pEgr-hPTEN体外稳定转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期及增殖的影响

目的 探讨外源野生型PTEN基因对人脑胶质瘤SHG 4 4细胞周期及增殖的影响 ,阐明PTEN基因抑制肿瘤细胞增殖的机制。方法 脂质体包裹重组质粒pEgr hPTEN体外转染内源性PTEN基因突变的SHG 4 4胶质瘤细胞 ;G4 18筛选稳定表达细胞株并扩增培养 ;采用细胞计数法检测肿瘤细胞增殖速度 ;流式细胞术检测肿瘤细胞周期的变化。结果 经 10到 2 0dG4 18筛选得到稳定表达细胞株 ;重组质粒pEgr hPTEN稳定转染可明显抑制SHG 4 4细胞的体外增殖 ,细胞周期明显改变 ,细胞从G1期到S期发生阻滞。结论 提示转染外源野生型PTEN基因可使SHG 4 4细胞周期阻滞于G1期 ,并可抑制肿瘤细胞增殖。

电离辐射诱导pEgr-hPTEN表达增强其体外抗肿瘤作用

目的:研究辐射诱导表达载体p Egr- h PTEN体外稳定转染联合X射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG- 4 4增殖和诱导细胞凋亡的作用。方法:以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的表达载体p Egr- h PTEN转染人胶质瘤SHG- 4 4细胞,筛选稳定转染细胞克隆并扩增培养,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞仪及生长曲线测定稳定转染联合0～10 Gy X射线照射对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。结果:SHG- 4 4 - h PTEN稳定转染细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5 Gy以内呈剂量依赖性增加。稳定转染联合辐射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖并诱导肿瘤细胞凋亡,照射后第8天稳定转染不同剂量组细胞数仅为稳定转染0 Gy假照组的30 .0 %～5 0 .0 %和未转染0 Gy假照组的7.7%～13.0 % ;稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0 Gy假照组的1.5～2 .3倍、未转染照射组的1.9～4 .4倍及未转染0 Gy假照组的3.4～5 .1倍。结论:体外基因-放射联合作用可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,具有显著的肿瘤抑制作用。

辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN的构建及其体外抗肿瘤作用的研究

目的 克隆人野生型抑癌基因PTEN MMAC1cDNA序列、构建辐射诱导表达载体pEgr hPTEN并研究其体外稳定转染联合X 射线照射对恶性胶质瘤细胞SHG 44增殖的抑制作用。方法利用RT nestedPCR法从正常人胎盘组织中扩增出约 12 0 0bp的PTEN片段 ,并将其重组入pcDNA3 .1 Egr载体中 ,构建为表达质粒pEgr hPTEN ,体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定转染细胞株SHG 44 sPTEN ,接受不同剂量X射线照射 ,观察基因 放射联合作用对肿瘤细胞生长的影响。结果 经全自动测序证明克隆得到了野生型PTEN基因 ;辐射诱导表达载体pEgr hPTEN构建正确 ;稳定转染联合X -射线照射可明显抑制肿瘤细胞的恶性增殖 ,5Gy以内随吸收剂量的增加 ,肿瘤抑制作用更明显。结论 本研究成功克隆了人野生型抑癌基因PTEN MMAC1cDNA序列并构建了辐射诱导表达载体pEgr hPTEN ,体外基因 放射联合治疗具有明显的肿瘤抑制作用。本研究为提高临床恶性肿瘤放疗疗效奠定了理论和实验基础。

pEgr-hPTEN稳定转染联合辐射诱导人胶质瘤SHG-44细胞凋亡及Bcl-2表达下调

目的探讨辐射诱导表达载体pEgr hPTEN体外稳定转染人胶质瘤SHG44细胞后联合X射线照射,诱导细胞凋亡的作用及凋亡相关蛋白Bcl2表达的变化。方法以脂质体介导携有外源野生型PTEN基因的辐射诱导表达载体pEgr hPTEN,体外转染SHG44细胞,筛选稳定转染的细胞克隆并扩增培养;应用电子显微镜、流式细胞仪等方法,检测稳定转染联合X射线照射对胶质瘤细胞超微结构、细胞凋亡及Bcl2蛋白表达等特性的影响。结果稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡,5Gy以内随吸收剂量的增加,早期凋亡细胞百分数明显增加,稳定转染不同剂量照射组早期凋亡细胞百分数分别为稳定转染0Gy假照组的1.5～2.3倍、为未转染照射组的1.9～4.4倍、为未转染0Gy假照组的3.4～5.1倍;同时稳定转染细胞Bcl2蛋白表达则呈剂量依赖性下降。结论体外PTEN基因转染联合X射线照射可诱导肿瘤细胞凋亡明显增多,Bcl2蛋白表达下调,具有显著的肿瘤抑制作用。

PTEN基因稳定转染联合辐射对肿瘤细胞周期进程及G_1期激酶抑制蛋白P27^(kip1)表达的影响

目的:研究辐射诱导表达载体pEgr-hPTEN体外转染对人脑胶质瘤SHG-44细胞周期进程及G1期激酶抑制蛋白P27表达的影响。方法:脂质体包裹重组载体体外转染肿瘤细胞并经G418筛选稳定表达细胞株,光学显微镜和透射电镜观察稳定转染细胞形态,以Western blotting法检测PTEN基因的辐射诱导表达情况,应用流式细胞术研究稳定转染联合0~10Gy X-射线照射对胶质瘤细胞周期进程及P27kip1的表达。结果:稳定转染PTEN基因的SHG-44细胞PTEN蛋白的相对表达量可被辐射诱导增强,5Gy以内PTEN蛋白的相对表达量随照射剂量增加而增加;稳定转染细胞超微结构有明显的退行性改变,可见核内染色质趋边的类似早期凋亡的改变;稳定转染联合X-射线照射细胞周期发生明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞,细胞周期相关蛋白P27表达上调。结论:PTEN基因稳定转染联合辐射可诱导肿瘤细胞G1期阻滞,并与P27kip1表达上调有关。