重组海藻糖合成酶工程菌的pH-stat高密度发酵工艺研究

重组海藻糖合成酶工程菌的分批补料发酵中,用氨水调节培养液的pH为6.78～6.80,初糖耗尽后按培养液的pH从6.80起每升高0.01即开始补充葡萄糖至0.7g·L-1。据此补料策略可将发酵过程的乙酸积累控制在6.26g·L-1以下;补料发酵12h后,即获得细胞干重为51.5g·L-1的细胞高密度,细胞密度是分批培养的7.5倍;诱导后重组海藻糖合成酶表达率为15.2%,单位体积内的表达量是分批培养的4.5倍。

pH-stat控制流加培养红发夫酵母产虾青素

通过酸碱流加培养、混合碳源-氨水流加培养、混合碳源-尿素流加培养等pH-stat控制流加培养红发夫酵母产虾青素。pH-stat控制流加培养与分批培养相比较,生物量及虾青素产量都有不同程度地提高。从提高虾青素产量和降低生产成本综合考虑,混合碳源-氨水流加培养是最理想的方法,培养96 h虾青素产量最高达到19.94 mg/L。

pH-stat法在测定酶促反应米氏常数中的应用

在pH值为7.2,温度为40℃的条件下,As1.398中性蛋白酶水解大豆分离蛋白,采用pH-stat法结合Ex-cel软件方便准确地求出酶促反应的初始速度,从而根据Lineweaver-Burk双倒数方程计算出该酶的最大反应速度(Vmax)和米氏常数(Km).实验条件下,As1.398蛋白酶的Km值为1.46 mg/mL.

核桃蛋白水解物水解度测定方法比较

为比较测定核桃分离蛋白(WPI)水解物水解度最佳方法,采用Alcalase 2.4L、Protamex水解WPI,对不同时间段核桃蛋白水解液水解度测定方法进行比较。结果表明,采用内切蛋白酶Alcalase 2.4L水解WPI时,pH-Stat法和TNBS法测定结果基本一致,而甲醛滴定法测定结果偏低;而用复合蛋白酶Protamex水解WPI时,pH-Stat法和甲醛滴定法测定结果接近,但且均低于TNBS法,TNBS法测定结果与另外两法差异显著(ρ<0.05)。由于制备核桃多肽主要采用内切蛋白酶,所以可认为pH-Stat法测定WPI水解液水解度较为准确。

不同水解度的豆饼粉对轮枝链霉菌发酵生产谷氨酰胺转胺酶的影响

谷氨酰胺转胺酶在食品行业应用广泛,其可用轮枝链霉菌发酵生产。豆饼粉是一种廉价的富含蛋白质的工业原料,直接用作氮源不能被轮枝链霉菌利用。本文使用pH-STAT法,将豆饼粉水解成DH为3%、5%、7%、9%和12%等一系列的酶解液,并将其用作轮链霉菌的氮源。研究发现,在培养基中添加质量浓度为20g/L、DH=5%的豆饼粉酶解液可显著提高谷氨酰胺转胺酶的产量,其酶活为4.2U/mL,具有一定的应用价值。

酪蛋白水解物对轮枝链霉菌SK-1产谷氨酰胺转胺酶的影响

酪蛋白经胰酶水解后 ,可以被轮枝链霉菌SK - 1所利用 .采用pH -STAT法得到了DH=3、DH =6、DH =9、DH =1 2等 4个水解度的酪蛋白水解物 .当酪蛋白水解物作氮源时 ,其水解度 (即肽相对分子质量的大小 )对轮枝链霉菌SK - 1产谷氨酰胺转胺酶酶影响很大 ,其中以DH =3的酪蛋白水解物效果最好 ,而且肽的浓度对轮枝链霉菌SK - 1产谷胺酰胺转胺酶也有一定的影响 ,其中以

碱性蛋白酶对螺旋藻活性蛋白的酶解研究

螺旋藻中的藻蓝蛋白作为一种具有生物活性功能的天然藻蓝素蛋白,其理论研究和应用近年来得到广泛的重视。通过测定螺旋藻破碎后上清液中蛋白质含量及其活性藻蓝蛋白含量,建立了一种提取螺旋藻蛋白质较适的方法和条件,最高提取率达到94.6%,活性藻蓝蛋白的得率为9.87%。利用正交实验,对提取的胞内蛋白质采用pH—stat方法进行碱性蛋白酶的水解,确定了其最佳酶促水解条件,即pH值为7.0,酶底物比为2.2%,反应时间为160min,反应温度为50℃,此时水解度与htot之比为120.20%,N溶解指数为27.73%。该研究对螺旋藻蛋白中生物活性物质的开发奠定了基础。

