重组海藻糖合成酶工程菌的pH-stat高密度发酵工艺研究

重组海藻糖合成酶工程菌的分批补料发酵中,用氨水调节培养液的pH为6.78～6.80,初糖耗尽后按培养液的pH从6.80起每升高0.01即开始补充葡萄糖至0.7g·L-1。据此补料策略可将发酵过程的乙酸积累控制在6.26g·L-1以下;补料发酵12h后,即获得细胞干重为51.5g·L-1的细胞高密度,细胞密度是分批培养的7.5倍;诱导后重组海藻糖合成酶表达率为15.2%,单位体积内的表达量是分批培养的4.5倍。

pH-stat控制流加培养红发夫酵母产虾青素

通过酸碱流加培养、混合碳源-氨水流加培养、混合碳源-尿素流加培养等pH-stat控制流加培养红发夫酵母产虾青素。pH-stat控制流加培养与分批培养相比较,生物量及虾青素产量都有不同程度地提高。从提高虾青素产量和降低生产成本综合考虑,混合碳源-氨水流加培养是最理想的方法,培养96 h虾青素产量最高达到19.94 mg/L。

pH-stat法在测定酶促反应米氏常数中的应用

在pH值为7.2,温度为40℃的条件下,As1.398中性蛋白酶水解大豆分离蛋白,采用pH-stat法结合Ex-cel软件方便准确地求出酶促反应的初始速度,从而根据Lineweaver-Burk双倒数方程计算出该酶的最大反应速度(Vmax)和米氏常数(Km).实验条件下,As1.398蛋白酶的Km值为1.46 mg/mL.

改良pH稳态血气管理+单/双侧选择性脑灌注在全主动脉弓替换术中的应用

目的观察深低温时动脉二氧化碳分压(PaCO2)与颈静脉球氧分压(PjvO2)的相关性,评价DebakeyI型主动脉夹层行全主动脉弓替换术中采用改良pH+α稳态血气管理体外循环方法的临床预后。方法16例全主动脉弓替换术病人随机分为单侧或双侧顺行选择性脑灌注组,每组各8例。术中采用改良pH+α稳态血气管理,经氧合器及颈静脉球取血进行血气分析。所有病人均行术前术后认知功能测验等神经精神检查。结果深低温时,PaCO2与PjvO2呈正相关;两组各有1例出现短暂性神经功能异常,两组间认知功能变化无显著性差异。结论1.深低温时,PaCO2与PjvO2呈正相关;2.DebakeyI型主动脉夹层全弓替换术中目前采用的改良pH+α稳态体外循环方法切实可行,临床预后满意。

恒pH补料分批培养技术培养谷胱甘肽合成酶系

采用一种新的补料分批培养技术 ,培养重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系 .在分批培养和补料分批培养期间 ,采用不同的pH控制模式 :在发酵前期采用分批培养 ,加入碱以补偿pH值的降低 ;而在发酵后期 ,采用一种新的恒 pH补料分批培养方式 ,加入葡萄糖和碱调节发酵液的 pH .在这种模式中 ,根据培养过程中的pH变化确定pH参数 .实验结果表明 :同时设置发酵液的 pH上限和下限可避免恒 pH补料分批培养过程中葡萄糖的周期性缺乏问题 ;对于缓冲能力不同的发酵液 ,应设置不同的pH参数来进行

恒pH葡萄糖流加方法培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子-α及其动力学研究

研究了一种新型的流加方法──恒pH流加葡萄糖法，用于培养重组大肠杆菌生产人肿瘤坏死因子-α。流加后培养液中菌体OD(600)达到9．0，是在LB培养基培养的15倍，而α-肿瘤坏死因子的比活保持（1．05±0．11）×105u/mg，并建立了菌体生长的动力学方程。

