目的构建人miR-93真核表达载体,并验证其表达效果,为进一步研究miR-93的生物学功能提供有利工具。方法用PCR方法从293T细胞基因组DNA中扩增miR-93前体序列,引物引入酶切位点和保护碱基,产物用限制性内切酶EcoRⅠ和BglⅡ双酶切后插入pEZX...目的构建人miR-93真核表达载体,并验证其表达效果,为进一步研究miR-93的生物学功能提供有利工具。方法用PCR方法从293T细胞基因组DNA中扩增miR-93前体序列,引物引入酶切位点和保护碱基,产物用限制性内切酶EcoRⅠ和BglⅡ双酶切后插入pEZX-MR04表达载体中,构建miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93。构建好的载体用双酶切、PCR和测序鉴定,同时转染293T细胞,用Real time PCR检测重组pEZX-MR04-miR-93质粒的miR-93表达效率。结果成功构建miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93,重组pEZX-MR04-miR-93质粒转染293T细胞后miR-93表达上升约21倍。结论构建的miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93可显著上调细胞中miR-93水平,为进一步研究miR-93在泌尿系肿瘤中的生物学功能提供可靠工具,奠定了坚实的实验基础。展开更多
文摘目的构建人miR-93真核表达载体,并验证其表达效果,为进一步研究miR-93的生物学功能提供有利工具。方法用PCR方法从293T细胞基因组DNA中扩增miR-93前体序列,引物引入酶切位点和保护碱基,产物用限制性内切酶EcoRⅠ和BglⅡ双酶切后插入pEZX-MR04表达载体中,构建miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93。构建好的载体用双酶切、PCR和测序鉴定,同时转染293T细胞,用Real time PCR检测重组pEZX-MR04-miR-93质粒的miR-93表达效率。结果成功构建miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93,重组pEZX-MR04-miR-93质粒转染293T细胞后miR-93表达上升约21倍。结论构建的miR-93真核表达载体pEZX-MR04-miR-93可显著上调细胞中miR-93水平,为进一步研究miR-93在泌尿系肿瘤中的生物学功能提供可靠工具,奠定了坚实的实验基础。
