心肌特异表达基因p93的激酶及丝氨酸结构域在大肠杆菌中的高效表达

目的 在大肠杆菌中高水平表达并分离纯化心脏特异表达基因p93的激酶与丝氨酸结构域片段。方法 利用DNA重组技术 ,构建C末端带有 6×His标签的p93激酶与丝氨酸结构域(p93 C)片段的原核表达载体pET2 8a p93 C。对诱导表达条件和包涵体洗涤条件优化后 ,用Ni2 +金属螯合吸附层析柱纯化。结果 成功构建了pET2 8a p93 C原核表达载体 ,诱导后摇床转速在 35 0r/min下表达量最高 ,包涵体洗涤在超声条件下较好 ,分离纯化后从 10 0ml菌液中可获得 2 5mg蛋白。结论建立了高效稳定的p93 C原核表达体系以及较好的包涵体洗涤方法。

心肌特异性新蛋白激酶p93和peroxiredoxin3的相互作用

为了明确p93在心血管系统中的生物学功能及在信号传导通路中的作用 ,采用酵母双杂交技术 ,选择 p93N端第 10 1～ 372位氨基酸构建诱饵质粒 ,筛选成人心脏cDNA文库 ,寻找与之相互作用的蛋白质 ,结果得到蛋白peroxiredoxin 3(PRX 3) .采用体外结合实验和免疫共沉淀等方法 ,证实了原核和真核表达的 p93确实可与PRX3相互作用 ,通过双重荧光共定位 ,为二者的相互作用提供了定位依据 .研究提示p93可能参与心肌细胞中与PRX3有关的各种生理病理过程 ,如生长、分化、发育、凋亡。

人类p93基因转基因小鼠模型的建立及功能初探

目的 探讨心肌特异性表达的新激酶基因p93对心脏发育的影响.方法 构建携带人心肌特异启动子的α-MHC-p93转基因质粒,以显微注射法获得p93转基因首建鼠.对转基因小鼠进行形态学观察及血清水平检测.结果 成功构建了携带有人p93基因的真核表达载体α-MHC-p93,获得首建鼠7只.经繁育共获得F1、F2代转基因鼠234只,筛选出转基因阳性鼠4只,其中F1代3只,F2代1只.小鼠心脏大体形态学检测未见房室间隔缺损现象.血清学检测结果显示：p93转基因阳性鼠血Ca2＋水平明显高于正常对照组[ （28±1）mg/L比（26±1）mg/L,P＜0.05],差异有统计学意义（P＜0.05）；血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平低于正常对照组[（624.7±268.1）U/L比（1229.8±532.4）U/L,P＜0.05]；血清乳酸脱氢酶（LDH）水平及心脏质量指数（HMI）与正常对照组相比,差异无统计学意义.结论 成功建立了人p93基因的转基因小鼠模型.单一转入p93基因没有造成实验动物的房室间隔缺损及心肌肥大.

血清miR-93-3p、TLR4表达水平对脑出血患者认知功能障碍的预测价值

目的分析血清miR-93-3p、Toll样受体4(TLR4)表达水平对脑出血(ICH)患者认知功能障碍的预测价值。方法选取本院2021年8月~2023年8月收治的132例ICH患者为ICH组,同期体检健康者130例为健康组,比较两组血清miR-93-3p、TLR4水平,并通过Pearson法分析血清miR-93-3p与TLR4的相关性。根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)将ICH患者分为障碍组(40例)和无障碍组(92例),比较两组患者血清miR-93-3p、TLR4、白介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)水平;采用多因素Logistic回归分析ICH患者认知功能障碍的影响因素;采用ROC曲线分析血清miR-93-3p、TLR4水平预测ICH患者认知功能障碍的价值。结果ICH组血清miR-93-3p水平低于健康组,TLR4水平高于健康组(P<0.05);miR-93-3p与TLR4呈负相关(r=-0.350,P<0.001)。障碍组患者血清miR-93-3p水平低于无障碍组,TLR4、IL-6、CRP水平高于无障碍组(P<0.05);多因素Logistic回归分析表明,miR-93-3p水平降低,TLR4、IL-6、CRP水平升高是ICH患者认知功能障碍的危险因素(P<0.05)。血清miR-93-3p、TLR4水平预测ICH患者认知功能障碍的AUC值分别为0.882、0.884,而二者联合预测的AUC值为0.954,两者分别与联合预测比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论血清miR-93-3p、TLR4水平可能与ICH患者认知功能障碍有关,二者联合检测可能对ICH患者的认知功能障碍具有较好的预测价值。

