HCV特异性反义RNA表达载体的构建及活性评价

反义RNA是反义技术的一个重要领域 ,为探索丙型肝炎病毒治疗新途径及验证转基因细胞模型HepG2 .970 6的有效性 ,设计了一条互补于HCV 5′NCR及翻译起始区 (397 13核苷酸 )的反义RNA序列 ,将其插入pGL3载体SV40启动子下游 ,构建了HCV特异性的反义RNA真核表达载体 (pHCV asR)。通过PCR扩增、酶切反应及序列分析进行了初步鉴定 ,并将其转染HepG2细胞 ,通过RT PCR方法检测其在细胞中的表达并将 pHCV asR转染转基因细胞模型HepG2 .970 6 ,评价其对HCV 5′NCR的抑制活性。结果表明 ,构建的反义RNA表达载体插入序列正确 ,并能在HepG2细胞中表达 ;pHCV asR在HepG2 .970 6中对HCV 5′NCR调控荧光素酶基因表达具有特异性的剂量依赖性抑制活性 ,最高抑制率可达 5 7%。