IL-4RA基因转染对哮喘模型气道STAT6的干预作用

目的:观察呼吸道转染IL-4RA基因对哮喘模型气道STAT6的干预作用。方法:BALB/c小鼠被随机分为五组,空白对照组、哮喘模型组、空载体干预组、激素治疗组、目的基因干预组。除空白对照组外其他各组小鼠在试验第1天和第7天和第14天通过腹腔注射0.2ml混有40mg氢氧化铝和10μg OVA的pH7.4 PBS致敏,空载体干预组和基因干预组在试验第12天连续给药三天,激素治疗组在激发的同时给予激素雾化吸入一周,在试验第15天用5%的OVA对小鼠进行雾化激发,连续一周。在最后一次激发后24小时放血杀死小鼠,检测血浆IgE水平和血中嗜酸细胞计数,留取肺组织标本做进一步的分析:肺组织用10%的甲醛固定,通过免疫组化的方法对STAT6的表达进行检测。结果:逆转录病毒载体携带目的基因IL-4RA成功地整合到了宿主基因组中,通过逆转录病毒转染的IL-4RA的基因高表达成功地阻止在哮喘模型鼠气道由IL-4和IL-13诱发的气道嗜酸细胞浸润,另外,逆转录病毒介导的IL-4RA在气道的表达明显地阻止了哮喘相关的气道STAT6水平,因此基因治疗可能会成为治疗慢性哮喘气道炎症和哮喘症状的极有潜力的药物。结论:IL-4RA基因转染阻止了哮喘模型气道STAT6的产生。

儿童免疫性血小板减少症IL-27、CD4^+CD45RA^+T及CD4^+CD45RO^+T细胞变化

目的检测免疫性血小板减少症患儿外周血细胞因子IL-27、CD4^+T细胞表面抗原CD45RA和CD45RO表达的变化,探讨其在ITP发病过程中的作用。方法新诊断ITP患儿35例,正常体检儿童35例作为对照,ELISA法检测血清IL-27水平、流式细胞术法检测外周血CD4^+T细胞CD45RA和CD45RO的表达率,采用t检验、直线相关分析进行比较。结果血清IL-27浓度ITP组(195.35±70.30)ng/L,对照组(301.25±125.40)ng/L,差异有统计学意义(P<0.01);CD4^+CD45RA+T细胞表达率ITP组(26.34±5.58)%,对照组(30.56±5.35)%;CD4^+CD45RO^+T细胞表达率ITP组(55.12±7.85)%,对照组(48.45±6.74)%,差异均有统计学意义(P<0.01);血清IL-27水平与外周血小板计数无相关性(r=0.202,P=0.575)。结论 IL-27、CD4^+CD45RA+T细胞和CD4^+CD45RO^+T细胞介导的细胞免疫异常可能参与了ITP发病。

IL-1RA对急性排斥期大鼠角膜移植物TRAIL及其受体DR_4表达的影响

目的研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1RA)对急性排斥期角膜移植物肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其死亡受体-4(DR4)表达的影响。方法建立大鼠同种异体穿透角膜移植模型,设生理盐水处理组和IL-1RA治疗组。免疫组织化学法检测急性排斥期角膜植片TRAIL及DR4表达,并以正常大鼠角膜作对照。结果TRAIL及DR4在正常角膜均有表达,主要分布于上皮层。急性排斥期角膜植片各层TRAIL及DR4 表达均增高;与IL 1RA治疗组相比,生理盐水处理组TRAIL及DR4表达增高更明显。结论TRAIL及DR4的表达参与角膜移植免疫排斥反应的发生,IL-1RA可通过调节其表达抑制角膜移植免疫排斥反应。