miR-93-5p对三阴性乳腺癌放疗敏感性的影响及其机制探讨

目的:探讨miR-93-5p对三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)放疗敏感性的影响,并探讨其相关机制。方法:双荧光素酶实验发现GSDME(Gasdermin E)是miR-93-5p的靶基因;构建miR-93-5p稳定过表达细胞,小鼠皮下成瘤后行放射治疗;采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)及蛋白质印迹(Western Blot,WB)方法检测各组GSDME的表达。检测TNBC肿瘤患者癌组织及癌旁组织中miR-93-5p及GSDME的表达,比较其在癌组织及癌旁组织中的差异表达变化,分析其与TNBC临床病理的关联。结果:miR-93-5p直接靶向GSDME 3'-UTR,过表达miR-93-5p小鼠的组织中GSDME低表达。放疗促进GSDME表达,并且阻断miR-93-5p对GSDME的抑制。miR-93-5p在细胞中主要定位于细胞质。GSDME在TNBC患者肿瘤组织中较癌旁组织中减少。结论:放疗促进TNBC中GSDME表达,并且阻断miR-93-5p对GSDME的抑制,miR-93-5p有作为放射生物学标志物的潜力。

工程化的PMN-MDSCs来源外泌体在胶原诱导性关节炎小鼠中的应用

目的:使用电穿孔方法对多形核髓源性抑制细胞(polymorphonuclear myeloid-derived suppressor cells,PMN-MDSCs)来源的外泌体(exosomes,Ex)进行工程化改造,观察其对胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型小鼠疾病进程的干预作用。方法:构建CIA模型小鼠,磁珠分选PMN-MDSCs,运用超滤技术联合试剂沉淀法制备培养上清液中的PMN-Ex,免疫印迹法检测Ex标志性蛋白。使用电穿孔技术对PMN-Ex进行改造并设置分组,包括未处理的PMN-Ex组,电转miR-93-5p mimics NC组(miR-93-5p mimics NC组)以及电转miR-93-5p mimics组(miR-93-5p mimics组)。利用实时荧光定量PCR检测miR-93-5p的装载效率。流式细胞术检测改造后的Ex对Th17细胞分化的影响。将不同组别的PMN-Ex尾静脉注射到CIA小鼠体内,分别观察足趾外观情况、足趾HE染色切片情况,测定小鼠的平均关节炎指数(mean arthritic index,MAI)、腘窝淋巴结Th17的比例、血清IL-17A水平,以此判断不同组别PMN-Ex对CIA小鼠的干预作用。结果:PMN-MDSCs被成功分选并制备了PMN-Ex。荧光定量PCR结果显示,miR-93-5p mimics组中miR-93-5p的表达水平明显高于miR-93-5p mimics NC组。相比miR-93-5p mimics NC组,miR-93-5p mimics组处理的小鼠足趾红肿轻微,关节结构较完整;MAI、腘窝淋巴结Th17细胞比例以及血清IL-17A水平明显降低。结论:使用miR-93-5p mimics工程化改造后的PMN-Ex可以更有效地延缓CIA小鼠的疾病进程。

