AdCMV-TK和AdCMV-p53联合治疗胶质瘤的体外实验

目的 为了探讨联合应用单纯疱疹病毒 胸苷激酶和野生型p5 3两种基因治疗胶质瘤的可能性。方法 构建了含CMV启动子和单纯疱疹病毒胸苷激酶基因 (HSV TK)的重组腺病毒AdCMV TK和含CMV启动子及野生型p5 3的重组腺病毒AdCMV p5 3。以感染复数 (MOI)为 1 0 0的病毒剂量 ,用AdCMV TK和AdCMV p5 3同时感染人胶质母细胞瘤细胞系TJ90 5 ,并以 1 0 0MOI的AdCMV TK和AdCMV p5 3分别感染另外两组TJ90 5细胞。除感染AdCMV p5 3的细胞外 ,其他两组均于感染后加入 1 0 0 μmol/LGCV。 结果 感染AdCMV p5 3的TJ90 5细胞 ,其生长受到抑制 ,于感染后第 5d,细胞存活率下降为 3 6 9% ,感染AdCMV TK的细胞 ,其生长抑制程度与感染AdCMV p5 3的TJ90 5细胞相似 ,用药后第 5d ,细胞存活率为 3 0 1 % ,而同时感染两种重组腺病毒的细胞 ,细胞生长的抑制程度更明显 ,应用 1 0 0μmol/LGCV后第 5d,细胞存活率仅为 8 8%。结论 联合应用AdCMV TK和AdCMV p5

hTERT Promoter/Bax靶向性涎腺恶性肿瘤基因治疗系统的构建

目的 :构建hTERTPromoter/Bax靶向性涎腺恶性肿瘤基因治疗系统。方法 :采用氯化钙法在大肠杆菌DH5α中扩增pACTERT -EGFP和 pACCMV -Bax质粒。DNA提取纯化试剂盒提取细菌中生长的质粒 ,经电泳 ,紫外分光光度计检验后用BamHI,EcoRI核酸内切酶分别对这两个质粒进行单酶酶切。琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段 ,切取其中 8.38,0 .5 8kbp两个片段长度的凝胶。凝胶提取试剂盒提取其中所含DNA片断 ,T4DNA连接酶连接这两个片段 ,琼脂糖凝胶电泳检测连接结果。结果 :通过连接反应获得 8.96kbp的重组DNA片段。 结论 :成功构建hTERTPromoter/Bax重组表达单位。