利用pGenesil-1.0构建人Dna2真核表达干扰载体

目的:构建人基因Dna2干扰(RNAi)的真核表达载体.方法:根据GenBank上人Dna2的cDNA序列设计并合成两条单链寡核苷酸,退火以后,插入质粒pGenesil-1.0多克隆位点的BamH I和Hind III之间进行重组,构建重组干扰载体,转化DH5α后测序鉴定出阳性菌株.重组质粒以脂质体法转染HeLa细胞,提取Dna2蛋白以免疫印迹法检验干扰效果.结果:设计的目的干扰序列5’-catagccagtagtattcgatg-3’可明显抑制Dna2在HeLa细胞的表达.结论:利用pGenesil-1.0构建的人Dna2干扰载体适用于该基因功能研究.

HDAC2基因RNA干扰载体的构建

目的:构建组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因RNA慢病毒干扰质粒载体。方法:对比HDAC2基因序列,设计并合成短发夹RNA(shRNA)干扰靶点序列,克隆入经Age I与EcoRI双酶切后的RNA干扰载体p LKO.1-puro,构建p LKO.1-HDAC2-shRNA重组质粒,采用酶切法和测序法验证重组质粒。结果:成功退火合成3对短发夹RNA序列并将其克隆入p LKO.1-puro载体中,构建重组质粒p LKO.1-HDAC2-shRNA1、p LKO.1-HDAC2-shRNA2及p LKO.1-HDAC2-shRNA3,经酶切鉴定和测序验证重组质粒载体与预期靶序列相同。结论:成功构建HDAC2-shRNA慢病毒干扰载体,为进一步研究HDAC2的功能及应用提供有效工具。