微RNA-93-5p对多囊卵巢综合征患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及机制

目的探讨血浆微RNA(miR)-93-5p对多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞增殖的影响及其可能机制。方法选择2022年1月至2023年1月焦作市人民医院收治的120例育龄期PCOS患者为PCOS组,选择同期在本院体检的18例育龄期健康女性为对照组。收集2组受试者的年龄、体质量和身高,计算体质量指数(BMI)。2组受试者均在自然月经周期的卵泡期或黄体酮诱导的撤退性出血期采集空腹静脉血,采用电化学法测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)、总睾酮(TT)、抗米勒管激素(AMH)、天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖(FBG)水平,并计算胰岛素抵抗稳态模型(HOMA-IR);采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2组受试者血浆中miR-93-5p表达水平。取对数生长期人卵巢颗粒细胞KGN,以每孔3×10^(5)个细胞接种至6孔板中,随机分为miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组、阴性对照(NC)组、空白对照组。miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics;LY294002+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50 mmol·L^(-1) LY294002处理;AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞转染miR-93-5p mimics,并于转染前1 h给予50μmol·L^(-1) AZD5363处理;NC组KGN细胞转染阴性对照质粒;空白对照组KGN细胞不做任何处理。应用qRT-PCR法检测各组KGN细胞中miR-93-5p表达,细胞计数试剂盒-8试验检测各组KGN细胞增殖情况。结果PCOS组与对照组受试者的年龄及FSH、ALT、AST水平比较差异无统计学意义(P>0.05);PCOS组患者的BMI、TT、AMH、LH、FINS、FBG、HOMA-IR显著高于对照组(P<0.05)。PCOS组患者血浆中miR-93-5p相对表达量显著高于对照组(t=-5.549,P<0.001)。miR-93-5p与TT、FINS、HOMA-IR呈中度正相关(r=0.434、0.622、0.586,P<0.001),与FBG和LH呈低度正相关(r=0.398、0.398,P<0.001)。ROC曲线显示,血浆miR-93-5p诊断PCOS的最佳临界值为1.380,曲线下面积为0.906(95%置信区间:0.839~0.973,P<0.001),敏感度为0.858,特异度为0.833,约登指数为0.691。miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞中miR-93-5p相对表达量均显著高于空白对照组和NC组(P<0.05)。培养24、48、72 h时,miR-93-5p mimics组、LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组KGN细胞的增殖能力显著高于空白对照组和NC组(P<0.05);LY294002+miR-93-5p组、AZD5363+miR-93-5p组细胞的增殖能力显著低于miR-93-5p mimics组(P<0.05)。结论PCOS患者血浆miR-93-5p呈过表达,miR-93-5p可能通过基于调控磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激B信号通路介导PCOS卵巢颗粒细胞增殖来参与PCOS的发生发展,血浆miR-93-5p水平对PCOS有一定的诊断价值。

脓毒症并发急性肾损伤患儿血清中miR-93-5p和miR-424-5p的表达及临床意义

目的探讨血清中微小RNA-93-5p(miR-93-5p)和微小RNA-424-5p(miR-424-5p)在脓毒症并发急性肾损伤(S-AKI)患儿中的表达水平及其临床意义。方法选取2019年11月至2021年11月南阳市中心医院综合ICU收治的116例脓毒症患儿作为研究对象,根据脓毒症患儿是否并发AKI分为AKI组60例和非AKI组56例;比较两组患儿的一般资料和血清miR-93-5p、miR-424-5p及肾功能指标[血肌酐(Scr)、胱抑素C(Cys-C)]水平;采用Pearson法分析S-AKI患儿血清miR-93-5p、miR-424-5p与肾功能指标的相关性;采用多因素Logistic回归分析脓毒症患儿并发AKI的影响因素;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析血清miR-93-5p、miR-424-5p水平对脓毒症患儿并发AKI的诊断价值。结果AKI组患儿的尿量为(1.52±0.31)mL·kg^(-1)·h^(-1)、血清miR-93-5p表达水平为0.62±0.14,均明显低于非AKI组的(1.87±0.36)mL·kg^(-1)·h^(-1)、(1.02±0.21),急性生理学与慢性健康状况评分(APACHEⅡ评分)、序贯器官衰竭评分(SOFA评分)、血清miR-424-5p表达水平、Scr、Cys-C水平分别为(17.35±5.01)分、(5.77±1.80)分、(2.36±0.51)、(182.84±43.31)μmol/L、(1.63±0.39)mg/L,明显高于非AKI组的(14.96±4.12)分、(5.10±1.41)分、(1.01±0.23)、(91.51±28.34)μmol/L、(0.96±0.28)mg/L,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson法分析结果显示,S-AKI患儿血清miR-93-5p与Scr、Cys-C呈负相关(r=-0.621、-0.720,P<0.05),miR-424-5p与Scr、Cys-C呈正相关(r=0.503、0.538,P<0.05);经多因素Logistic回归分析结果显示,miR-424-5p、Scr、Cys-C是影响脓毒症患儿并发AKI的危险因素,miR-93-5p是保护因素(P<0.05);经ROC分析结果显示,血清miR-93-5p、miR-424-5p以及两者联合诊断脓毒血症患儿并发AKI的AUC分别为0.856、0.860、0.949,联合诊断的敏感度为90.00%,特异性为91.07%,两者联合优于血清miR-93-5p、miR-424-5p各自单独诊断(Z两者联合-miR-93-5p=2.897、Z两者联合-miR-424-5p=2.706,P=0.004、P=0.007)。结论S-AKI患儿血清miR-93-5p水平显著下调,miR-424-5p水平显著上调,两者联合诊断脓毒血症患儿并发AKI具有更高价值。

