pEGFR的表达与大鼠脊髓压迫性损伤后神经功能恢复的关系

目的探讨大鼠活化型表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,pEGFR)表达与脊髓压迫性损伤(compressed spinal cord injury,CSCI)后神经功能恢复的关系及可能的机制。方法制备大鼠脊髓压迫性损伤模型,运用BBB(Basso Beattie Bresnahan)评分观察动物解压后神经功能的恢复情况,免疫印迹(Western blotting,WB)检测pEGFR、total-caspase-3、active-caspase-3的表达变化,免疫荧光双标(double-labeling immunoflurescence)检测pEGFR-NG2+、active-caspase-3-NG2+细胞的变化。结果CSCI解压后,BBB评分随时间延长而逐渐增加;pEGFR的表达、pEGFR-NG2+细胞的数量随时间延长而逐渐增加并于解压后14 d达到高峰,而total-caspase-3、active-caspase-3的表达和activecaspase-3-NG2+细胞的数量在解压后即达到高峰并随时间延长逐渐降低。腹腔注射pEGFR抑制剂14 d后,pEGFR的表达、大鼠BBB评分较未注射pEGFR抑制剂组明显降低;total-caspase-3、active-caspase-3的表达和active-caspase-3-NG2+细胞显著增加。结论大鼠pEGFR的表达与CSCI解压后神经功能的恢复有关,其机制可能在于pEGFR参与了Caspase-3信号通路的调节。

慢性萎缩性胃炎脾虚血瘀证与pEGFR-ACAP4-ARF6表达的相关性

目的:探讨慢性萎缩性胃炎(CAG)脾虚血瘀证与p EGFR-ACAP4-ARF6的相关性。方法:收集经电子胃镜及病理检测确诊为CAG、并经中医辨证为脾虚血瘀证患者35例和脾胃湿热证患者44例,运用免疫组织化学的方法检测患者胃黏膜p EGFR、ACAP4及ARF6的表达,分析胃黏膜病理及中医证型与p EGFR-ACAP4-ARF6表达的相关性。结果:胃黏膜p EGFR-ACAP4-ARF6在脾虚血瘀证患者的胃黏膜表达高于脾胃湿热证患者(P<0.05),同时在CAG合并异型增生(DYS)患者胃黏膜的表达水平高于CAG不合并DYS患者(P<0.05)。结论:p EGFRACAP4-ARF6可能是CAG脾虚血瘀证的部分内在物质基础,在CAG疾病进展中发挥一定作用。

ADAM17通过EGFR-PI3K/Akt/p27通路调控前列腺癌细胞增殖

ADAM17是金属蛋白酶家族(ADAMs)成员之一,研究发现ADAM17可以通过水解细胞表面蛋白的胞外结构域导致肿瘤细胞的增殖和转移.本课题前期研究结果显示,与LNCap细胞相比,ADAM17在DU145细胞中高表达,且与细胞增殖相关.为了研究ADAM17与前列腺癌细胞增殖相关基因p27表达的关系及调控机制,我们采用RNAi技术下调ADAM17的表达,加入PMA(一种ADAM17的激活剂)上调ADAM17的表达,通过细胞计数和CCK-8方法检测细胞增殖,RT-PCR检测p27mRNA的表达,Western印迹检测ADAM17的表达;进一步阻断EGFR和PI3K/Akt信号转导,RT-PCR方法检测p27mRNA的表达,Western印迹检测ADAM17、EGFR、pEGFR、Akt和pAkt的表达.结果显示ADAM17的表达与前列腺癌细胞的增殖呈正相关(P<0.05);p27mRNA的表达与ADAM17的表达呈负相关(P<0.05);分别阻断EGFR和PI3K/Akt信号转导通路,同时使ADAM17表达增加,与对照组(单独PMA处理组)相比,p27mRNA的表达均增加(P<0.05).提示ADAM17调控前列腺癌细胞增殖相关基因p27表达是通过EGFR-PI3K/Akt信号通路实现的.

LRIG1基因对胶质瘤SHG44的放疗增敏作用

目的研究亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对人脑胶质瘤细胞系44细胞(SHG44)的放疗增敏作用。方法采用分子克隆技术,将构建的重组质粒p EGFP-C1-LRIG1转染SHG44,并稳定表达后在荧光显微镜下观察;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术研究放射照射后SHG44中目的基因LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)的信使核糖核酸(mRNA)表达情况;免疫组织化学法分析照射后SHG44中LRIG1和EGFR的蛋白表达差异;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析干预后SHG44的细胞增殖能力;细胞侵袭实验(Transwell)分析干预后SHG44的肿瘤侵袭能力。结果重组质粒p EGFP-C1-LRIG1转染SHG44细胞可稳定表达LRIG1;SHG44+p EGFP-C1-LRIG1细胞相对于SHG44、SHG44+p EGFP-C1细胞,LRIG1与EGFR基因的mRNA和蛋白的表达水平有显著差异(P<0.01);且SHG44+p EGFP-C1-LRIG1细胞的细胞活性及侵袭能力较SHG44、SHG44+p EGFP-C1细胞明显下降(P<0.01)。结论在胶质瘤SHG44细胞中过表达LRIG1基因可通过下调EGFR表达,抑制SHG44细胞的恶性生物学行为,增加放疗敏感性。