pH敏感型聚合物胶束对I型志贺毒素A亚基的递送及细胞毒性

探究了pH敏感型聚合物胶束递送和释放I型志贺毒素A亚基至肿瘤细胞Hela的效率和功能。首先将在大肠杆菌中分别重组表达I型志贺毒素A亚基Stx1A和减毒突变A亚基Mu-Stx1A,然后将对pH敏感的聚合物胶束PEG_(8)-PDPA_(100)-PEG_(8)(其中PEG为聚乙二醇,PDPA为聚异丙基甲基烯酸酯)分别运载至宫颈癌细胞Hela中。体外活性实验证明重组蛋白Stx1A具有明显的抑制蛋白合成作用,而减毒变异型Mu-Stx1A不具备这种作用。用聚合物胶束将Stx1A及Mu-Stx1A转运至Hela细胞中,发现随着蛋白浓度的增加细胞转染效率增大。包载了Stx1A的胶束进入细胞后,释放活性Stx1A导致细胞病变和凋亡,该现象随着Stx1A浓度的增加表现更显著。实验证明聚合物胶束可以成功包载、运输和稳定释放具有活性的Stx1A分子至肿瘤细胞内,发挥毒性功能诱导细胞程序性死亡。该聚合物胶束可以在蛋白类药物运输中发挥有效作用,为后续I型志贺毒素A亚基在肿瘤治疗中的应用性研究提供重要的理论基础。

pH敏感型聚合物载体类型及其研究进展

环境敏感型药物释放系统在高性能药物输送系统中应用有极大的优势。它们能减少不良反应并增加药物的期望效果。pH敏感型释药系统主要依赖于体内自身各个器官环境存在的酸碱差异调节药物的释放,使药物在特定时间、部位释放。本文以近年来国内外研究pH敏感型聚合物的相关文献,对pH敏感型聚合物载体材料的最新研究进展和应用进行综述。

接枝不同金属配基的pH敏感型聚合物的制备及对木瓜蛋白酶的纯化

本文以四种丙烯酸类单体合成了一种pH敏感型聚合物(PMDMN)。该聚合物连接金属螯合剂(IDA)后与Cu^(2+)或Fe^(3+)通过配位键形成聚合物PMDMN-Cu或PMDMN-Fe。首先对聚合物的红外光谱、等电点及回收率进行了测定。其次,探讨了PMDMN-Cu、PMDMN-Fe对木瓜蛋白酶粗酶的吸附条件,包括pH、时间及NaCl浓度。通过对洗脱液的酶活回收率的测定,考察了咪唑、盐酸胍、EDTA及其浓度配比的洗脱效果。最后通过SDS-GAGE对最优洗脱条件的酶液纯度进行了验证。结果显示:接枝金属配基前后的等电点分别为5.15或5.08,回收率皆大于95%(5个吸附-洗脱循环后);PMDMN-Cu、PMDMN-Fe最适吸附pH值均为7.0,并于120 min和210 min达到吸附平衡,最大吸附量分别为5.09 mg、4.58 mg,NaCl浓度的增加能一定程度增加木瓜蛋白酶的吸附量。在洗脱方案中,0.5 mol/L咪唑+1.0 mol/L盐酸胍具有最好的洗脱效果,洗脱率皆接近95%,同时不会造成金属配基的泄露。SDS-PAGE显示PMDMN-Cu和PMDMN-Fe都能大幅度提高木瓜蛋白酶的纯度,纯化倍数分别为4.29和4.48。