HCV 5'NCR片段调控荧光素酶表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的表达

目的构建ＨＣＶ５ＮＣＲ片段调控荧光素酶表达质粒，并在ＨｅｐＧ２细胞中表达。方法通过ＰＣＲ扩增，获得中国人ＨＣＶ基因组５非编码区（ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，ＮＣＲ）完整序列与Ｃ区部分序列的目的基因片段（５ＮＣＲ－Ｃ片段）。将此片段插入ｐＧＬ３荧光素酶报告载体的荧光素酶基因起始密码上游，构建受５ＮＣＲ片段调控的荧光素酶表达质粒。应用脂质体介导基因转染技术将８个质粒转染ＨｅｐＧ２肝癌细胞。结果经鉴定获得８个均为正向插入的阳性克隆。序列分析结果表明插入片段与中国人ＨＣＶ（Ⅱ型）序列基本一致，其荧光素酶基因起始密码子已去除且未改变编码框。有一个质粒能够表达荧光素酶活性，其绝对值达１１４１．９±１５１．１ｍＶ，是ｐＧＬ３报告载体荧光素酶活性的２０％。结论当质粒１μｇ、Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ６μｌ。