鸡肝酯酶快速检测氰戊菊酯农药的试验研究

采用鸡肝酯酶对不同浓度的氰戊菊酯农药进行了催化水解,并通过pH-stat法优化了水解条件。结果表明,在pH8.0,温度55℃的条件下,酶催化反应速度较大。在该反应条件下,分析了农药浓度(1/x)与酶解反应初速度(1/y)之间的关系,发现在0.05～2.00mg·L-1农药浓度范围内,两者的关系曲线为y=0.0723x+0.1393(R2=0.998),可作为该速测法计算氰戊菊酯农药含量的标准曲线。最后采用该法对购置的农药标品稀释液进行了确认检测,测量结果经t-检验显示,与气相色谱标定的浓度之间无显著性差异。该法简单快速,一次检测完成大约需要10min,和国标的气相色谱法相比,大大缩短了检测时间。

蛋白质水解度的简易测定方法

介绍了一种比较简单可行的蛋白质水解度的测定方法 ,该方法基于国外通用的 p H STAT法 ,不需要特别的仪器 ,化学试剂耗量少 ,测定结果可靠 。

酶催化水解法快速测定牛奶中蛋白质含量

以酪蛋白水解度为指标,采用pH-stat法优化了胰蛋白酶催化酪蛋白水解的反应条件,并以该酶为检测用酶,分析了酪蛋白浓度与酶解反应初速度的关系,并建立了一种快速检测牛奶中蛋白质含量的方法。在pH=7.5,温度55℃的条件下,用pH-stat法测得酪蛋白浓度与酶促蛋白质水解反应初速度呈良好线性关系。最后采用该酶催化水解法测定了市售鲜牛奶的蛋白质含量,并与双缩脲法的测定结果进行了比较。t-检验分析表明,两种方法所得结果无显著性差异。该法包括样品前处理在内,总耗时8min,仅为双缩脲法的1/20。

油菜蜂花粉蛋白水解度测定方法比较

采用Alcalase2.4LFG水解油菜蜂花粉蛋白,比较pHstat法、OPA法和TNBS法测定蜂花粉蛋白水解度的差异。水解118min后,pHstat法、OPA法和TNBS法测得的水解度分别为24.7%﹑13.4%﹑6.6%。由于OPA试剂和甘氨酸﹑半胱氨酸﹑赖氨酸反应生成的化合物在340nm波长处的吸光度较低,致使OPA法测得的水解度低。TNBS试剂和ε-NH2的作用不稳定,也可能是由于TNBS试剂产生的发光物使测定结果降低。在水解度较低的情况下,α-NH2平均解离度的变化可以忽略,pHstat法测得的水解度比较准确。

消化条件对大豆油O/W乳状液脂肪消化的影响

以游离脂肪酸释放量为指标,通过pH-stat方法考察脂肪酶、胆盐、CaCl2浓度对大豆油O/W乳状液在静态胃消化和动态胃消化模型中脂肪消化的影响。结果表明,乳状液消化过程符合一级动力学方程y-y0=ae-kt。脂肪酶活性升高可增大脂肪酸释放速率,增加脂肪酸释放量。在一定浓度范围内,胆盐和CaCl2浓度增加可提高脂肪酸释放速率,增大游离脂肪酸释放量。在相同消化条件下,乳状液中的脂肪在动态消化模型中的消化程度高于静态消化模型。

重组大肠杆菌BL21(DE3)/rbLF-N高密度培养条件优化

研究了6种不同培养基,pH值和诱导条件对表达量的影响。结果表明,培养基为2×TY+M9+微量元素溶液,pH值为7.0,在对数生长中后期(OD600=1.96)用浓度为0.1 mmol/L的IPTG诱导4 h,rbLF-N的表达量最高,达到25.2%。在此条件下,用Bioengineering 19 L自控式发酵罐,以pH-stat的培养技术,高密度培养重组E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1,生产重组牛乳铁蛋白N末端多肽(recombinant bovine lactoferrin-N polypeptide,rbLF-N)。通过控制pH值、溶解氧以及补料方式,使工程菌E.coli BL21(DE3)/pGEX-4T1的发酵菌体OD600值达到72.6,发酵菌体干重为31.9 g/L,rbLF-N表达量为菌体总蛋白的26.8%。

深低温体外循环温度管理

目的探讨深低温体外循环(Extracorporeal c ircu lation,ECC)温度管理策略。方法选取15例夹层动脉瘤患者在深低温停循环下行主动脉弓部手术,ECC复温过程中采用平衡变温方法进行温度管理,用pH稳态管理酸碱平衡,合理应用药物。结果动脉血气指标PaCO2及pH值等维持在正常范围内,全组无神经系统等重要脏器并发症,无术后明显体温降低。结论深低温下采用pH稳态血气管理、平衡复温、合理应用药物等综合措施,能取得满意的临床效果。

