低渗培养对LLC-PK1细胞pICln蛋白分布的影响

目的探讨低渗条件下LLC-PK1细胞pIC ln蛋白的分布变化。方法分别用等渗和50%低渗培养基对LLC-PK1细胞进行培养,用抗pIC ln血清抗体对细胞可溶性和不溶性成分的pIC ln进行W estern b lot检测,同时进行细胞的荧光抗体染色。结果W estern b lot显示等渗培养时LLC-PK1细胞可溶性成分中pIC ln免疫反应带的密度为(51±3)%;50%低渗培养时明显增多到(69±3)%,两者比较有统计学意义(P<0.01)。荧光抗体染色也显示了pIC ln在胞质中明显增多。结论pIC ln对低渗是敏感的,它可能作为胞质调节蛋白、低渗时在胞质中分布增多能促进胞内渗透性物质的运出,参与调节细胞体积而对抗低渗。

pICln蛋白在不同细胞中的分布

目的检测pICln蛋白在不同细胞中的分布。方法制备抗pICln蛋白的合成肽血清,并用Western blot对E1等细胞pICln蛋白的表达及猪和大鼠肾脏细胞中pICln蛋白的分布进行检测。结果E1等8种细胞均在相对分子质量约40000的位置出现免疫反应带。猪肾脏pICln主要分布在可溶性胞质中,大鼠肾脏pICln蛋白主要分布在不溶性的膜结构中。结论pICln蛋白在组织、细胞中普遍表达,为其实施某种功能作用奠定基础。

pICln蛋白与低渗透压关系的初步研究

目的 :初步探讨pICln在低渗透压下的作用和变化。方法 :低渗处理pICln表达的大肠杆菌及LLC PK1细胞 ,测定大肠杆菌培养物的光密度及pICln在LLC PK1细胞的胞质及膜两相的分布。结果 :pICln表达的大肠杆菌的繁殖率明显高于对照组 ;低渗培养时LLC PK1细胞的pICln在胞质中明显增加。结论 :pICln具有抗肿胀、保护细胞的作用 ,它可能作为胞质调节蛋白来对抗低渗。

pICln蛋白单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备特异性的抗pICln蛋白的单克隆抗体(McAb),为pICln的纯化及检测等提供必要的工具。方法:以pICln的合成肽为免疫原,对BALB/c小鼠注射免疫,将免疫鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,用显微镜下挑选单个克隆的克隆化方法克隆化,用间接ELISA检测法进行筛选。单抗的效价、亚型及特异性用ELISA、免疫双向扩散实验和Western blot等检测。结果:获得了稳定的分泌型杂交瘤细胞株大2B7和4A3,2B7培养上清液单抗效价为1∶64,属IgG1亚型,其腹水抗体效价及纯化抗体的效价分别为1∶1.28×104、1∶6.4×103,Western blot及免疫耗竭实验呈现一条约40kD的特异性带,免疫组织化学染色显示在细胞核和细胞质中呈现阳性反应。结论:本次制备的单抗具有特异性、高效价,可应用于pICln蛋白的纯化及检测等研究。

pIc_(ln)肽段抗体对猪肾脏细胞pIc_(ln)分布的检测

ｐＩｃｌｎ是与Ｃｌˉ电流密切相关、对核苷酸（ｎ）敏感的蛋白质，它在调节细胞体积方面发挥重要的作用。我国尚未开展其研究。我们在制备ｐＩｃｌｎ肽段抗体的基础上检测了猪肾脏细胞ｐＩｃｌｎ的分布。１材料与方法１１主要试剂与仪器肽合成试剂、合成仪等（ＰＥ公司...

关于冷轧不锈钢碱洗与酸洗工艺探讨

冷轧不锈钢碱、酸洗工艺主要取决于碱酸溶液组成成份、温度、时间。最佳的工艺生产出最好的不锈钢。