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应用pCYB1载体表达胰高血糖素
1
作者
母敬郁
母凯平
+6 位作者
杨翰仪
相世和
潘风香
王峤
陈岚
李俐
VettaiAnanthanarayanan
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2002年第5期269-271,共3页
目的 研制基因工程胰高血糖素。方法 利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序。检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域(CBD)组成的融合蛋白表达量,确定...
目的 研制基因工程胰高血糖素。方法 利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序。检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域(CBD)组成的融合蛋白表达量,确定工程菌表达最适条件。利用几丁质结合柱进行亲和层析,在DTT作用下由intein在柱上进行自我切割,纯化胰高血糖素。SDS-PAGE检测融合蛋白表达量,SDS-PAGE在Tris-Tricine缓冲系统中电泳检测纯度,Lowry法检测蛋白质含量,Western blot检测免疫原性,升血糖实验检测活性并进行 N-末端测序。结果DNA测序显示表达产物基因序列正确,纯化胰高血糖素具有免疫原性和生物学活性,N-端15个氨基酸与天然产品相同,电泳呈单一谱带,产率为1.25mg/L。结论 获得分泌胰高血糖素基因工程菌,适于快速大规模生产。
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关键词
pcyb1载体
表达
胰高血糖素
Intein-CBD
下载PDF
职称材料
题名
应用pCYB1载体表达胰高血糖素
1
作者
母敬郁
母凯平
杨翰仪
相世和
潘风香
王峤
陈岚
李俐
VettaiAnanthanarayanan
机构
吉林大学药学院生物制药系
吉林大学基础医学院生物化学和分子生物学系
长春市第二医院
长春市中心医院
加拿大McMaster大学生化系。
.加拿大McMaster大学生化系。
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2002年第5期269-271,共3页
基金
国家留学基金委1997年资助项目
长春市2000年科技发展资助项目
文摘
目的 研制基因工程胰高血糖素。方法 利用pCYB1表达载体,亚克隆胰高血糖素基因后转化于BL21(DE3)菌种,并对阳性克隆的质粒进行DNA测序。检测不同条件下,IPTG诱导胰高血糖素-intein-几丁质结合结构域(CBD)组成的融合蛋白表达量,确定工程菌表达最适条件。利用几丁质结合柱进行亲和层析,在DTT作用下由intein在柱上进行自我切割,纯化胰高血糖素。SDS-PAGE检测融合蛋白表达量,SDS-PAGE在Tris-Tricine缓冲系统中电泳检测纯度,Lowry法检测蛋白质含量,Western blot检测免疫原性,升血糖实验检测活性并进行 N-末端测序。结果DNA测序显示表达产物基因序列正确,纯化胰高血糖素具有免疫原性和生物学活性,N-端15个氨基酸与天然产品相同,电泳呈单一谱带,产率为1.25mg/L。结论 获得分泌胰高血糖素基因工程菌,适于快速大规模生产。
关键词
pcyb1载体
表达
胰高血糖素
Intein-CBD
Keywords
Recombinant Glucagon Affinity chromatograply
分类号
TQ467.3 [化学工程—制药化工]
Q78 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用pCYB1载体表达胰高血糖素
母敬郁
母凯平
杨翰仪
相世和
潘风香
王峤
陈岚
李俐
VettaiAnanthanarayanan
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
2002
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