基于理性设计提高1,3-丙二醇氧化还原酶的稳定性和活性

1,3-丙二醇氧化还原酶(1,3-propanediol oxidoreductase,PDOR)是甘油生物合成1,3-丙二醇(1,3-propanediol,1,3-PD)的关键限速酶之一。使用PoPMuSiC 2.1计算肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)来源PDOR(KpPDOR)突变的折叠自由能,结合HotSpot Wizard 3.0对催化中心附近氨基酸的功能热点分析和保守残基鉴定,理性选取突变位点,构建定点突变。经诱导表达、蛋白纯化和酶学性质研究,获得催化性能、热稳定性和pH耐受性提高的突变体。V155N突变体在37℃,pH 7.5下的还原活性为KpPDOR的1.7倍,pH 4.0时是KpPDOR的2.5倍。N262E突变体37℃下半衰期为KpPDOR的1.4倍。分析蛋白结构,发现Val155突变为Asn导致新形成两个氢键,稳定了Val155所在的β-折叠结构。而Asn262突变为Glu形所成的两个氢键,可增强催化中心刚性,提升酶稳定性。静息细胞转化甘油合成1,3-PD,发现突变体V155N工程菌株1,3-PD产能为1.16 mmol/L/OD_(600),高于野生型KpPDOR工程菌株的0.82 mmol/L/OD_(600)。此理性设计方法对改良其他工业酶的性能有一定参考价值。

种植者2号(Planters Ⅱ)肥料成分及特性分析

简述了微肥的应用现状,重点介绍了美国土壤公司开发的微量元素肥料种植者2号的营养成分、肥料特性及施用效果。种植者2号肥料以天然矿物为原料,含有铁、锌、钼、铜、锰、硼、钴、氯等作物生长发育所需的各种微量元素,具有酸碱耐受性、生物活性,所含矿物营养可直接被植物吸收利用。种植者2号不仅适用于传统农场、牧场及普通作物、转基因作物,也可用于有机认证农场与有机农作物的生产,对粮食作物、豆类作物、水果、林木、牧草、畜禽等均可实现较好的增产效果。实践证明,种植者2号具有良好的经济效益和环境效益。

蓝隐藻藻蓝蛋白亚基的分离及特性研究

以纯化的蓝隐藻(Chroomonas plaoidea)藻蓝蛋白PC645为材料,经尿素变性、分子筛层析以及SDS-PAGE与IEF电泳技术分离、纯化其2类不同亚基,并测定了亚基的吸收光谱、荧光谱、等电点以及pH耐受性等.结果表明,隐藻PC645异二聚体的亚基结构稳定,8 mol/L尿素处理48 h方可令A 645=10的PC645样品变性完全.SDS-PAGE与IEF电泳结果表明,经Sephacryl S-100层析得到的α与β亚基组分达到了完全分离的效果,并证实PC645存在分子质量和等电点均不相同的2种β亚基.光谱分析显示,分离后的α和β亚基依然保持光谱活性,其中β亚基是PC645的660 nm特征荧光发射位点,并且在pH值为4.92的磷酸缓冲液中可保持45 d内光谱形态稳定;而α亚基所含的MBV色基不产生荧光,亚基的pH耐受性以pH值为7左右为最佳.实验结果将为研究藻蓝蛋白的亚基结构、能量传递途径等提供相应理论依据,并为进一步的亚基序列分析奠定了基础.

相思根瘤菌的抗逆性初步研究

对 2 1株相思根瘤菌和 2株大豆根瘤菌菌株进行 Na Cl、(NH4 ) 2 SO4 、p H值、高温和低温的耐受性实验 ,其中耐 (NH4 ) 2 SO4 的实验分别进行了相思根瘤菌在含 (NH4 ) 2 SO4 的平板上的耐受性和在浓度为 10 0 mol/ L、30 0 m ol/L、5 0 0 mol/ L、6 0 0 m ol/ L 的 (NH4 ) 2 SO4 中的结瘤试验。参试菌株均经过回接实验培养和镜检 ,培养基均为 YMA。结果表明 ,相思根瘤菌均能耐受的盐浓度为 0 .5 %～ 2 .0 % ,能在 37℃和 p H值为 6～ 9的条件下生长。在抗生素抗性方面 ,相思根瘤菌普遍抗氨卞青霉素 ,而对卡那霉素和链霉素敏感。相思根瘤菌的耐盐。