低温体外循环心内直视术中a稳态和PH稳态的对比研究

目的探讨低温体外循环心内直视术(CPBS)中血气分析两种管理方法a稳态和PH稳态哪种更为合理。方法20例风湿性心脏病患者需行双瓣置换术病人随机分A、B两组,各10例。术前测定血气分析后将各项指标调至正常,转流后A组应用PH稳态管理,B组应用a稳态管理,分别于降温至27℃时、调整灌注指标20min后,复温至31℃后抽血气分析(各组血气样本数n=30)。结果a稳态与PH稳态相比27℃时a稳态PH值低0.15±0.01,PCO2高(14±2)mmHg。31℃时a稳态PH值低0.09±0.01,PCO2高(9±1)mmHg。A组正常者(温度校正值PH为7.40,PCO2为40mmHg左右),37℃测定值明显呼吸性酸中毒。B组正常者(37℃测定值PH为7.40,PCO2为40mmHg左右),实际低温明显呼吸性碱中毒。两种管理方法处理血气结果有显著差异(P>0.05)。结论PH稳态管理增加CO2总量,使脑血管扩张,增加脑血流,使脑血流与脑代谢失匹配,加重复温期间酸中毒,不利于大脑灌注的调节;a稳态管理能维持脑血流自身调节机制,避免脑组织奢侈灌注现象,维持a稳态,更有利于大脑灌注的调节。

体外循环心脏手术α稳态、pH稳态下颈动、静脉血乳酸值的变化

目的 探讨体外循环心脏直视手术 (Cardiopulmonarybypasssurgery ,CPBS)α稳态 (α stat)方式与pH稳态 (pH stat)方式对脑氧代谢的影响。方法 6 2名CPBS患者随机分为α stat组和pH stat组 ,于CPBS的不同阶段观察颈动、静脉血乳酸值的变化。结果 α stat和pH stat下脑血乳酸值明显增高 ,并于复温末期增至最大 ,说明脑组织乏氧代谢增强 ,机体存在氧债。α stat组组内比较无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,而pH stat组复温过程中 (鼻温升至 35℃ )颈静脉血乳酸值比动脉血乳酸值明显增高 (P <0 .0 5 ) ,说明该组脑组织乏氧程度更严重 ;但两组间比较无统计学意义。结论 不论是α stat还是pH stat均可使脑氧利用率降低 ,乏氧代谢增强 ,而pH稳态脑组织乏氧程度似乎更严重 ,但二者对脑氧代谢率 (Cerebralmetabolicrateforoxygen ,CMRO2 )的影响无何不同。

油菜蜂花粉蛋白水解度测定方法比较

采用Alcalase2.4LFG水解油菜蜂花粉蛋白,比较pHstat法、OPA法和TNBS法测定蜂花粉蛋白水解度的差异。水解118min后,pHstat法、OPA法和TNBS法测得的水解度分别为24.7%﹑13.4%﹑6.6%。由于OPA试剂和甘氨酸﹑半胱氨酸﹑赖氨酸反应生成的化合物在340nm波长处的吸光度较低,致使OPA法测得的水解度低。TNBS试剂和ε-NH2的作用不稳定,也可能是由于TNBS试剂产生的发光物使测定结果降低。在水解度较低的情况下,α-NH2平均解离度的变化可以忽略,pHstat法测得的水解度比较准确。

重组大肠杆菌BL21(DE3)/rbLF-N高密度培养条件优化

研究了6种不同培养基,pH值和诱导条件对表达量的影响。结果表明,培养基为2×TY+M9+微量元素溶液,pH值为7.0,在对数生长中后期(OD600=1.96)用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,rbLF-N的表达量最高,达到25.2%。在此条件下,用Bioengineering 19 L自控式发酵罐,以pH-stat的培养技术,高密度培养重组E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1,生产重组牛乳铁蛋白N末端多肽(recombinant bovine lactoferrin-N polypeptide,rbLF-N)。通过控制pH值、溶解氧以及补料方式,使工程菌E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1的发酵菌体OD600值达到72.6,发酵菌体干重为31.9 g/L,rbLF-N表达量为菌体总蛋白的26.8%。

大豆降压肽酶解制备工艺的优化研究

以大豆分离蛋白(SPI)为原料,分别采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶对SPI进行酶解,测定水解度及ACE抑制率,结果表明碱性蛋白酶酶解液效果较好。采用响应曲面法对碱性蛋白酶酶解工艺参数进行优化,在此基础上采用双酶协同酶解和三酶联合酶解,然后对酶解液进行超滤分离和真空冷冻干燥,采用FA-Phe-Gly-Gly为底物的酶活力检测法对不同大豆降压肽组分进行活性检测。结果表明三酶联合酶解效果最好,水解度(DH)及ACE抑制率高达32.24%和84.44%。

