重组人骨形成蛋白2基因在大肠杆菌中的克隆

目的 :在大肠杆菌中克隆人骨形成蛋白 2基因。方法 :由人成骨细胞中提取细胞总RNA ,利用逆转录PCR方法扩增获得人骨形成蛋白 2基因cDNA ;将获得基因片段重组到pCI质粒中 ,转化到大肠杆菌Top10后挑选克隆 ,利用限制性酶切和核苷酸序列分析鉴定重组质粒。结果 :质粒DNA酶切分析及核酸序列分析证实 ,获得的基因片段为人BMP2全编码序列。结论 :克隆获得人骨形成蛋白 2基因 ,为表达骨形成蛋白 2奠定了基础。

HepG2/mdr1稳定细胞系的建立及特性研究

将已构建好的含有人多药耐药(multidrug resistance,MDR)全长基因的真核表达质粒pCI-neo-mdr1,应用脂质体导入人肝癌HepG2细胞,应用G418筛选出人肝癌多药耐药细胞株HepG2/mdr1。通过对HepG2/mdr1细胞形态学的观察和生物学特性的研究,成功地建立了高效、稳定的HepG2/mdr1细胞系;为深入研究肝癌的MDR及其逆转提供了理想的细胞模型,并为探索建立肝癌MDR细胞株提供新的方法和思路,同时为研究肝癌细胞胰岛素抵抗与MDR的关系提供了模型细胞。