用于生产L－苯丙氨酸的基因工程菌的构建

本文报道用含ｔｙｒＢ基因（在大肠杆菌中编码芳香族氨基酸转氨酶）的质粒ｐＫＢ７转化不同的突主菌，筛选出ＣＴＢ２菌（ｐＫＢ７转化ＪＭ１０７得到）表达的芳香族氨基酸转氨酶活力最高。进一步研究证明ＣＴＢ２菌在菌浓度为２０ｍｇ／ｍｌ，温度３０℃，反就６０分钟．能催化苯丙酮酸加氨生成大量的Ｌ－苯内氮酸，而没有付产物酪氨酸生戊。以从ＣＴＢ２菌中提取纯化出的质粒为模板，经ＰＣＲ扩增反应可以得到约长１．２ｋｂ的ｔｙｒＢ基因片段，ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳实验表明ＣＴＢ２菌可溶性蛋白在分子量约４００００，有一条明显加深的蛋白区带，这与理论估算的芳香族氨基酸转氨酶的分子量４３０００基本一致。而ＪＭ１０７和含ｐＫＫ２３３－２空质粒的ＪＭ１０７在该位点的区带则没有加深，该加深区带的蛋白含量占到总溶性蛋白的２０％左右。