核桃蛋白水解物水解度测定方法比较

为比较测定核桃分离蛋白(WPI)水解物水解度最佳方法,采用Alcalase 2.4L、Protamex水解WPI,对不同时间段核桃蛋白水解液水解度测定方法进行比较。结果表明,采用内切蛋白酶Alcalase 2.4L水解WPI时,pH-Stat法和TNBS法测定结果基本一致,而甲醛滴定法测定结果偏低;而用复合蛋白酶Protamex水解WPI时,pH-Stat法和甲醛滴定法测定结果接近,但且均低于TNBS法,TNBS法测定结果与另外两法差异显著(ρ<0.05)。由于制备核桃多肽主要采用内切蛋白酶,所以可认为pH-Stat法测定WPI水解液水解度较为准确。

沉水植物光合作用测定的电化学方法

光合作用速率测定是植物光合作用研究的重要基础,沉水植物由于所处生境的特殊性,难以应用在陆生植物光合作用研究中发展起来的速率测定方法。在对水体中二氧化碳的基本特征进行详细描述的基础上,介绍了在沉水植物光合作用研究中广泛应用的电化学方法——pH-stat法和pH-drift法的原理,并给出了应用实例。这两种测定水生植物光合作用的电化学方法所依据的溶液无机碳浓度的变化可以利用Gran滴定法方便地计算出来。

深低温体外循环温度管理

目的探讨深低温体外循环(Extracorporeal c ircu lation,ECC)温度管理策略。方法选取15例夹层动脉瘤患者在深低温停循环下行主动脉弓部手术,ECC复温过程中采用平衡变温方法进行温度管理,用pH稳态管理酸碱平衡,合理应用药物。结果动脉血气指标PaCO2及pH值等维持在正常范围内,全组无神经系统等重要脏器并发症,无术后明显体温降低。结论深低温下采用pH稳态血气管理、平衡复温、合理应用药物等综合措施,能取得满意的临床效果。

Alcalase 2.4L FG酶水解赤豆蛋白工艺及其动力学研究

采用pH-stat法探讨了Alcalase 2.4L FG酶水解赤豆蛋白工艺.应用二次回归通用旋转正交设计和SAS软件,就主要工艺参数对水解度的影响进行响应面分析,建立了相应数学模型,并采用脊岭分析,优化了工艺参数;探讨了该酶催化水解赤豆蛋白反应的动力学参数:Km=0.0969 mol.L-1,Vmax=0.00307 mol.min-1.L-1.

恒电位自动滴定法分析脂肪酶水解活性影响因素

利用恒电位自动滴定法分析了脂肪酶(Candida rugosa lipase,CRL)催化橄榄油水解活性的影响因素,确定了适宜的酶活性测定条件,对比了传统表面活性剂和咪唑类离子液体对酶活性的影响。37℃时,与酶蛋白浓度呈线性关系的酶活性测定范围为1～14 mmol/min;酶蛋白浓度范围为0.01～0.07 g/L;水解反应的米氏常数Km=4.828×10-4mol/L,最大反应速率3.498×10-3mol/min;缓冲液pH值7.2、温度37℃,搅拌速度为1200 r/min;PVA、AOT和卵磷脂对酶活的促进和抑制作用与其浓度有关,最大相对酶活力分别为297%,255%和154%;离子液体对酶活的最大促进效果为[OMIM][Br]>[BMIM][Br]>[EMIM][Br]>[OMIM][BF4]>[BMIM][BF4]>[EMIM][BF4];最大相对酶活力分别可达到1734%,1709%,1579%,1063%,1030%和960%;阴离子种类对酶活性的影响大于阳离子种类的影响;离子液体的烷基链长对酶活性的影响与其浓度密切相关,烷基链越长,其达到最大酶活促进效果的浓度越低。本研究为筛选合适的离子液体种类及浓度提供了快速有效的分析方法。

不同水解度的豆饼粉对轮枝链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的影响

谷氨酰胺转胺酶在食品行业应用广泛,其可用轮枝链霉菌发酵生产。豆饼粉是一种廉价的富含蛋白质的工业原料,直接用作氮源不能被轮枝链霉菌利用。本文使用pH-STAT法,将豆饼粉水解成DH为3%、5%、7%、9%和12%等一系列的酶解液,并将其用作轮链霉菌的氮源。研究发现,在培养基中添加质量浓度为20g/L、DH=5%的豆饼粉酶解液可显著提高谷氨酰胺转胺酶的产量,其酶活为4.2U/mL,具有一定的应用价值。

