pCR3.1-bvLDH-C′_4的构建及在体内外的表达

精子特异性乳酸脱氢酶 (LDH C4)在精子的运动和存活等生理活动中起着重要的作用。研究表明 ,LDH C4接种鼠、兔等能够降低动物的生育率。通过RT PCR方法从布氏田鼠睾丸总RNA中克隆出编码抗原决定簇的LDH C4基因片断 ;采用T A克隆的方法将其插入到pCR3 1载体中构建重组载体pCR3 1 bvLDH C′4,测序结果表明克隆的基因片断与已知小鼠相应片断有 83 %的序列同源。通过质脂体法转染HeLa细胞 ,RT PCR证实其可在mRNA水平有效表达 ;通过肌肉接种BALB c小鼠 ,RT

hSAMP32基因疫苗的构建及对小鼠生育的影响

目的构建hSAMP32避孕疫苗,研究其对小鼠生育率的影响。方法扩增hSAMP32基因片段;hSAMP32基因测序;重组质粒pcDNA3.1(+)-hSAMP32的构建;观察BALB/c小鼠生殖能力是否受到影响。结果经对比,目的基因组较对照组穿卵率明显下降。结论 hSAMP32基因可以降低BALB/c小鼠的生殖能力。

定向进化提高嗜热拟青霉J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶在酸性条件下的催化能力

应用定向进化技术提高了嗜热拟青霉Paecilomyces thermophila J18耐热β-1,3-1,4-葡聚糖酶(PtLic16A)在酸性条件下的催化能力。结合易错PCR和DNA改组的方法,构建了β-葡聚糖酶的突变体文库;利用刚果红染色法建立了阳性克隆的高通量筛选体系。筛选得到的突变酶PtLic16AM1的反应最适pH由7.0变化至5.5,且保持了原有的耐热性和比酶活。突变酶的DNA序列中有4个点位发生突变,引发了4处氨基酸替换,分别是T58S、Y110N、G195E和D221G。结构模拟结果显示,发生突变的4个氨基酸位点中,Y110N位置靠近酶活性中心,而T58S、G195E和D221G则离酶活性中心较远,其中T58S、G195E可能对酶最适pH的变化起到了关键作用。

Dpc4基因转染胰腺癌细胞株对裸鼠胰腺癌移植瘤生长的影响

目的探讨Dpc4基因转染胰腺癌细胞株HS766T对裸鼠移植瘤生长的影响。方法按pcDNA3．1-DOe4是否转染人胰腺癌细胞株HS766T将细胞分为pcDNA3．1-Dpc4转染组、pcDNA3．1空载体组和未转染组，RT—PCR鉴定目的基因的表达；将3组细胞分别接种于裸鼠，比较Dpc4基因对裸鼠胰腺癌移植瘤的生长抑制作用，