抗心肌肥大多肽GCIP表达载体的构建

目的 化学合成DNA片段后利用基因工程技术 ,克隆入含有T7启动子的原核表达质粒。方法 采用分二段化学合成G蛋白竞争性抑制肽 (G proteincompetedinhibitionofpeptide ,GCIP)基因的方法 ,酶切后先定向克隆到pEGFP N1质粒中 ,再用XhoⅠ和SmaⅠ切下含完整基因的片段 ,插入XhoⅠ和SmaⅠ处理的pIVEX2 3 MCS质粒 ,构建能在EcoliBL2 1(DE3 )pLysE和RTS5 0 0系统中表达的质粒。经转化DH5α大肠杆菌 ,筛选出阳性转化子 ,并用酶切及测序鉴定。结果通过基因工程技术 ,构建了pIVEX2 3MCS GCIP表达质粒 ,经测序鉴定结果与设计的完全相符。

Gq蛋白竟争性抑制肽GCIP-27质粒载体的构建及表达

目的化学合成寡核苷酸片段克隆入pIVEX2.3质粒中,构建GCIP-27的原核表达载体并进行原核表达。方法化学合成GCIP-27的全基因序列,定向克隆到pIVEX2.3质粒中构建含有T7启动子的pIVEX2.3-GCIP27原核表达载体并酶切及测序鉴定;pIVEX2.3-GCIP27质粒转染E coli BL21(DE3)pLysE细菌,用IPTG诱导GCIP-27多肽的表达。结果成功构建了pIVEX2.3-GCIP27表达质粒,经测序鉴定结果与设计的完全相符;成功用BL21细菌表达了GCIP-27多肽,GCIP-27占细菌总蛋白的4.96%。结论本实验构建并表达了GCIP-27的重组质粒,为GCIP-27的大量原核表达奠定了基础。