pH值域和亮氨酸丰富重复蛋白质磷酸酶蛋白1与喉鳞癌转移的相关性及作用机制研究

目的观察PHLPP1与喉鳞癌的相互作用,为寻找新的诊治靶点提供数据支撑。方法以80例喉鳞癌患者为研究对象,包括转移组30例和未转移组50例,采用免疫蛋白印记(WB)实验检测PHLPP1蛋白表达水平。并通过RNA干扰实验构建PHLPP1过表达和干扰重组慢病毒载体,分别转染至HEP-2细胞共培养,观察细胞生长、迁移与侵袭能力,采用荧光定量PCR实验和WB实验测定细胞PHLPP1和P-AKT/AKT表达水平。结果转移组PHLPP1蛋白表达水平低于未转移组,未转移组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHLPP1过表达组细胞生长速率、迁移和侵袭数目低于对照组,而PHLPP1沉默组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PHLPP1过表达组P-AKT/AKT mRNA与蛋白表达水平低于对照组,而PHLPP1沉默组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PHLPP1与喉鳞癌的发生与转移密切相关,可抑制喉鳞癌细胞的增殖与侵袭能力,且其作用可能与阻碍AKT磷酸化激活有关。

PHLPP与喉鳞状细胞癌转移的相关性及作用机制研究

目的探讨PH值域和亮氨酸丰富重复蛋白质磷酸酶蛋白(PHLPP)与喉鳞状细胞癌转移的相关性及作用机制。方法采用回顾性研究方法,选取2016年7月至2022年7月在河北工程大学附属医院治疗的89例喉鳞状细胞癌患者病灶标本,同时选取病灶周边正常组织作为对照。采用免疫组织化学法检测PHLPP蛋白表达;同时选取喉鳞状细胞癌HEP-2细胞株,随机分为PHLPP沉默组、PHLPP过表达组和空白对照组,采用MTT法检测各组细胞增殖,采用Transwell小室试验检测各组细胞迁移和侵袭,采用蛋白质印迹法检测各组PHLPP、BAX、PI3K和p-AKT蛋白表达。结果喉鳞状细胞癌组织PHLPP蛋白阳性表达率为38.20%,明显低于正常组织(95.51%),差异有统计学意义(P<0.05)。临床分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、有远端转移的患者PHLPP蛋白阳性表达率分别为20.59%、17.50%、0,均显著低于临床分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移、无远端转移(79.41%、82.50%、100.00%),差异均有统计学意义(P<0.05)。PHLPP沉默组细胞培养24、48、72 h时吸光度值明显高于PHLPP过表达组和空白对照组;PHLPP过表达组细胞培养24、48、72 h时吸光度值明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PHLPP沉默组细胞迁移和侵袭数均明显高于PHLPP过表达组和空白对照组(P<0.05);而PHLPP过表达组细细胞迁移和侵袭数均明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。PHLPP过表达组PHLPP、BAX蛋白表达量均明显高于PHLPP沉默组和空白对照组,而PI3K、p-AKT蛋白表达量均明显低于PHLPP沉默组和空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);PHLPP沉默组PHLPP、BAX蛋白表达量均明显低于空白对照组,而PI3K、p-AKT蛋白表达量均明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论喉鳞状细胞癌组织PHLPP表达下调,与临床分期、淋巴结转移和远处转移有关;调控PHLPP表达对癌细胞增殖、迁移和侵袭有所影响,可能与调控BAX、PI3K和p-AKT蛋白有关。

miR-190-5p靶向抑制PHLPP1的表达促进肺腺癌A549细胞增殖和转移

miR-190-5p是小分子非编码RNA,参与调控肺腺癌细胞的增殖和转移。对miR-190-5p调控肺腺癌细胞的增殖和转移的机制深入研究会帮助了解到肺腺癌的发生机制和探究潜在的药物干预靶点。本文研究了miR-190-5p对肺腺癌A549细胞的增殖和转移的影响,解释了miR-190-5p促进肺腺癌生长的机制;通过感染miR-190-5p的慢病毒表达系统,克隆了稳定过表达miR-190-5p的肺腺癌A549细胞系;通过生物信息学方法和荧光素酶报告实验确认了miR-190-5p的靶基因。结果发现,稳定过度表达的miR-190-5p能促进A549细胞的增殖和转移;确定了miR-190-5p的靶点是PH域富含亮氨酸重复的蛋白磷酸酶1(Leucine-rich repeat-rich protein phosphatase 1 in the PH domain,PHLPP1),miR-190-5p降低PHLPP1蛋白水平;稳定表达的miR-190-5p增加了A549细胞中E盒结合锌指蛋白1(E box-binding zinc finger protein1,TCF8/ZEB1)、锌指转录因子(Zinc finger transcription factor,Snail)、具有凝血酶原基序的解体蛋白和金属蛋白酶1(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1,ADAMTS1)的表达和蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)在Ser473的磷酸化,而过表达PHLPP1削弱了miR-190-5p的功能,降低了miR-190-5p促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力;miR-190-5p通过抑制PHLPP1的表达而增强了A549细胞的增殖和转移。这表明,miR-190-5p可能可以作为肺腺癌治疗的潜在靶点。

