潮霉素抗性基因筛选标记质粒的构建及LL37的表达

为了实现以潮霉素磷酸转移酶基因(hpt)为选择标记的质粒在毕赤酵母中高效表达抗菌肽LL37,在pGAPZαA质粒的基础上,通过EcoRⅤ、BamHⅠ双酶切将Zeocin抗性基因替换成潮霉素磷酸转移酶基因,获得的表达质粒命名为pGAPHαA。根据LL37氨基酸序列,通过毕赤酵母密码子偏嗜性改造,合成的LL37基因片段克隆到pGAPHαA质粒中,获得重组分泌型表达质粒pGAPHαA-LL37,线性化后电击转化毕赤酵母SMD1168,经潮霉素B筛选阳性转化子。72h表达上清LL37蛋白含量约为167μg/mL,表达产物耐热性好,对大肠杆菌DH5α、猪链球菌最小抑菌浓度分别为2.94、7.06μg/mL。

苦瓜MAP30基因的密码子优化及在毕赤酵母中的表达

以苦瓜为试材,采用SDS-PAGE和Western-blot的方法,研究经密码子优化后的苦瓜MAP30(Momordica anti-HIV protein of 30kDa)基因在新型毕赤酵母中的表达。结果表明:与未优化基因相比,优化基因在新型毕赤酵母中的表达量有所提高。pGAPHα与甲醇诱导型启动子(pPIC9)相比提高了安全性,适合应用到医药领域。