miR-93-5p通过PI3K/AKT通路调控HepG2细胞自噬

目的:探究miR-93-5p对HepG2细胞增殖、自噬、葡萄糖消耗以及磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)通路的影响。方法:高浓度葡萄糖诱导构建胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型,设计合成miR-93-5p inhibitor和NC,结合自噬抑制剂3-MA,将细胞分为Control组、IR组、IR+inhibitor NC组、IR+inhibitor组、IR+3-MA+inhibitor组。CCK8法检测各组细胞增殖活力,试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和细胞糖原合成情况,Western-Blot法检测细胞自噬基因微管相关蛋白1轻链3(autophagy genes microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)-I、LC3-II、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)蛋白、PI3K/AKT通路蛋白(AKT、p-AKT)的表达。结果:与对照组相比,IR组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达下降(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均增加(P<0.01)。与IR组和IR+inhibitor NC组相比,IR+inhibitor组细胞增殖活力、葡萄糖消耗量和细胞糖原合成量、HGF蛋白、LC3-II蛋白表达增加(P<0.01),LC3-I蛋白和p-AKT/AKT值表达均下降(P<0.01)。与IR+inhibitor组相比,3-MA能逆转miR-93-5p inhibitor的作用。结论:miR-93-5p通过PI3K/AKT通路促进HepG2细胞自噬,进而抑制胰岛素抵抗,缓解糖尿病造成的机体损伤。

miR-93-5p/FOXJ2轴介导胃癌细胞的生物学功能

目的:评估miR-93-5p对胃癌细胞的调节和功能。方法:采用qPCR检测miR-93-5p在胃癌组织、胃癌细胞系中表达,MTT、克隆形成、Transwell实验检测miR-93-5p对胃癌细胞增殖、侵袭的影响,双荧光素酶报告基因实验检测miR-93-5p与FOXJ2的靶向关系。结果:miR-93-5p在胃癌细胞系和胃癌组织中表达升高,抑制miR-93-5p表达后胃癌细胞增殖和侵袭能力受抑。双荧光素酶报告基因检测显示,miR-93-5p mimic显著降低MKN28和MKN45细胞Wt-FOXJ2相对荧光素酶活性,FOXJ2为胃癌细胞中miR-93-5p的直接靶基因。结论:miR-93-5p靶向FOXJ2促进胃癌细胞的增殖和侵袭,miR-93-5p/FOXJ2轴可能是判断胃癌预后的生物标志物和治疗靶点。

支气管哮喘患儿血清外泌体miR-93-5p检测的价值

目的探讨支气管哮喘患儿血清外泌体微小RNA-93-5p(miR-93-5p)水平检测的价值,及其与气道炎症和肺功能的相关性。方法选取2020年4月—2022年4月内江市第二人民医院支气管哮喘患儿133例(哮喘组)和体检健康儿童133名(正常对照组)。根据支气管哮喘病情将133例患儿分为急性发作期组(51例)和临床缓解期组(82例)。检测所有研究对象血清外泌体miR-93-5p相对表达量、气道炎症指标[血清IgE、白细胞介素(IL)-17、嗜酸性粒细胞绝对数(EO#)、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-8]和肺功能[用力肺活量(FVC%)、一秒用力呼气容积(FEV1%)、FEV1占FVC的百分比(FEV1/FVC%)]。采用Pearson相关分析评估各项指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线评价各项指标诊断支气管哮喘患儿急性发作的效能。结果与正常对照组比较,哮喘组血清外泌体miR-93-5p和IgE、IL-17、EO#、CRP、TNF-α、IL-8均升高(P<0.001),FVC%、FEV1%和FEV1/FVC%均降低(P<0.001)。Pearson相关分析结果显示,哮喘组血清外泌体miR-93-5p与IgE、IL-17、EO#、CRP、IL-8均呈正相关(r值分别为0.319、0.440、0.535、0.279、0.296,P<0.05),与FEV1%、FVC%、FEV1/FVC%均呈负相关(r值分别为-0.304、-0.295、-0.327,P<0.05)。与临床缓解期组比较,急性发作期组血清外泌体miR-93-5p相对表达量降低(P<0.001),IgE、IL-17、EO#、CRP、IL-8水平升高(P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,血清外泌体miR-93-5p、IgE、IL-17、EO#、CRP、TNF-α、IL-8诊断支气管哮喘急性发作的曲线下面积(AUC)分别为0.88、0.60、0.65、0.64、0.69、0.62、0.66。结论支气管哮喘患儿血清外泌体miR-93-5p水平显著升高,且与患儿肺功能、气道炎症密切相关,或可作为支气管哮喘病情评估的指标。

