小鼠来源的OX40融合蛋白的表达鉴定及优化表达

目的鉴定及优化表达小鼠来源的OX40融合蛋白。方法将已构建好的pET32a-OX40重组质粒DNA转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,涂于含Amp平板筛选出阳性克隆,经Western blotting鉴定融合蛋白,对阳性克隆株通过改变异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、培养温度及时间条件,观察目的融合蛋白表达的变化。结果转化的质粒经Western blotting鉴定,证实有目的蛋白表达。当温度、时间不变时,IPTG分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0 mmol/L,7个不同浓度实验结果以0.4 mmol/L时蛋白表达量最高。当IPTG浓度、时间不变时,在20、25、30、35、40℃不同的温度点,以30℃时蛋白表达量最高。当温度、IPTG浓度不变时,1、2、3、4、5、6 h不同时间点,以4 h时蛋白表达量最高。结论小鼠来源的OX40融合蛋白在BL21细胞获得成功表达,并获得其最佳表达条件(IPTG浓度0.4 mmol/L、温度30℃、诱导4 h)。