以荧光高分子为相分离载体和指示物的免疫分析新方法

以6-甲氧基-β-(5-乙烯基-2-奎宁环基)-4-喹啉甲醇(奎尼丁,Qd)为单体合成了一种pH敏感荧光高分子聚N-异丙基丙烯酰胺(NIP)-奎尼丁-N,N,-二甲基氨丙基甲基丙烯酰胺(DMAPM)[P(NIP-DMAPM-Qd)]。采用共聚法将布氏杆菌抗原(BrAg)与P(NIP-DMAPM-Qd)连接,制备了P(NIP-DMAPM-Qd)-BrAg连接物。加入待测布氏杆菌抗体(BrAb),免疫反应后,调节至pH7.6,使高分子相变,从而将体系中的免疫反应复合物P(NIP-DMAPM-Qd-BrAg)-BrAb和未反应连接物P(NIP-DMAPM-Qd)-BrAg与非特异性组分以及未反应的待测BrAb分离.利用蛋白A对抗体的亲和性,捕获P(NIP-DMAPM-Qd-BrAg)-BrAb,从而将其与P(NIP-DMAPM-Qd-BrAg)分开,通过测定P(NIP-DMAPM-Qd-BrAg)-BrAb的荧光来定量BrAb。该方法通过高分子相变分离和蛋白A捕获双重分离作用,基本消除了非特异性组分以及未反应的特异性免疫成分等的干扰;以高分子自身荧光为检测信号源,无须另外的标记物,大大提高了免疫分析的灵敏度和简便性。以布氏杆菌抗体(BrAb)为检测对象,测得线性范围为0～168ng/L,抗体检出限为1.2ng/L,结果令人满意。

以萘酰亚胺衍生物基荧光高分子为载体和指示剂的相分离免疫分析方法

以4-甲氧基-N-(2-N',N'-二甲基氨基乙基-N'-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵(DMNAA)为荧光单体,合成了一种pH敏感荧光高分子聚N-异丙基丙烯酰胺-4-甲氧基-N-(2-N',N'-二甲基氨基乙基-N'-烯丙基)萘二甲酰亚胺氯化铵-N,N-二甲基氨丙基甲基丙烯酰胺[P(NIP-DMAPM-DMNAA)].采用共聚法将日本血吸虫抗原(SjAg)固定在P(NIP-DMAPM-DMNAA)上,制备P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg连接物,与日本血吸虫抗体(待测,SjAb)发生免疫反应后,调节pH值,使荧光高分子相变分离高分子-免疫组分连接物,最后,利用蛋白A对抗体的亲和性捕获P(NIP-DMAPM-DMNAA)-SjAg-SjAb,通过测定高分子自身的荧光信号来定量SjAb.该新型高分子具有良好的荧光特性,对pH响应快速,37℃下相转变pH值为7.2,分离免疫复合物时造成的损害低.与传统相分离免疫分析比较,新方法通过高分子相变分离和蛋白A捕获双重分离作用,消除了非特异性组分和未反应的特异性免疫成分等的干扰;利用高分子自身的荧光信号检测,无须另外的标记物,大大提高了免疫分析的简便性.以日本血吸虫抗体为分析对象,测得线性范围为1～1500ng/mL,抗体检出限为1.3ng/mL,相对标准偏差为3.6%(n=10),结果令人满意.