小鼠STAT3基因干扰质粒的构建及其效果鉴定

目的构建小鼠STAT3基因的特异性RNA干扰质粒,并鉴定其在细胞水平的抑制效果。方法采用DNA载体介导的RNA干扰技术构建小鼠STAT3基因的特异性RNAi质粒(pBS/U6/STAT3siRNA),并通过RT PCR、免疫印迹、免疫细胞化学染色等技术对pBS/U6/STAT3siRNA的抑制效率进行鉴定。结果经双酶切鉴定筛选出4个阳性干扰质粒,分别转入293T细胞后均可明显降低STAT3的表达,尤以靶向(+2334～+2351)位点的质粒干扰效率最高,达70%。结论小鼠STAT3基因的特异性干扰质粒(pBS/U6/STAT3siRNA)能从蛋白及mRNA水平上特异和高效地抑制STAT3基因的表达。这种DNA载体介导的双链RNA干扰质粒为进一步探究STAT3与胚胎发育的相关功能提供一种有效的研究工具。

小鼠HIF-1α基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究(英文)

目的构建特异的靶向小鼠HIF-1α基因的RNA干扰质粒,检测其对HIF-1α表达的特异性和有效性。方法用双酶切方法构建了三组靶向小鼠HIF-1α基因的特异性RNA干扰质粒,pBS/U6/HIF-1α-siRNAI～III。采用RT-PCR、免疫细胞化学染色和western blotting分别检测了转染三组干扰质粒对293T细胞内HIF-1α表达的影响。检测了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞中HIF-1α表达的量效干扰效应。结果三组RNA干扰质粒均可显著降低293T细胞中HIF-1α的表达,尤以pBS/U6/HIF1αi-II质粒的干扰效果最佳。验证了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞系中HIF-1α的表达存在剂量效应关系。结论本实验构建的pBS/U6/HIF1αi-Ⅱ干扰质粒能有效特异地抑制HIF-1α的表达,其在神经管发育和神经管缺陷中的作用将被进一步探讨。pBS/U6/HIF1αi-II的构建还为探讨HIF-1途径在胚胎发育、肿瘤发生和缺血性疾病中的作用提供了有用的研究工具。