目的 :克隆小鼠内皮抑素 (m Endostatin)编码区 c DNA序列并构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和 m Endo-statin双基因表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应法 (RT- PCR) ,以小鼠肝细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m Endostatin,与 p MD1...目的 :克隆小鼠内皮抑素 (m Endostatin)编码区 c DNA序列并构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和 m Endo-statin双基因表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应法 (RT- PCR) ,以小鼠肝细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m Endostatin,与 p MD1 8T载体连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和m Endostatin双基因表达质粒。结果 :经测序证实获得的 m Endostatin序列与文献报道完全一致 ,并构建了含 Egr-1启动子的 IFNγ和 m Endostatin双基因表达质粒 p Egr- IFNγ- m Endostatin。结论 :利用 RT- PCR法成功克隆了m Endostatin的 c DNA序列 ,构建了 p Egr- IFNγ- m Endostatin重组双基因表达质粒。展开更多
目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,...目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和 p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,以脂质体转染小鼠 B1 6细胞 ,用 Western blot方法检测 B1 6细胞上清中内皮抑素的表达。结果 :测序表明扩增的分泌型内皮抑素序列与报道完全一致 ,Egr-1启动子和分泌型内皮抑素 c DNA正确插入表达载体 pc DNA3 .1 ,Western blot证实转染 B1 6细胞上清中有目的蛋白表达。结论 :小鼠内皮抑素基因成功地被克隆和表达 ,为今后检测 p Egr-分泌型内皮抑素的辐射诱导表达和恶性肿瘤的基因展开更多
文摘目的 :克隆小鼠内皮抑素 (m Endostatin)编码区 c DNA序列并构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和 m Endo-statin双基因表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应法 (RT- PCR) ,以小鼠肝细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m Endostatin,与 p MD1 8T载体连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和m Endostatin双基因表达质粒。结果 :经测序证实获得的 m Endostatin序列与文献报道完全一致 ,并构建了含 Egr-1启动子的 IFNγ和 m Endostatin双基因表达质粒 p Egr- IFNγ- m Endostatin。结论 :利用 RT- PCR法成功克隆了m Endostatin的 c DNA序列 ,构建了 p Egr- IFNγ- m Endostatin重组双基因表达质粒。
文摘目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和 p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,以脂质体转染小鼠 B1 6细胞 ,用 Western blot方法检测 B1 6细胞上清中内皮抑素的表达。结果 :测序表明扩增的分泌型内皮抑素序列与报道完全一致 ,Egr-1启动子和分泌型内皮抑素 c DNA正确插入表达载体 pc DNA3 .1 ,Western blot证实转染 B1 6细胞上清中有目的蛋白表达。结论 :小鼠内皮抑素基因成功地被克隆和表达 ,为今后检测 p Egr-分泌型内皮抑素的辐射诱导表达和恶性肿瘤的基因