杂交相思根瘤菌的抗逆特性

对20个分离自广西不同地方的杂交相思根瘤菌菌株进行温度、pH值、NaCl及抗生素的抗逆性研究。结果表明，65％的菌株能在39℃时生长良好；100％的菌株能在pH值5．0—9．0的条件下生长良好；所有菌株在2．0％浓度NaCl下均不能生长，有5个菌株在1．5％浓度下能生长。菌株对不同抗生素表现出不同的抗性，有16个菌株对Tc有抗性，仅有2个菌株对Km有抗性。不同的菌株对抗生素表现出不同的抗性，Z’2-7抗性最强，而L1-6、12—7、L3—2、S＇3--6抗性最差。

三种形态的壳聚糖固定化脲酶的研究

以戊二醛为交联剂制备了 3种固定化载体 ,即粉末状 (Ⅰ ) ,凝胶状 (Ⅱ ) ,海棉状 (Ⅲ ) ,并测定了固定化酶的特性 .结果显示 :固定化脲酶Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ的最适 pH都是 6,而游离酶的最适pH为 7;固定化脲酶Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ的最适温度分别为 5 5 ,5 5 ,45℃ ,游离酶为 5 0℃ ;固定化酶Ⅰ ,Ⅱ ,Ⅲ的表观米氏常数Km 分别为 2 .78,14.5 ,3 4.5mmol/L ,游离酶的Km 为 5 5 .5mmol/L .以上结果并结合固定化酶 pH耐受性及贮存稳定性可知 ,凝胶状 (Ⅱ )

产酶益生芽孢杆菌的筛选

从畜禽动物胃肠道分离具有产酶能力及抑菌活性的芽孢杆菌,对其进行耐酸、耐胆盐、产酶能力及抑菌试验,并结合其形态特征进行生理生化试验鉴定。结果表明,J2、J3和J14具有较强的产淀粉酶和蛋白酶的特性,N7和N10产纤维素酶能力较强,5株芽孢杆菌均有较强的抑菌活性并且能抵抗高浓度胃酸、胆盐的不良环境,具有较高的存活数。初步鉴定J3为地衣芽孢杆菌,J14、J2为蜡样芽孢杆菌,N7、N10枯草芽抱杆菌。

一种木屑固定化粪产碱杆菌处理苯酚废水的方法

该发明公开了一种木屑固定化粪产碱杆菌处理苯酚废水的方法。该发明具有如下优势：（1）用于固定化的粪产碱杆菌易于培养，固定化工艺简单；固定化粪产碱杆菌催化降解效果好，耐高浓度含苯酚废水，降酚能力强，可耐受苯酚质量浓度高达3000mg／L的苯酚废水，可重复使用；（2）粪产碱杆菌的固定化载体为木屑，利用化学方法对木屑改性，提高了微生物处理苯酚废水的效率，具有广阔的发展前景；（3）木屑为载体制备的固定化粪产碱杆菌弹性好，对温度、pH耐受性强，降解性能稳定，半衰期长；

萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白酶抑制剂的分离纯化与性质研究

本研究从萨尔瓦多型银合欢(Leucaena leucocephala cv.Salvador)种子中分离纯化出一种新的胰蛋白酶抑制剂,即萨尔瓦多型银合欢种子胰蛋白抑制剂(Trypsin Inhibitor from Leucaena leucocephala cv.Salvador seeds,LlsTI).成熟的种子经粉碎,生理盐水浸提之后,经CM-Sepharose阳离子交换层析得到LlsTI纯品.该胰蛋白抑制剂为19.8kDa的单体蛋白.其N末端测序结果为KGSYLRDVRG,而其内部则含有一段KTAPLVVGFLK的序列,与已知的蛋白酶抑制剂序列都不同,表明LlsTI为一种新的胰蛋白酶抑制剂,同时也含有一部分与已知Kunitz型抑制剂相保守的碱基.LlsTI对胰蛋白酶的摩尔抑制比近似为1∶1.其对于胰蛋白酶属竞争性抑制剂,其Ki值为2.77×10-10 M.LlsTI对胰蛋白酶的抑制活力表现出对高温和pH变化较高的耐受性.但其活性受100mM DTT影响.本研究对LlsTI对其它丝氨酸类蛋白酶的抑制作用也做了测定,其中只有胰蛋白酶的活性受到了抑制.根据圆二色谱的分析结果,LlsTI是一种αβ蛋白,其二级结构在室温下的水和缓冲液Tris-HCl(pH7.5)中组成相似.