大豆降压肽酶解制备工艺的优化研究

以大豆分离蛋白(SPI)为原料,分别采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶对SPI进行酶解,测定水解度及ACE抑制率,结果表明碱性蛋白酶酶解液效果较好。采用响应曲面法对碱性蛋白酶酶解工艺参数进行优化,在此基础上采用双酶协同酶解和三酶联合酶解,然后对酶解液进行超滤分离和真空冷冻干燥,采用FA-Phe-Gly-Gly为底物的酶活力检测法对不同大豆降压肽组分进行活性检测。结果表明三酶联合酶解效果最好,水解度(DH)及ACE抑制率高达32.24%和84.44%。

Alcalase 2.4L FG酶水解赤豆蛋白工艺及其动力学研究

采用pH-stat法探讨了Alcalase 2.4L FG酶水解赤豆蛋白工艺.应用二次回归通用旋转正交设计和SAS软件,就主要工艺参数对水解度的影响进行响应面分析,建立了相应数学模型,并采用脊岭分析,优化了工艺参数;探讨了该酶催化水解赤豆蛋白反应的动力学参数:Km=0.0969 mol.L-1,Vmax=0.00307 mol.min-1.L-1.

沉水植物光合作用测定的电化学方法

光合作用速率测定是植物光合作用研究的重要基础,沉水植物由于所处生境的特殊性,难以应用在陆生植物光合作用研究中发展起来的速率测定方法。在对水体中二氧化碳的基本特征进行详细描述的基础上,介绍了在沉水植物光合作用研究中广泛应用的电化学方法——pH-stat法和pH-drift法的原理,并给出了应用实例。这两种测定水生植物光合作用的电化学方法所依据的溶液无机碳浓度的变化可以利用Gran滴定法方便地计算出来。

恒电位自动滴定法分析脂肪酶水解活性影响因素

利用恒电位自动滴定法分析了脂肪酶(Candida rugosa lipase,CRL)催化橄榄油水解活性的影响因素,确定了适宜的酶活性测定条件,对比了传统表面活性剂和咪唑类离子液体对酶活性的影响。37℃时,与酶蛋白浓度呈线性关系的酶活性测定范围为1～14 mmol/min;酶蛋白浓度范围为0.01～0.07 g/L;水解反应的米氏常数Km=4.828×10-4mol/L,最大反应速率3.498×10-3mol/min;缓冲液pH值7.2、温度37℃,搅拌速度为1200 r/min;PVA、AOT和卵磷脂对酶活的促进和抑制作用与其浓度有关,最大相对酶活力分别为297%,255%和154%;离子液体对酶活的最大促进效果为[OMIM][Br]>[BMIM][Br]>[EMIM][Br]>[OMIM][BF4]>[BMIM][BF4]>[EMIM][BF4];最大相对酶活力分别可达到1734%,1709%,1579%,1063%,1030%和960%;阴离子种类对酶活性的影响大于阳离子种类的影响;离子液体的烷基链长对酶活性的影响与其浓度密切相关,烷基链越长,其达到最大酶活促进效果的浓度越低。本研究为筛选合适的离子液体种类及浓度提供了快速有效的分析方法。

改良pH稳态血气管理+单/双侧选择性脑灌注在全主动脉弓替换术中的应用

目的观察深低温时动脉二氧化碳分压(PaCO2)与颈静脉球氧分压(PjvO2)的相关性,评价DebakeyI型主动脉夹层行全主动脉弓替换术中采用改良pH+α稳态血气管理体外循环方法的临床预后。方法16例全主动脉弓替换术病人随机分为单侧或双侧顺行选择性脑灌注组,每组各8例。术中采用改良pH+α稳态血气管理,经氧合器及颈静脉球取血进行血气分析。所有病人均行术前术后认知功能测验等神经精神检查。结果深低温时,PaCO2与PjvO2呈正相关;两组各有1例出现短暂性神经功能异常,两组间认知功能变化无显著性差异。结论1.深低温时,PaCO2与PjvO2呈正相关;2.DebakeyI型主动脉夹层全弓替换术中目前采用的改良pH+α稳态体外循环方法切实可行,临床预后满意。

恒pH补料分批培养技术培养谷胱甘肽合成酶系

采用一种新的补料分批培养技术 ,培养重组大肠杆菌生产谷胱甘肽合成酶系 .在分批培养和补料分批培养期间 ,采用不同的pH控制模式 :在发酵前期采用分批培养 ,加入碱以补偿pH值的降低 ;而在发酵后期 ,采用一种新的恒 pH补料分批培养方式 ,加入葡萄糖和碱调节发酵液的 pH .在这种模式中 ,根据培养过程中的pH变化确定pH参数 .实验结果表明 :同时设置发酵液的 pH上限和下限可避免恒 pH补料分批培养过程中葡萄糖的周期性缺乏问题 ;对于缓冲能力不同的发酵液 ,应设置不同的pH参数来进行