pBI121表达载体及其转化植株的快速鉴定

以双元质粒pBI121为基础分别构建正义、反义和RNA干涉(RNAi)植物表达载体.根据pBI121质粒多克隆位点两侧的DNA序列设计1对通用引物,以表达载体的重组质粒DNA为模板进行PCR扩增,使用限制性内切酶BamHⅠ酶切PCR产物以验证扩增条带的真实性,从而可以快速鉴定pBI121表达载体的重组克隆.这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株,其检测结果与常规鉴定方法完全一致.此外,可以根据需要对表达载体的阳性PCR扩增产物进行测序,测序结果能够精确地显示出重组pBI121表达载体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变.本研究为各种pBI121表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速、有效的方法.

低渗—离心法直接导入外源基因研究

通过低渗——离心方法将工程质粒DNA和带紫色标记性状的水稻DNA片断分别导入水稻、小麦胚性细胞,X-Gluc检测Gus基因已进入水稻、小麦细胞并获短暂表达;小麦获紫色性状再生植株。研究表明:低渗——离心法可能成为一种新的将外源基因直接导入带壁植物细胞的方法。