人重组pEGFPC1-uPA ATF质粒的构建及表达的研究

目的构建含人uPA ATF基因的真核表达质粒,并研究其对小鼠细胞株Pam212细胞的影响。方法设计引物,利用PCR从原核表达质粒中扩增人uPA ATF基因片断,并导入真核表达载体的绿色荧光蛋白pEGFPC1中,利用电泳和测序检测构建状况,荧光显微镜观察和免疫细胞化学检测转染情况,通过MTT、体外迁移实验检测对小鼠Pam212细胞株的影响。结果电泳和测序表明构建的质粒准确,uPA ATF cDNA阅读框完整,连接部位序列正确;质粒转染Pam212细胞株成功,并且能抑制细胞的增殖和迁移。结论成功构建了真核表达载体pEGFPC1-uPA ATF质粒,明确了人uPA ATF基因片断能降低小鼠细胞的增殖和迁移,为进一步在体实验研究打下了基础。