非洲猪瘟病毒B602L蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及多抗制备

pB602L蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的非结构蛋白之一。本研究利用杆状病毒表达系统表达了ASFV pB602L蛋白并制备了该蛋白的鼠源多克隆抗体。将B602L基因克隆入杆状病毒载体pFastbac dual中构建pFast dual-B602L重组质粒,将重组质粒pFast dual-B602L转化至DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒Bacmid-B602L。将重组质粒转染草地贪夜蛾卵巢细胞系(sf9)细胞,获得重组杆状病毒rBac-B602L,细胞出现病变后,在sf9中传3代。通过间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验鉴定pB602L蛋白的表达及其反应原性。然后使用纯化的pB602L蛋白作为免疫原制备鼠源抗pB602L蛋白多克隆抗体,经过4次免疫后,采取血清以获得抗pB602L蛋白的多克隆抗体,为后续应用ASFV B602L蛋白检测做准备。结果:在重组杆状病毒表达系统中成功表达pB602L蛋白,可被His抗体检测,并可被ASFV阳性血清特异性识别,制备的多克隆抗体具有较高的特异性。本研究表明杆状病毒系统表达的pB602L蛋白具有良好的抗原性,为后续开展非洲猪瘟亚单位疫苗研究和检测奠定基础。

非洲猪瘟病毒pB602L蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为了制备非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)pB602L蛋白单克隆抗体,试验利用大肠杆菌表达系统表达重组pB602L蛋白,并免疫Balb/c小鼠,经细胞融合及亚克隆获得稳定分泌抗ASFV pB602L蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,通过对小鼠腹腔注射细胞制备单克隆抗体,并采用间接ELISA方法测定其效价,单克隆抗体亚类鉴定试剂盒测定其亚类,Western-blot鉴定其特异性,ASFV抗原包被板鉴定其反应性。结果表明:获得17株稳定分泌抗ASFV pB602L蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备的腹水效价均不低于1∶1 280 000;重链亚类分别为IgG1、IgG2a和IgG2b,轻链均为κ;均能特异性识别重组pB602L蛋白;有16株单克隆抗体与ASFV抗原发生不同程度的抗原-抗体反应,反应的OD450值最高可达1.098。说明首次制备的ASFV pB602L蛋白单克隆抗体特异性好,可与病毒抗原反应。