基于网络药理学探究愈髋饮防治创伤性股骨头坏死作用机制

目的:网络药理学方法预测愈髋饮防治创伤性股骨头坏死(ONFH)的作用机制并体外实验验证。方法:利用TCMSP数据库筛选愈髋饮成分及靶点,股骨头坏死为关键词使用DisGeNET、OMIM、GeneCards数据库筛选疾病靶点,并筛选潜在治疗靶点,以此靶点构建PPI网络得到核心治疗靶点后进行GO与KEGG富集分析并进行分子对接。依据网络药理学结果进行体外实验,体外实验采用BMSC细胞。结果:愈髋饮主要有效成分木犀草素、槲皮素,筛选出5个核心靶点BMP2、VEGFA、MAPK1、PTGS1、PTGS2。核心靶点的富集分析得出TGF-β信号通路参与愈髋饮治疗ONFH的过程。体外验证结果提示愈髋饮可调低miR-93-5p的转录水平并促进TGF-β通路及成骨分化相关蛋白的表达。结论:愈髋饮可通过调低miR-93-5p调控TGF-β相关通路促进BMSC成骨分化而防治创伤性ONFH。

miRNA-93-5p通过调控FBXW7基因参与宫颈癌进展

目的:探究miRNA-93-5p是否可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌进展。方法:收集20例临床宫颈癌患者组织,分组为癌旁组织、宫颈癌组织,RT-qPCR检测宫颈组织中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,并检测人正常宫颈上皮细胞H8、宫颈癌细胞Caski、HeLa、C33A细胞miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平。选择宫颈癌细胞C33A,分为对照组(正常培养)、miRNA-93-5p抑制组(转染低表达miRNA-93-5p),FBXW7激活组(转染高表达FBXW7),转染48h后收集细胞,RT-qPCR检测各组细胞中miRNA-93-5p、FBXW7 mRNA水平,Western blotting检侧C33A细胞中FBXW7蛋白水平,流式细胞术检测C33A细胞凋亡率,平板克隆检测C33A细胞克隆能力,划痕实验检测C33A细胞迁移能力,Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果:与癌旁组织相比,宫颈癌组织中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.001)。与H8细胞相比,Caski、HeLa、C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平增加、FBXW7 mRNA水平减少(P<0.05),后续实验中选择C33A宫颈癌细胞株进行研究。与对照组相比,miRNA-93-5p抑制组C33A细胞中miRNA-93-5p mRNA水平显著降低(P<0.001),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.01),细胞迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01),FBXW7蛋白及mRNA水平显著增加(P<0.01)。与对照组相比,FBXW7激活组C33A细胞中FBXW7 mRNA水平显著增加(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.001),克隆能力下降(P<0.001),迁移距离减少(P<0.01),侵袭能力下降(P<0.01)。结论:miRNA-93-5p可通过调控FBXW7基因影响宫颈癌细胞的凋亡、增殖、迁移、侵袭水平。

