叶螨乙酰胆碱酯酶在pColdⅡ中的表达及活性分析

【目的】为了获得较高活性的螨AChE重组蛋白。【方法】将叶螨ace基因全长和去疏水区两种形式分别在pColdⅡ与pET-30a载体中表达,比较它们的表达效果。【结果】AChE在两种载体中成功表达,得到了较高纯度的AChE。与载体pET-30a比,AChE蛋白在pColdⅡ表达载体中的表达量、酶活性以及对毒扁豆碱的敏感性都更高,去掉羧基端疏水区有助于提高AChE的活性。【结论】此研究建立高活性AChE的表达系统,获得了大量活性较高的AChE重组蛋白,为AChE抑制剂的筛选提供试验基础。

朱砂叶螨几丁质酶TecCht1基因的原核表达与纯化

【目的】朱砂叶螨是世界范围广泛分布的重要经济害螨,害螨防治十分困难。而几丁质酶是昆虫体内几丁质代谢中分解几丁质的关键酶,在更替新旧表皮和降解围食膜中起着重要的作用,几丁质酶是潜在的螨害生物防治靶标。本研究对朱砂叶螨几丁质酶TecCht1进行原核表达和纯化。【方法】克隆朱砂叶螨TecCht1基因的催化结构域,连接到pColdⅡ载体上,构建pColdⅡ/TecCht1重组表达载体,在大肠杆菌中进行高效表达,采用镍柱纯化目的蛋白,并进行Western Blot检测。【结果】TecCht1在pColdⅡ载体上成功高水平表达,确定最佳诱导表达时间为24h。对TecCht1进行大量表达和纯化,经Western Blot验证,获得纯度较高的目的蛋白。【结论】实现TecCht1体外高效原核表达,获得大量的TecCht1重组蛋白。