HbCoi1基因启动子酵母单杂pHIS载体的构建及互作蛋白筛选

茉莉酸是调节天然橡胶树产胶的主要激素,HbCoi1是茉莉酸信号的受体,研究HbCoi1基因的表达调控对了解橡胶树的产胶机理具有重要的意义。首先PCR扩增HbCoi1基因的启动子,然后将目标序列插入pHis2.1载体,构建酵母单杂诱饵载体。将该载体转入酵母Y187菌株感受态中,在缺失培养基上检测自转录激活,发现HbCoi1基因的启动子在3-AT浓度为10 mmol·L-1时自转录激活得到有效抑制。在此基础上,通过与橡胶cDNA文库进行酵母单杂筛选,得到了几个可能与Hbcoi1启动子发生互作的基因,其中包括DNA结合蛋白、核糖体蛋白和功能未知基因,旨在为深入研究Hbcoi1基因表达调控打下基础。

一个顺式作用元件的载体构建及与一个MYB转录因子的互作分析

转录因子通过与下游基因启动子上的顺式作用元件的互作调控目标基因的表达,引起一系列的应答反应,从而增强植物的抗逆能力。在我们前期的研究中,通过酵母单杂交技术发现白桦的BplMYB46转录因子能够与一个核心序列为"TGTCGC"的顺式作用元件结合。在本研究中,"TGTCGC"顺式作用元件的每个碱基分别被突变后构建到表达载体pHIS2中,然后利用酵母单杂交技术与BplMYB46转录因子进行互作分析,结果显示,当"TGTCGC"的核心序列的第二个碱基为G/A、第六个碱基为C/G时,酵母单菌落能在三缺培养基TDO/3AT上生长,表明与BplMYB46转录因子结合的顺式作用元件的特异性序列为T (G/A) TCG(C/G)。本研究为后续通过BplMYB46转录因子与这个顺式作用元件的结合,来分析BplMYB46转录因子与下游基因的调控以及为筛选优良下游基因改良白桦的遗传性状提供数据基础。