微小RNA-93-5p在糖尿病合并冠心病患者中的表达及临床意义

目的探讨微小RNA-93-5p(miR-93-5p)在2型糖尿病(T2DM)合并冠心病(CHD)患者中的表达及临床意义。方法选取2019年8月—2021年5月本院诊治的60例T2DM患者、57例T2DM合并CHD患者分别为T2DM组、T2DM合并CHD组,另纳入同期60例体检健康者为对照组。比较T2DM合并CHD组、对照组、T2DM组一般资料、血清miR-93-5p、白细胞介素-6(IL-6)水平;分析T2DM合并CHD患者血清miR-93-5p、IL-6水平与低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹胰岛素(FINS)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、总胆固醇(TC)的关系;分析T2DM并发CHD的影响因素;分析血清miR-93-5p、IL-6预测T2DM并发CHD的价值。结果T2DM合并CHD组、T2DM组LDL-C、FINS、TG、FPG、TC、HbA1c及血清miR-93-5p、IL-6水平高于对照组,HDL-C水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);T2DM合并CHD组LDL-C、FINS、TG、FPG、TC、HbA1c及血清miR-93-5p、IL-6水平高于T2DM组,HDL-C水平低于T2DM组,差异有统计学意义(P<0.01)。T2DM合并CHD患者血清中miR-93-5p、IL-6水平与LDL-C、FINS、HbA1c、TC、FPG均呈正相关(P<0.01),与HDL-C呈负相关(P<0.01);T2DM合并CHD患者血清中miR-93-5p表达水平与IL-6呈正相关(P<0.05)。LDL-C、FINS、FPG、HbA1c、TC、miR-93-5p、IL-6是T2DM并发CHD的影响因素(P<0.05);血清miR-93-5p、IL-6预测T2DM并发CHD的曲线下面积(AUC)分别为0.888、0.898,截断值分别为2.59、77.98 ng/L,敏感度均为75.4%,特异度分别为89.2%、85.8%;miR-93-5p、IL-6联合预测T2DM并发CHD的AUC为0.939,敏感度、特异度分别为91.2%、83.3%。结论T2DM并发CHD患者血清miR-93-5p较高,其可能与IL-6共同参与T2DM并发CHD过程。IL-6联合miR-93-5p检测有望作为临床预测T2DM并发CHD的辅助方法。

香青兰总黄酮(TFDM)对高糖诱导的视网膜神经节细胞氧化损伤的影响及其机制

目的探讨香青兰总黄酮(TFDM)对高糖诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)氧化损伤的影响及其机制。方法本研究实验对象为小鼠RGCs,将RGCs接种于24孔板中(每孔2.5×10^(4)个),分为对照组(用含体积分数10%胎牛血清的培养基培养48 h)、高糖组(用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养48 h)、高糖+TFDM-L组(用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖、25 mg·L^(-1) TFDM的培养基共同培养48 h)、高糖+TFDM-M组(用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖、50 mg·L^(-1) TFDM的培养基共同培养48 h)、高糖+TFDM-H组(用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖、100 mg·L^(-1) TFDM的培养基共同培养48 h)、miR-NC组(细胞先转染miR-NC后用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养48 h)、miR-93-5p组(细胞先转染miR-93-5p mimics后用含30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基培养48 h)、anti-miR-NC组(细胞先转染anti-miR-NC后用含100 mg·L^(-1) TFDM、30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基共同培养48 h)、anti-miR-93-5p组(细胞先转染anti-miR-93-5p后用含100 mg·L^(-1) TFDM、30 mmol·L^(-1)葡萄糖的培养基共同培养48 h)。依据试剂盒说明书检测各组RGCs氧化应激指标水平,采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量,比色法检测过氧化氢酶(CAT)、8-羟基脱氧鸟苷酸(8-OHdG)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR检测mRNA表达情况,双荧光素酶报告实验验证miR-93-5p、E2F转录因子1(E2F1)靶向调控作用,Western blot检测蛋白表达情况。对各组数据进行统计学分析。结果高糖组RGCs MDA、8-OHdG含量及细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平均高于对照组(均为P<0.05);CAT含量、Bcl-2蛋白表达水平均低于对照组(均为P<0.05);高糖+TFDM-L组、高糖+TFDM-M组、高糖+TFDM-H组MDA、8-OHdG含量及细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平均低于高糖组(均为P<0.05);CAT含量、Bcl-2蛋白表达水平均高于高糖组,且高糖+TFDM-L组、高糖+TFDM-M组、高糖+TFDM-H组随着TFDM浓度的增高各指标逐渐向对照组恢复(均为P<0.05)。高糖组RGCs miR-93-5p表达水平低于对照组,E2F1 mRNA及蛋白表达水平均高于对照组(均为P<0.05);高糖+TFDM-L组、高糖+TFDM-M组、高糖+TFDM-H组miR-93-5p表达水平均高于高糖组,E2F1 mRNA及蛋白表达水平均低于高糖组(均为P<0.05)。miR-93-5p组RGCs E2F1蛋白表达水平低于miR-NC组,anti-miR-93-5p组E2F1蛋白表达水平高于anti-miR-NC组(均为P<0.05)。miR-93-5p组miR-93-5p表达水平高于miR-NC组,MDA、8-OHdG水平及细胞凋亡率均低于miR-NC组,Bax、E2F1蛋白表达水平均低于miR-NC组,CAT含量、Bcl-2蛋白表达水平均高于miR-NC组(均为P<0.05)。结论TFDM可以抑制RGCs氧化应激反应和细胞凋亡,减轻高糖诱导的RGCs损伤,其作用机制可能与调控miR-93-5p/E2F1表达有关。

