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融合蛋白表达载体pGEX及其应用
被引量:
31
1
作者
周宇荀
魏东芝
王二力
《生命科学》
CSCD
1998年第3期122-124,共3页
表达融合蛋白的载体pGEX是Smith和Johnson于1987年构建的[1];它的特点是在载体上接上了一种26kD的谷胱甘肽S-转移酶基因,与其它的融合载体相比,它具有纯化条件温和、步骤简单、无变性剂加入,以及纯化后蛋白能最大限度保持其空间...
表达融合蛋白的载体pGEX是Smith和Johnson于1987年构建的[1];它的特点是在载体上接上了一种26kD的谷胱甘肽S-转移酶基因,与其它的融合载体相比,它具有纯化条件温和、步骤简单、无变性剂加入,以及纯化后蛋白能最大限度保持其空间构象和免疫原性的特点;具有较好的应用价值。
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关键词
pgex质粒
融合蛋白
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职称材料
一种L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒的构建及高效表达
2
作者
肖静
杨元好
+1 位作者
吴永国
唐娟
《贵阳中医学院学报》
2012年第5期13-16,共4页
目的:拟通过构建人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒,并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化表达产物,从而获得重组蛋氨酸裂解酶。方法:PCR法从人阴道毛滴虫的基因组中获得L-蛋氨酸γ-裂解酶获得L-蛋氨酸γ-裂解酶基因片段,并克隆至pGEX4T-...
目的:拟通过构建人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒,并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化表达产物,从而获得重组蛋氨酸裂解酶。方法:PCR法从人阴道毛滴虫的基因组中获得L-蛋氨酸γ-裂解酶获得L-蛋氨酸γ-裂解酶基因片段,并克隆至pGEX4T-2质粒,获得重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下,实现高效表达,表达产物经亲和层析纯化获得重组L-蛋氨酸γ-裂解酶。结果:表达产物进行SDS-PAGE检测,结果表明在相对分子质量68000处出现高浓度的GST融合蛋白,相对分子质量与预期大小相符;薄层扫描显示重组蛋白占总菌量的33.6%。结论:人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒构建成功,并成功地获得高效表达。
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关键词
L-蛋氨酸γ-裂解酶
pgex
4T-2
质粒
逆转录PCR
基因克隆
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职称材料
细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达
被引量:
3
3
作者
周必英
陈雅棠
+1 位作者
李文桂
杨梅
《热带医学杂志》
CAS
2009年第3期227-230,234,共5页
目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌BL21,经...
目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
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关键词
细粒棘球绦虫
重组
质粒
pgex
—Eg95
大肠杆菌
原文传递
题名
融合蛋白表达载体pGEX及其应用
被引量:
31
1
作者
周宇荀
魏东芝
王二力
机构
华东理工大学生化研究所生物反应器国家重点实验室
出处
《生命科学》
CSCD
1998年第3期122-124,共3页
文摘
表达融合蛋白的载体pGEX是Smith和Johnson于1987年构建的[1];它的特点是在载体上接上了一种26kD的谷胱甘肽S-转移酶基因,与其它的融合载体相比,它具有纯化条件温和、步骤简单、无变性剂加入,以及纯化后蛋白能最大限度保持其空间构象和免疫原性的特点;具有较好的应用价值。
关键词
pgex质粒
融合蛋白
分类号
Q51 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
一种L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒的构建及高效表达
2
作者
肖静
杨元好
吴永国
唐娟
机构
深圳市宝安区松岗人民医院检验科
出处
《贵阳中医学院学报》
2012年第5期13-16,共4页
基金
深圳市科技计划项目(项目编号:200903191)
文摘
目的:拟通过构建人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒,并使其在大肠杆菌中高效表达,纯化表达产物,从而获得重组蛋氨酸裂解酶。方法:PCR法从人阴道毛滴虫的基因组中获得L-蛋氨酸γ-裂解酶获得L-蛋氨酸γ-裂解酶基因片段,并克隆至pGEX4T-2质粒,获得重组质粒,转化至大肠杆菌DH5α中,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导下,实现高效表达,表达产物经亲和层析纯化获得重组L-蛋氨酸γ-裂解酶。结果:表达产物进行SDS-PAGE检测,结果表明在相对分子质量68000处出现高浓度的GST融合蛋白,相对分子质量与预期大小相符;薄层扫描显示重组蛋白占总菌量的33.6%。结论:人阴道毛滴虫的L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒构建成功,并成功地获得高效表达。
关键词
L-蛋氨酸γ-裂解酶
pgex
4T-2
质粒
逆转录PCR
基因克隆
分类号
R446.6 [医药卫生—诊断学]
下载PDF
职称材料
题名
细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达
被引量:
3
3
作者
周必英
陈雅棠
李文桂
杨梅
机构
重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所
遵义医学院寄生虫学教研室
出处
《热带医学杂志》
CAS
2009年第3期227-230,234,共5页
基金
国家自然科学基金(No.30801052
No.30671835
No.30500423和No.30200239)
文摘
目的构建细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,并研究该质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达。方法超声粉碎细粒棘球蚴组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增Eg95抗原编码基因;克隆至原核表达载体pGEX-1λT,构建重组质粒pGEX-Eg95;转化大肠杆菌BL21,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用SDS-PAGE和Western blotting对表达产物进行分析和鉴定。结果RT-PCR扩增出471 bp的Eg95抗原编码基因;双酶切证实Eg95抗原编码基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE分析显示表达产物为相对分子质量约42 500的重组蛋白,与预期结果一致,表达的蛋白约占菌体总蛋白的21%;Western blot鉴定显示重组蛋白能被细粒棘球蚴感染鼠血清识别。结论成功构建了细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95,该质粒在大肠杆菌BL21中获得了高效融合表达,表达的融合蛋白具有特异的抗原性。
关键词
细粒棘球绦虫
重组
质粒
pgex
—Eg95
大肠杆菌
Keywords
Echinococcus granulosus
recombinant plasmid
pgex
-Eg95
Escherichia coli
分类号
R383.33 [医药卫生—医学寄生虫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
融合蛋白表达载体pGEX及其应用
周宇荀
魏东芝
王二力
《生命科学》
CSCD
1998
31
下载PDF
职称材料
2
一种L-蛋氨酸γ-裂解酶质粒的构建及高效表达
肖静
杨元好
吴永国
唐娟
《贵阳中医学院学报》
2012
0
下载PDF
职称材料
3
细粒棘球绦虫重组质粒pGEX-Eg95的构建及其在大肠杆菌BL21(DE3)中的表达
周必英
陈雅棠
李文桂
杨梅
《热带医学杂志》
CAS
2009
3
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