氟离子浓度对二水磷酸氢钙在水溶液中的转化及其产物抗酸能力的影响

降低牙矿物质的溶解度是防止龋齿的重要方法之一 .氟对于羟基磷灰石 ( HAP)溶解度影响的研究已有报道 ,然而氟对于牙矿物质中的其它基本无机成分 ,如二水磷酸氢钙 ( DCPD)等溶解度的影响则研究较少 .本文以 XRD、SEM等为表征手段 ,研究了 37℃下 DCPD在不同浓度的 Na F溶液中水解时的 p H、氟离子浓度变化规律及转化产物 ,并与 HAP在相同条件下的结果进行对比 .以恒 p H的方法对 DCPD、HAP及其转化产物的溶解性质进行比较 .实验结果表明 ,DCPD在 Na F溶液中水解的产物随着氟浓度的提高依次为 :无水磷酸氢钙 ( DCPA)、DCPA+氟基磷灰石 ( FAP)、FAP、FAP+Ca F2 .恒定 p H测定的溶解曲线表明 ,经氟处理后的磷酸钙盐的抗酸能力得到了显著的改善 .

不同血气管理与红细胞压积在深低温停循环中对乳猪脑损伤的影响

目的用近红外分光仪(NIRS)观察不同的血气管理和红细胞压积(HCT)对乳猪深低温停循环(DHCA)中脑损伤的影响。方法将24只乳猪根据DHCA期间所采用不同的血气管理和HCT分为4组。A组术中HCT0.25～0.30,降温期pH稳态管理血气,其余各期采用alpha稳态管理血气;B组术中HCT0.25～0.30,alpha稳态管理血气;C组术中HCT0.20～0.25,降温期pH稳态管理血气;D组术中HCT0.20～0.25,alpha稳态管理血气。用NIRS连续监测脑氧合情况,术后6h脑组织固定于甲醛中,并进行组织学评分判断脑损伤程度。结果NIRS指标中,D组脑氧合血红蛋白(HbO2)和总血红蛋白(HbT)在降温期明显低于A组和B组(P<0.05),A组DHCA期间HbO2最低点持续时间(HbO2-NT)明显短。所有HbO2-NT小于25min的乳猪均无脑组织损伤的病理改变。结论DHCA期间采用pH稳态联合高HCT能减轻术后脑损伤。

婴幼儿法洛四联症体外循环手术降温期不同血气管理的分析

目的探讨婴幼儿法洛四联症(TOF)体外循环(CPB)手术降温期间两种血气管理方法中PH稳态的优越性。方法40例3岁以下TOF患儿,随机分为A、B两组,每组20例,在低温CPB下行TOF纠治术。两组病例在CPB降温期间采取不同的血气管理,A组采取a稳态(a-stat)血气管理,B组采用PH稳态(PH-stat)血气管理。结果体温降至30～28℃时测定动脉血气:A组血标本采取37℃常温(a稳态)血气检测,B组血样本分别进行常温和矫正温度(PH稳态)血气检测。结果显示:A、B组降温期a稳态血气测定值基本接近血气正常值pH7.40(7.35～7.45)、PCO240(35～45)mmHg左右,两组间对应血气数值比较差异无统计学意义(P>0.05);而B组降温期PH稳态血气检验值pH7.58±0.07明显高于A组a稳态血气测定值pH7.37±0.05,PCO2(24.95±3.88)mmHg则明显低于A组PCO2(45.2±4.93)mmHg,对应血气数据t检验差异有统计学意义(P<0.001)。降温期间对B组进行PH稳态血气管理,通过调节气体流量降低膜肺气/血比的方法增加血液CO2含量提高PCO2,使其血气分析指标在PH稳态下达到正常值pH7.40、PCO240mmHg左右。因此,降温期间采取PH稳态血气管理实际上增加了血液中的CO2含量。结论婴幼儿TOF低温体外循环手术降温期采用PH稳态血气管理能增加血液中CO2含量有利于脑保护。