铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-PopB的构建、鉴定及其在大肠埃希菌中的表达效率

目的构建和鉴定铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-PopB,并研究该质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中的表达。方法以铜绿假单胞菌PA01标准株的DNA为模板,通过PCR扩增PopB基因。经酶切后与载体pGEX-1λT连接,构建重组质粒pGEX-PopB,电穿孔将其转化至大肠埃希菌BL21(DE3)。异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导重组菌BL21(pGEX-PopB)的表达,SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行分析和鉴定。结果PCR扩增出1200 bp的PopB基因;双酶切和PCR证实PopB基因成功插入pGEX-1λT中;SDS-PAGE发现重组菌表达相对分子质量约66×103的融合蛋白,其蛋白表达量约占菌体总量的20%;Western blot证实铜绿假单胞菌感染的鼠血清能特异性识别该重组蛋白。结论成功构建了铜绿假单胞菌重组质粒pGEX-PopB,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达具有抗原特异性的融合蛋白。