血清miR-93-5p、PTEN表达水平评估川崎病患儿冠状动脉损伤的价值

目的分析血清微小RNA(miR)-93-5p、第10号染色体上缺失的磷酸酶和紧张素同源物(PTEN)表达水平在评价川崎病(KD)患儿冠状动脉损伤(CAL)中的应用价值。方法回顾性分析2021年10月至2023年12月郑州大学附属儿童医院心血管内科收治的164例KD患儿的临床诊治资料,依据冠状动脉超声检查结果分为KD+CAL组56例和KD组108例。比较两组患儿的一般资料、血清miR-93-5p和PTEN水平,采用Pearson相关分析法分析血清miR-93-5p与PTEN水平的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-93-5p、PTEN水平对KD患儿CAL的诊断价值,采用多因素Logistic回归法分析KD患儿发生CAL的影响因素。结果KD+CAL组患儿血小板计数、发热持续时间、静脉注射用免疫球蛋白使用时间、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)及血清miR-93-5p水平分别为(430.33±86.42)×10^(9)/L、(9.84±1.96)d、(9.67±1.92)d、(0.68±0.13)μg/L、(82.46±16.24)mg/L、1.51±0.36,明显高于KD组的(351.61±70.18)×10^(9)/L、(8.11±1.07)d、(6.53±1.18)d、(0.32±0.06)μg/L、(65.67±13.25)mg/L、1.02±0.28,血清PTEN水平为(2.32±0.41)ng/mL,明显低于KD组的(3.03±0.61)ng/mL,差异均有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关分析法分析结果显示,KD+CAL组患儿血清miR-93-5p与PTEN呈负相关(r=-0.522,P<0.05);经ROC曲线分析结果显示,血清miR-93-5p、PTEN水平联合诊断KD患儿CAL的曲线下面积(AUC)为0.917(95%CI:0.863~0.954),明显高于miR-93-5p单独诊断的AUC 0.837(95%CI:0.771~0.890)、PTEN单独诊断的AUC 0.847(95%CI:0.783~0.899),差异均有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归法分析结果显示,血小板计数、发热持续时间、静脉注射用免疫球蛋白使用时间及血清miR-93-5p、PTEN水平均是KD患儿发生CAL的影响因素(P<0.05)。结论KD合并CAL患儿血清miR-93-5p水平上调,血清PTEN水平下调,检测其水平变化可用于疾病的早期诊断。

老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系

目的探讨老年胃癌患者血清miR-93-5p水平及其与临床特征和预后的关系。方法收集老年胃癌患者160例和同期老年健康体检者160例分别作为胃癌组和对照组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定血清miR-93-5p水平。结果胃癌组血清miR-93-5p水平明显高于对照组(P<0.05)。不同性别、年龄、肿瘤最大径、分化程度胃癌患者血清miR-93-5p水平比较差异无统计学意义(P>0.05);不同TNM分期、局部浸润深度、淋巴结转移胃癌患者血清miR-93-5p水平比较差异有统计学意义(P<0.05),TNM分期高、局部浸润深度深、有淋巴结转移胃癌患者血清miR-93-5p水平明显高于TNM分期低、局部浸润深度浅、无淋巴结转移者。血清miR-93-5p诊断胃癌的受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.871,95%CI为0.868~0.874,根据此截断值判断胃癌的灵敏度为71.25%,特异度为96.25%。血清miR-93-5p高表达组5年总生存率(51.09%)和无病生存率(39.13%)均明显低于低表达组(79.41%、70.59%,χ^2=13.477、15.516,P<0.001)。Cox比例风险模型结果显示:血清miR-93-5p水平、TNM分期、局部浸润深度、分化程度、淋巴结转移为胃癌预后的独立影响因素(P<0.05)。结论胃癌患者血清miR-93-5p水平升高,且与临床分期、浸润深度、淋巴结转移关系密切,在胃癌诊断和预后评估中具有重要价值。

