±0．094、0．695±0．095、0．555±0．080、0．388±0．052、0．341±0．060和0．235±0．056，免疫反应评分中位数分别为8、8、6、4、5和3分。模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的p-RSK2蛋白相对表达量分别为0．613±0．085、0．612±0．084、0．427±0．089、0．305±0．056、0．258±0．051和0．158±0．058，免疫反应评分中位数分别为8、8、5、3、3和1分。模型组、bufalin低剂量组、bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组的GSK313蛋白相对表达量逐渐升高，p-GSK313和p-Bad蛋白相对表达量均呈降低趋势，bufalin中剂量组、bufalin高剂量组、PD98059组和联合用药组与模型组比较，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论bufalin对裸鼠食管癌移植瘤有明显的抑制作用。Bufalin可通过抑制ERK、RSK2的磷酸化水平抑制移植瘤的生长，通过抑制GSK3β的失活而抑制肿瘤的增殖，通过下调p-Bad的表达而发挥促凋亡作用。

舒芬太尼后处理通过ERK1/2介导的p70S6K信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨舒芬太尼后处理通过细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)介导的p70核糖体蛋白S6激酶(p70S6K)信号传导通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的影响,阐明舒芬太尼后处理对大鼠MIRI的保护作用。方法:72只SD雄性大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注(I/R)组、二甲基亚砜(DMSO)组、PD组(缺血末到再灌注开始后15 min给予20μmol·L^-1 ERK的抑制剂PD98059)、舒芬太尼后处理组(Sufen组)和Sufen+PD组。除假手术组外,其余各组大鼠均缺血30 min后再灌注2 h。于缺血前即刻(T0)和再灌注30 min(T1)、60 min(T2)、90 min(T3)、2 h(T4)时记录心率(HR)、平均动脉压(MAP),再灌注末测定大鼠心肌梗死面积,采用Western blotting法检测大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平。结果:与T0时比较,T1~T4时I/R组、Sufen组、DMSO组、PD组和PD+Sufen组大鼠MAP和HR降低(P<0.05);与假手术组比较,其余各组大鼠HR降低(P<0.05),MAP升高(P<0.05);与I/R组比较,T3时Sufen组大鼠HR降低(P<0.05),MAP升高(P<0.05)。与I/R组比较,Sufen组大鼠心肌梗死面积明显减少(P<0.05);与Sufen组比较,PD+Sufen组大鼠心肌梗死面积明显增加(P<0.05)。与假手术组比较,I/R组、Sufen组和DMSO组大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与I/R组比较,Sufen组大鼠心肌组织中p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均进一步升高(P<0.05);与Sufen组比较,PD+Sufen组大鼠心肌组织中的p-ERK1/2和p-p70S6K蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:舒芬太尼后处理通过ERK1/2介导的p70S6K信号通路对大鼠MIRI起保护作用,可改善MIRI大鼠的心功能指标,减少心肌梗死面积。

p90核糖体S6激酶通路在乳腺癌中的作用及其机制

p90核糖体S6激酶（RSK）在50％人乳腺癌中过表达。RSK通过调节几种关键的乳腺癌相关蛋白而促进乳腺癌细胞增殖。RSK还通过对mRNA转位和翻译的调节来促进肿瘤细胞存活。RSK还可促进乳腺癌的肿瘤血管形成，但RSK4可能具有抑制乳腺癌作用。RSK4之外的RSK可能是治疗乳腺癌很有前景的潜在靶点。

地黄饮子对转基因果蝇AD模型mTOR信号通路中4E结合蛋白和p70核糖体S6蛋白激酶表达的影响

目的:研究地黄饮子对转tau基因果蝇m TOR信号通路中4E结合蛋白(4E-BP)和p70核糖体S6蛋白激酶(p70S6K)表达的影响,探讨其防治AD的疗效和作用机制。方法:将果蝇分为3组,即空白组、地黄组、模型组,空白组为正常CS果蝇喂普通培养基,地黄组为转tau基因果蝇喂2%浓度地黄饮子培养基,模型组为转tau基因果蝇喂普通培养基,均喂养5d。采用荧光定量PCR技术检测果蝇4E-BP和p70S6K的m RNA表达,Western blot方法检测4E-BP和p70S6K蛋白的表达。结果:地黄饮子能够降低4E-BP和p70S6K的m RNA和蛋白的表达,且与模型组比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:地黄饮子通过调控m TOR信号通路中4E-BP和p70S6K的m RNA和蛋白的表达,调节了细胞周期,抑制了细胞的凋亡,提高转tau基因果蝇AD模型学习记忆能力。

二甲双胍通过抑制核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6)调节体外人颗粒细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1)的表达

目的:探讨二甲双胍对核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(P70S6k)及胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其ser307位点磷酸化表达的影响。方法:利用0.1 mmol/L二甲双胍体外连续作用多囊卵巢综合症(PCOS)患者黄素化颗粒细胞24 h为实验组,设未加二甲双胍培养的颗粒细胞为对照组。通过RT-PCR和Real-time PCR检测P70S6k和IRS-1的表达,细胞免疫荧光化学和Western blotting的方法检测P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白的表达。结果:Real-time PCR结果显示实验组P70S6k和IRS-1m RNA水平显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞免疫荧光化学检测IRS-1和p-ser307-IRS-1蛋白在颗粒细胞胞质表达,P70S6k和p-thr389-P70S6k蛋白在细胞核表达。Western blotting法结果显示二甲双胍作用24 h前、后卵巢颗粒细胞P70S6k、p-thr389-P70S6k、IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达有统计学差异(P<0.05),灰度值分析显示添加二甲双胍组P70S6k、p-thr389-P70S6k蛋白表达显著升高,IRS-1及p-ser307-IRS-1蛋白表达显著下降(P<0.05)。结论:二甲双胍可抑制人颗粒细胞P70S6k的表达,并通过Akt/P70S6k/IRS途径调节IRS-1的表达,从而增加颗粒细胞胰岛素的敏感性。