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pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
1
作者
黄晓梅
张蕾
+6 位作者
左其生
施青青
李东
汤贝贝
张亚妮
宋九州
李碧春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期1253-1259,共7页
本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤...
本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80%BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20%的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cES:s,添加10μmol·L^(-1)维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cES:s,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平。结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP—hTERT转染的DF-1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP—hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P>0.05)。综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80%BRL-CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立。
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关键词
pegfp-htert
HTERT基因
BRL-CM
鸡胚胎干细胞
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职称材料
转染hTERT基因的大鼠神经干细胞生物学特性研究
被引量:
1
2
作者
李勇
李军
+3 位作者
窦琳
郑喜邦
杨春荣
窦忠英
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期7-12,共6页
目的:旨在研究hTERT基因所表达的蛋白对NSCs生物学特性的影响。方法:通过脂质体转染法将构建的重组质粒pEGFP-N1-hTERT转染到大鼠胎儿NSCs中,对转染的NSCs进行体外诱导分化试验、裸鼠致瘤性试验、RT-PCR、Western blot和流式细胞仪分析...
目的:旨在研究hTERT基因所表达的蛋白对NSCs生物学特性的影响。方法:通过脂质体转染法将构建的重组质粒pEGFP-N1-hTERT转染到大鼠胎儿NSCs中,对转染的NSCs进行体外诱导分化试验、裸鼠致瘤性试验、RT-PCR、Western blot和流式细胞仪分析。结果:转染的NSCs在体外培养中仍具有干细胞的生长特性和多潜能性、无致瘤性,转染重组质粒的NSCs中,存在hTERT基因mRNA的转录产物和融合蛋白hTERT-GFP的表达。结论hTERT基因对神经干细胞端粒酶活性有上调作用,可促进NSCs的体外增殖和永生化趋势。
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关键词
大鼠
NSCS
pEGFP-N1-hTERT
CD133流式细胞仪分析
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职称材料
hTERT重组绿色荧光表达载体的构建与表达
3
作者
李一冬
赵国新
曹明瑞
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期171-173,共3页
目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切...
目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERTmRNA表达水平。结果DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致。转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT。结论成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础。
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关键词
HTERT
绿色荧光表达载体
真核表达
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职称材料
题名
pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
1
作者
黄晓梅
张蕾
左其生
施青青
李东
汤贝贝
张亚妮
宋九州
李碧春
机构
扬州大学动物科学与技术学院江苏省动物繁育与分子设计重点实验室
Animal and Avian Science Dept. University of Maryland College Park
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第8期1253-1259,共7页
基金
国家自然科学基金(31272429
31301959)
江苏省研究生培养创新工程(CXLX12_0934)
文摘
本研究旨在通过构建重组质粒pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞(Chicken embryonic stem cells,cESCs),优化鸡胚胎干细胞培养体系,以期构建鸡胚胎干细胞株或细胞系。在获得hTERT基因后,构建重组质粒pEGFPhTERT,并利用FuGENE^(?)HD转染鸡成纤维细胞(DF-1),转染24 h后,荧光显微镜检测;再以80%BRL-CM(大鼠肝细胞条件培养基)与20%的ES基础培养液混合的条件培养基培养分离的cES:s,添加10μmol·L^(-1)维生素C,AKP染色以及相关表面抗原SSEA-1、SOX2和OCT4检测鉴定后,以G418筛选pEGFP-hTERT转染的cES:s,传代培养后荧光定量PCR检测相关干性基因的表达水平。结果表明:维生素C可以促进cESCs增殖,pEGFP—hTERT转染的DF-1细胞中可以检测到绿色荧光表达,pEGFP—hTERT转染的cESCs可持续传至10代以上,且仍保持未分化状态,干细胞表面特异性抗原检测呈阳性,且相关干性基因的表达水平差异不显著(P>0.05)。综上表明:pEGFP-hTERT转染的cESCs在80%BRL-CM结合外源因子的作用下,能够持续稳定传至10代且仍保持未分化状态,可应用于鸡胚胎干细胞的永生化和细胞系建立。
关键词
pegfp-htert
HTERT基因
BRL-CM
鸡胚胎干细胞
Keywords
pegfp-htert
hTERT gene
BRL-CM
cESCs
分类号
S831 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
转染hTERT基因的大鼠神经干细胞生物学特性研究
被引量:
1
2
作者
李勇
李军
窦琳
郑喜邦
杨春荣
窦忠英
机构
宁夏大学生命科学学院
西北农林科技大学国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第6期7-12,共6页
基金
国家“863”计划资助项目(2002AA216161)
文摘
目的:旨在研究hTERT基因所表达的蛋白对NSCs生物学特性的影响。方法:通过脂质体转染法将构建的重组质粒pEGFP-N1-hTERT转染到大鼠胎儿NSCs中,对转染的NSCs进行体外诱导分化试验、裸鼠致瘤性试验、RT-PCR、Western blot和流式细胞仪分析。结果:转染的NSCs在体外培养中仍具有干细胞的生长特性和多潜能性、无致瘤性,转染重组质粒的NSCs中,存在hTERT基因mRNA的转录产物和融合蛋白hTERT-GFP的表达。结论hTERT基因对神经干细胞端粒酶活性有上调作用,可促进NSCs的体外增殖和永生化趋势。
关键词
大鼠
NSCS
pEGFP-N1-hTERT
CD133流式细胞仪分析
Keywords
Rat NSCs pEGFP-NI-hTERT CD133 Flow cytometry analysis
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
hTERT重组绿色荧光表达载体的构建与表达
3
作者
李一冬
赵国新
曹明瑞
机构
郑州大学第一临床医学院妇产科
河南省医学科学研究所免疫室
出处
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期171-173,共3页
文摘
目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)片段的真核表达质粒。方法用RT-PCR方法从肝癌组织中提取总RNA扩增出hTERT基因片段,将其连接pGEM-TEasy质粒上,将重组质粒pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体同时用HindⅢ和BamHⅠ双酶切后进行连接,再将重组的pEGFP-C3-hTERT基因片段转染NIH3T3细胞,经G418筛选获得稳定转染的细胞系,荧光倒置显微镜观察并检测转染细胞的hTERTmRNA表达水平。结果DNA序列分析证实了重组载体pGEM-T-hTERT和pEGFP-C3-hTERT内插入片段的碱基组成与公开发表的hTERT序列一致。转染pEGFP-C3-hTERT的NIH3T3细胞可见绿色荧光,并检出高水平表达的hTERT。结论成功构建高效表达hTERT的真核表达载体,为以hTERT为靶点的肿瘤治疗打下实验基础。
关键词
HTERT
绿色荧光表达载体
真核表达
Keywords
hTERT
pEGFP-C3
eukaryotic expression
分类号
R730.5 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
pEGFP-hTERT转染鸡胚胎干细胞建系的研究
黄晓梅
张蕾
左其生
施青青
李东
汤贝贝
张亚妮
宋九州
李碧春
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2014
0
下载PDF
职称材料
2
转染hTERT基因的大鼠神经干细胞生物学特性研究
李勇
李军
窦琳
郑喜邦
杨春荣
窦忠英
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
下载PDF
职称材料
3
hTERT重组绿色荧光表达载体的构建与表达
李一冬
赵国新
曹明瑞
《中国现代医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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职称材料
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