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影响人干细胞因子基因高效表达的因素探讨
被引量:
3
1
作者
洪海燕
戚中田
+4 位作者
赖春宁
冯健男
王建安
刘 涛
沈倍奋
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期225-228,共4页
目的 分析SD序列长度、基因起始码ATG和终止码TAA上下游处RNA的二级结构及密码子偏性等影响表达效率的主要因素,以期实现重组人干细胞因子在原核细菌中高效表达。方法 分析并修改编码人SCF氨基酸的密码子,分段合成改造后的基因,PCR一次...
目的 分析SD序列长度、基因起始码ATG和终止码TAA上下游处RNA的二级结构及密码子偏性等影响表达效率的主要因素,以期实现重组人干细胞因子在原核细菌中高效表达。方法 分析并修改编码人SCF氨基酸的密码子,分段合成改造后的基因,PCR一次性完成拼接,将基因克隆到pBV-220载体上,诱导表达。结果 天然人SCF基因在pBV-220载体的表达占菌体总蛋白的9.5%,基因改造后SCF占菌体总蛋白的27%,表达的蛋白能够为SCF的单克隆抗体所识别,初步纯化的SCF蛋白纯度大于80%,能够促进Mo7e细胞的增殖活性。结论 密码子偏性是影响SCF在原核细菌中高效表达的主要因素,通过改变密码子偏性能过实现高效表达。
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关键词
pbv-220
RNA
二级结构
蛋白表达
全基因合成
干细胞因子
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职称材料
嘌呤核苷磷酸化酶温敏型表达载体的构建、表达及应用于腺苷转化的研究
2
作者
李晓晖
徐珠洁
+2 位作者
梁胜华
蒋欣茵
任大明
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期409-413,共5页
通过双酶切方法将重组质粒上大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)基因克隆到pBV220表达载体上,构建了温敏型PNPase的表达载体pBV 220-PNP,转化大肠杆菌DH5α并使之表达.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异表达条带,其分子量约为26 kDa.在...
通过双酶切方法将重组质粒上大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)基因克隆到pBV220表达载体上,构建了温敏型PNPase的表达载体pBV 220-PNP,转化大肠杆菌DH5α并使之表达.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异表达条带,其分子量约为26 kDa.在此基础上研究了不同诱导条件对蛋白表达量的影响.分别以肌苷和尿苷为核糖供体研究重组菌转化腺苷的条件,发现肌苷最适合作为核糖供体,在30 mmol.L-1pH 7.5的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液中,以30 mmol.L-1肌苷和10 mmol.L-1腺嘌呤作底物,加入0.5%基因工程湿菌体60℃反应3 h,腺苷的转化率为85.57%.
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关键词
大肠杆菌
嘌呤核苷磷酸化酶
PBV
220
肌苷
腺苷
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职称材料
题名
影响人干细胞因子基因高效表达的因素探讨
被引量:
3
1
作者
洪海燕
戚中田
赖春宁
冯健男
王建安
刘 涛
沈倍奋
机构
第二军医大学微生物学教研室
军事医学科学院基础医学研究所分子免疫室
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期225-228,共4页
文摘
目的 分析SD序列长度、基因起始码ATG和终止码TAA上下游处RNA的二级结构及密码子偏性等影响表达效率的主要因素,以期实现重组人干细胞因子在原核细菌中高效表达。方法 分析并修改编码人SCF氨基酸的密码子,分段合成改造后的基因,PCR一次性完成拼接,将基因克隆到pBV-220载体上,诱导表达。结果 天然人SCF基因在pBV-220载体的表达占菌体总蛋白的9.5%,基因改造后SCF占菌体总蛋白的27%,表达的蛋白能够为SCF的单克隆抗体所识别,初步纯化的SCF蛋白纯度大于80%,能够促进Mo7e细胞的增殖活性。结论 密码子偏性是影响SCF在原核细菌中高效表达的主要因素,通过改变密码子偏性能过实现高效表达。
关键词
pbv-220
RNA
二级结构
蛋白表达
全基因合成
干细胞因子
Keywords
pbv-220
RNA secondary structure
gene synthesis
protein expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
嘌呤核苷磷酸化酶温敏型表达载体的构建、表达及应用于腺苷转化的研究
2
作者
李晓晖
徐珠洁
梁胜华
蒋欣茵
任大明
机构
复旦大学遗传所遗传工程国家重点实验室
上海水产大学食品学院
出处
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期409-413,共5页
文摘
通过双酶切方法将重组质粒上大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)基因克隆到pBV220表达载体上,构建了温敏型PNPase的表达载体pBV 220-PNP,转化大肠杆菌DH5α并使之表达.SDS-PAGE电泳结果显示出明显的特异表达条带,其分子量约为26 kDa.在此基础上研究了不同诱导条件对蛋白表达量的影响.分别以肌苷和尿苷为核糖供体研究重组菌转化腺苷的条件,发现肌苷最适合作为核糖供体,在30 mmol.L-1pH 7.5的Na2HPO4-KH2PO4缓冲液中,以30 mmol.L-1肌苷和10 mmol.L-1腺嘌呤作底物,加入0.5%基因工程湿菌体60℃反应3 h,腺苷的转化率为85.57%.
关键词
大肠杆菌
嘌呤核苷磷酸化酶
PBV
220
肌苷
腺苷
Keywords
E. coli
purine nucleoside phosphorylase
pBV
220
adenosine
inosine
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
影响人干细胞因子基因高效表达的因素探讨
洪海燕
戚中田
赖春宁
冯健男
王建安
刘 涛
沈倍奋
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2002
3
下载PDF
职称材料
2
嘌呤核苷磷酸化酶温敏型表达载体的构建、表达及应用于腺苷转化的研究
李晓晖
徐珠洁
梁胜华
蒋欣茵
任大明
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
0
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职称材料
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