pEgr-angiostatin基因辐射诱导表达特性及其抗肿瘤作用

目的 :检测 p Egr- angiostatin重组质粒在 B1 6细胞中的辐射诱导表达和观察 p Egr-angiostatin基因 -放射治疗的抗肿瘤作用。方法 :用 RT- PCR方法从小鼠肝脏中扩增出 angiostatinc DNA,经测序证实后 ,构建 p Egr- angiostatin重组质粒 ,脂质体介导的转染法转染小鼠 B1 6细胞 ,检测 B1 6细胞内 angiostatin m RNA的辐射诱导表达 ,体内观察 p Egr- angiostatin基因 -放射治疗的抑瘤作用。结果 :测序表明扩增的 angiostatin c DNA序列与报道基本一致 ,Egr- 1启动子和 angiostatinc DNA正确插入表达载体 pc DNA3.1 ,转染 B1 6细胞内 angiostatin m RNA的表达具有辐射诱导特性 ,p Egr- angiostatin基因 -放射治疗荷瘤小鼠具有明显的抑瘤作用。结论 :成功地克隆小鼠angiostatin基因 ,并证实 p Egr- angiostatin的辐射诱导表达规律及其基因

小鼠内皮抑素基因克隆、测序及pEgr-IFNγ-mEndostatin重组双基因表达质粒的构建

目的 :克隆小鼠内皮抑素 (m Endostatin)编码区 c DNA序列并构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和 m Endo-statin双基因表达载体。方法 :利用逆转录多聚酶链反应法 (RT- PCR) ,以小鼠肝细胞 m RNA为模板 ,扩增获得全长 m Endostatin,与 p MD1 8T载体连接作全自动测序 ,并利用基因重组技术构建含 Egr- 1启动子的 IFNγ和m Endostatin双基因表达质粒。结果 :经测序证实获得的 m Endostatin序列与文献报道完全一致 ,并构建了含 Egr-1启动子的 IFNγ和 m Endostatin双基因表达质粒 p Egr- IFNγ- m Endostatin。结论 :利用 RT- PCR法成功克隆了m Endostatin的 c DNA序列 ,构建了 p Egr- IFNγ- m Endostatin重组双基因表达质粒。

pEgr-ssEndostatin的构建及其在体外的辐射诱导表达

为探讨 pEgr-ssEndostatin 重组质粒转染 B16 细胞后接受不同辐射剂量以及接受同一剂量不同时程endostatin 表达的规律。采用 RT-PCR 方法从鼠肝脏中扩增出 Endostatin cDNA,连入信号肽,构建了pEgr?ssEndostatin 重组质粒,用脂质体介导的转染法转染小鼠 B16 细胞,用 ELISA 方法检测 B16 细胞上清中endostatin 的表达水平。结果表明的分泌型 Endostatin 序列与报道完全一致,Egr-1 启动子和 Endostatin cDNA正确插入表达载体 pcDNA3.1;pEfr-ssEndostatin 具有辐射诱导表达特性。提示小鼠 Endostatin 基因成功地被克隆和表达,Egr-1 启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能。

重组质粒pcEgr-hp53的构建及在A549和SKOV-3细胞中电离辐射诱导p53基因和蛋白的表达

目的构建重组质粒pcEgr-hp53,并探讨其在A549和SKOV-3细胞中的辐射诱导表达及抗癌作用。方法将野生型p53 cDNA全长插入pcDNA3.1质粒多克隆位点,用Egr-1启动子替代pcDNA3.1质粒CMV启动子,构建成pcEgr-hp53重组质粒;通过脂质体介导转染法将重组质粒pcEgr-hp53和pcDNA3.1分别转染入A549和SKOV3细胞株,并经G418筛选稳定克隆并扩增培养。采用RT-PCR和流式细胞术的方法检测了不同剂量X-射线照射转染后的A549和SKOV-3细胞p53基因转录水平和蛋白表达的变化。结果经限制性内切酶酶切鉴定,辐射诱导表达载体pcEgr-hp53构建正确。与0 Gy比较,A549-hp53和SKOV-3-hp53经0.5-5 Gy照射后,p53 mRNA水平增高;A549-hp53在2-5 Gy后,p53蛋白表达显著增高(P<0.01),SKOV-3-hp53其蛋白表达随剂量(0.5-5 Gy)增加而明显增加(P<0.05-P<0.01)。A549-hp53与A549-vect相同照射剂量组比较,其p53蛋白表达在0.5 Gy照射后明显下降(P<0.05),2-5 Gy照射后明显增高(P<0.01);SKOV-3-hp53与SKOV-3-vect相同照射剂量组比较,其蛋白表达在0 Gy时增高,0.5-5 Gy照射后明显增高(P<0.01)。结论X-射线可激活早期反应生长因子Egr-1,无论肿瘤细胞p53基因状态如何,均可诱导其下游基因p53 mRNA及其p53蛋白表达增强。