受缺氧反应元件调控的荧光素酶报告基因在缺氧肿瘤细胞内的表达活性研究

目的研究缺氧反应元件调控的荧光素酶报告基因在肿瘤细胞内的缺氧反应性。方法将pGL3—6HRE—TATA—luciferase—SV40pa报告载体以Lipofectamine2000介导瞬时转染Helas3和HepG2细胞，分别于缺氧（1％O2）和常氧（21％O2）培养后检测相对荧光素酶活性。结果pGL3—6HRE—TATA—luciferase—SV40pa报告载体转染细胞后，缺氧培养条件下相对荧光素酶的活性较常氧培养条件下显著上调，差异具有统计学意义（P〈0．01），并且该缺氧诱导性具有一定的时间依赖性，即Helas3细胞中，缺氧培养12—24h，相对荧光素酶的活性上升到了最高值；而HepG2细胞中，缺氧培养36h，相对荧光素酶的活性上升到了最高值。结论6HRE人工启动子在肿瘤细胞内具有显著的缺氧诱导性；6HRE人工启动子缺氧诱导性具有一定的时间效应，并且在不同肿瘤细胞中其诱导效应和时间效应可存在着差异。研究结果为实体肿瘤基因治疗奠定了理论和实验基础。