溃疡性结肠炎小鼠血清miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达水平及其作用的研究

目的·探究miR-23a-3p和miR-27a-3p在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血清中的表达及其可能的作用机制。方法·将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组小鼠采用含有5%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)的饮用水诱导7 d,诱导期间观察小鼠一般情况、粪便形态以及隐血状况;7 d后,采集小鼠全血和结肠组织,测量结肠长度并称取湿重。qRT-PCR检测血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达,Western blotting检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ,coactivator 1α,PPARGC1A)、PH域富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase,PHLPP2)、B淋巴细胞瘤2蛋白(B-cell lymphoma-2,BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)、细胞色素C(cytochrome c,CYT-C)和胱天蛋白酶3剪切体(cleaved cysteine-containing aspartate-specific proteases,cleaved-caspase-3)蛋白表达。结果·DSS诱导后,模型组小鼠出现精神萎靡、体质量减轻、腹泻、肉眼血便等症状,结肠长度缩短、湿重减轻(均P<0.05),小鼠UC模型构建成功。与对照组比较,模型组小鼠血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p表达明显下调(均P<0.05),结肠组织中PPARGC1A、PHLPP2、BAX、CYT-C和cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(均P<0.05),而BCL-2表达显著降低(P<0.05)。结论·miR-23a-3p和miR-27a-3p在UC小鼠血清中呈低表达水平,可能通过介导结肠组织中PPARGC1A和PHLPP2表达上调,触发线粒体途径诱导细胞凋亡,从而参与了UC的发生/发展。

miR-452靶向PHLPP1抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨微小核糖核酸(micro RNA,miR)-452靶向PH结构域富含亮氨酸重复序列的蛋白磷酸酶1(PHLPP1)抑制结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭的作用。方法选取142例结直肠癌组织及癌旁组织。体外培养结直肠癌细胞株SW480细胞(SW480癌细胞组),并以miR-452模拟物(miR-452模拟物组)、miR-452抑制剂(miR-452抑制剂组)转染SW480细胞。噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞活力、癌细胞单克隆形成数目。流式细胞术检测凋亡率及细胞周期,Transwell细胞迁移实验检测穿膜细胞数,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-452-5、PHLPP1 mRNA表达水平,酶联免疫吸附法测定培养液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、血管内皮生长因子(VEGF)在培养液中水平。结果结直肠癌组miR-452-5p相对表达水平(1.25±0.65)低于癌旁组(3.76±0.43,t=17.04,P<0.01)。依miR-452模拟物组→SW480癌细胞组→miR-452 inhibitor组之序,癌细胞单克隆形成数目、穿膜数(P<0.01)升高,细胞凋亡率、G1期比例降低(P<0.01);miR-452-5p、PHLPP1 mRNA表达水平降低(P<0.01),MMP-9、Cyclin D1、VEGF蛋白表达水平升高(P<0.01)。miR-452与PHLPP1表达水平呈明显正相关(P<0.01),与MMP-9、Cyclin D1、VEGF表达水平分别呈负相关(P<0.01)。结论 miR-452通过靶向降低PHLPP1的表达而抑制结直肠癌细胞增殖、迁移浸润,其机制与miR-452诱导结直肠癌细胞低表达MMP-9、Cyclin D1、VEGF有关。

微小RNA-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制

目的探讨微小RNA(miR)-224对乳腺癌锁骨上淋巴结转移的影响及其作用机制。方法选择2018年6月至2019年6月南阳市中心医院收治的45例锁骨上淋巴结转移的乳腺癌和45例无淋巴结转移的乳腺癌作为研究对象。采用转录组织化学方法分析淋巴结转移和无淋巴结转移癌组织中差异表达的miRNA。采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析差异表达的miRNA(miR-224);采用慢病毒介导miRNA阴性对照和miR-224过表达在人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)乳腺癌细胞建立对照细胞系(对照组)和miR-224过表达细胞系(miR-224组)。将对照组和miR-224组细胞接种至裸鼠腋下,并于30 d后处死,解剖分析锁骨上淋巴结转移;生物信息学和双荧光素酶报告基因分析miR-224靶基因,蛋白质印迹法(Western blot)分析临床样本和细胞系miRNA靶蛋白(PHLPP)1表达水平,组间比较采用t检验。结果转录组化学结果显示,淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(5.08±0.69)明显高于未淋巴结转移乳腺癌组织(2.10±0.69),差异有统计学意义(t=3.109,P<0.05)。荧光定量PCR结果验证显示,淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(2.98±0.41)高于无淋巴结转移乳腺癌组织miR-224表达水平(1.20±0.31),差异有统计学意义(t=2.839,P<0.05)。miR-224组细胞侵袭数量[(119.49±9.72)个]高于对照组细胞侵袭数量[(69.39±6.09)个],差异有统计学意义(t=4.091,P<0.05)。miR-224组细胞接种移植瘤30 d后淋巴结转移病灶数[(25.98±3.12)个]高于对照组细胞接种移植瘤30 d后淋巴结转移病灶数[(10.54±2.39)个],差异有统计学意义(t=3.001,P<0.05)。PHLPP1是miR-224靶基因。淋巴结转移乳腺癌组织中PHLPP1蛋白表达水平(0.36±0.12)低于未淋巴结转移乳腺癌组织中PHLPP1蛋白表达水平(0.94±0.16),差异有统计学意义(t=2.816,P<0.05)。miR-224组细胞PHLPP1蛋白表达水平(0.50±0.12)低于对照组细胞PHLPP1蛋白表达水平(1.04±0.18),差异有统计学意义(t=2.212,P<0.05)。结论miR-224在淋巴结转移的乳腺癌中呈高表达,其可能机制为通过调节PHLPP1蛋白表达参与了乳腺癌的侵袭和转移。