MiRNA-93-5p对VEGF的转录调控及其与梅花鹿茸细胞增殖的关系

为了探讨miRNA-93-5p对梅花鹿血管内皮生长因子(VEGF)的转录调控作用及其与鹿茸细胞生长的关系,分离了鹿茸顶端软骨组织细胞,利用Trizol试剂法提取细胞总RNA,反转录合成c DNA。根据Gen Bank已发表的相关序列设计梅花鹿VEGF基因的3'端非编码区部分序列(3'UTR)特异引物并进行克隆,构建VEGF基因的3'UTR野生型及其突变体序列双荧光素酶报告基因载体并进行荧光素酶活性检测。再将人工合成的miRNA-93-5p模拟物转染鹿茸软骨细胞,MTT法检测鹿茸细胞体外增殖的变化;Western blotting分析VEGF蛋白的表达丰度。结果表明:成功获得了鹿茸组织VEGF基因的3'UTR序列,野生型序列长度为356 bp,突变体长度为336bp。荧光素酶活性检测结果表明,转染野生型质粒组细胞荧光素酶活性降低,而转染突变体组细胞荧光素酶活性无明显变化。MTT法和Western blotting结果显示,鹿茸细胞的体外增殖受到抑制,VEGF蛋白的表达水平下降,且呈时间依赖性。

miR-93-5p 靶向CCNG2基因对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:研究miR-93-5p对甲状腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法:运用qRT-PCR、Western blot检测甲状腺癌细胞SW579、人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1中miR-93-5p、CCNG2的表达;将anti-miR-93-5p组(转染anti-miR-93-5p)、anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、pcDNA组(转染pcDNA)、pcDNA-CCNG2组(转染pcDNA-CCNG2)、anti-miR-93-5p+si-con组(共转染anti-miR-93-5p和si-con)、anti-miR-93-5p+si-CCNG2组(共转染anti-miR-93-5p和si-CCNG2),均用脂质体法转染至SW579细胞;MTT法检测各组细胞的增殖;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与人正常甲状腺细胞Nthy-ori 3-1相比,甲状腺癌细胞SW579中miR-93-5p表达显著升高,CCNG2表达显著降低(P<0.05);抑制miR-93-5p、过表达CCNG2均可抑制SW579细胞增殖,促进凋亡;miR-93-5p可直接抑制SW579细胞中CCNG2的表达,敲减CCNG2可逆转抑制miR-93-5p对SW579细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:抑制miR-93-5p可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进凋亡,其机制可能与靶向负调控CCNG2有关,将可为分化型甲状腺癌的预防和治疗提供新靶点。

女性非吸烟肺腺癌患者癌组织中miR-93-3p表达与EGFR突变的关系

目的探讨女性非吸烟肺腺癌患者癌组织中表皮生长因子受体(EGFR)突变与miR-93-3p表达的关系。方法选择女性非吸烟肺腺癌患者149例,利用实时荧光定量PCR方法检测其中112例肺腺癌组织中miR-93-3p的相对表达量,应用直接测序方法检测149例肺腺癌组织中EGFR的突变情况;分析miR-93-3p表达与临床病理特征、EGFR突变及预后的关系。结果肺腺癌组织中miR-93-3p的相对表达量与临床分期有关。149例患者中,EGFR野生型78例,突变型71例;EGFR突变型患者的miR-93-3p表达高于野生型患者(P<0.01)。miR-93-3p高表达患者的预后较miR-93-3p低表达者差,但差异无统计学意义(P>0.05)。分层分析显示,年龄≤60岁的女性患者中,miR-93-3p高表达者预后较低表达者差(P<0.05)。结论 EGFR突变患者miR-93-3p表达升高;miR-93-3p可能成为女性非吸烟肺腺癌靶向治疗的新靶点,尤其是年轻女性。