rhIL-1Ra抑制大鼠颞下颌关节骨关节炎软骨破坏的研究

目的:探讨关节腔内注射重组人IL-1Ra对实验性大鼠颞下颌关节炎软骨关节修复的影响。方法:取SD大鼠24只,用关节腔内注射Ⅱ型胶原酶法建立双侧颞下颌关节骨关节炎模型,1周后,右侧(实验侧)关节腔内一次性注射重组人IL-1Ra5μg(稀释于0.05 ml生理盐水),左侧(对照侧)注射等量生理盐水。建模后2周、4周各处死12只动物,取颞下颌关节标本进行HE染色、免疫组化染色及RT-PCR检测,用Mankin评分方法评估TMJ组织病理变化程度。另取1只SD大鼠用作空白对照,2周后处死。结果:2周时双侧颞下颌关节软骨均呈现不同程度的关节病损,实验侧和对照侧Mankin计分分别为1.33±0.52和2.00±6.63(P>0.05)。4周时,实验侧改良和对照侧Mankin评分分别为3.00±0.63和6.50±0.84(P<0.05),ADAMTS-4、5的蛋白及mRNA表达也低于对照侧(P<0.05)。结论:颞下颌关节腔内注射重组人IL-1Ra能缓解骨关节炎导致的软骨病损,其治疗机制可能是通过抑制ADAMTS-4、5的表达来实现的。

IL-4变异体表达载体的构建及其在真核细胞BHK-21的表达

目的:构建具有拮抗IL-4作用的IL-4变异体(IL-4RA)的真核表达载体,并通过真核细胞表达变异蛋白。方法:设计突变引物,从小鼠的PBMC细胞提取总RNA,RT-PCR方法扩增目的片断,将该片断构建在真核表达载体上,并在真核细胞BHK-21中表达,通过Elisa方法检测IL-4变异体蛋白的表达。结果:通过测序分析及限制性酶切鉴定,采用RT-PCR成功的完成了IL-4RA的扩增和表达载体的构建,重组载体转染真核细胞后在上清中检测到IL-4RA的表达。结论:经构建含有目的基因(IL-4RA)的逆转录病毒载体,能够成功的在真核细胞BHK-21中表达出IL-4RA。

过敏性紫瘢患儿血清IL-13R2a与(IL)-4,-6,-8及TNF-a的相关性及其临床意义分析

目的:探讨过敏性紫瘢(HSP)患儿血清IL-13Ra2与白细胞介素(IL)-4,-6,-8及肿瘤坏死因子-a(TNF-a)的相关性及其临床意义.方法:选择2016年4月-2018年3月治疗的过敏性紫瘢患者89例设为观察组;选择同期健康体检者52例,设为对照组;采用双抗体夹心ELISA测定两组血清IL-13Ra2与(IL)-4,-6,-8及TNF-a水平;采用SPSS Pearson相关性分析软件对HSP患儿血清IL- 13Ra2与(IL)-4,-6,-8及TNF-a进行相关性分析.结果:观察组过敏性紫瘢患儿血清IL-13Ra2与IL-4,-6,-8及TNF-a水平,均高于对照组(P<0.05);观察组过敏性紫瘢患儿中27例发生肾损害,62例患儿未发生肾损害.肾损害患儿血清IL-13Ra2与IL-4,-6,-8及TNF-a水平,均高于非肾损害患儿(P<0.05);SPSS Pearson相关性分析结果表明:HSP患儿血清IL-13Ra2与(IL)-4,-6,-8及TNF-a均呈正相关性(P<0.05).结论:过敏性紫瘢患儿血清IL-13Ra2呈高衰达,能参与疾病的发生、发展,且与(IL)-4,-6,-8及TNF-a存在相关性,能为临床诊疗提供依据和参考.

高滴度的含有目的基因IL-4RA的逆转录病毒的包装和浓缩

目的构建具有高效转染率且含有标记基因的携带白介素4受体拮抗剂(IL-4RA)基因的重组逆转录病毒载体pLNC-IL-4RA。方法将IL-4RA基因插入pLNC-Laz逆转录病毒载体获得重组的逆转录病毒表达载体pLNC-IL-4RA,重组的逆转录病毒表达载体pLNC-IL-4RA通过质脂体转染PA317细胞进行包装,PA317抗性克隆经过G418的抗性筛选产生并扩增,将含有病毒的PA317细胞培养液上清收集后转染NIH3T3细胞进行病毒滴度的测定。结果扩增后的G418抗性克隆经过检测和滴度测定结果显示含有目的基因的逆转录病毒最高的病毒滴度为1×104CFU/mL。选择含有最高病毒滴度的PA317细胞抗性克隆进行基因组的提取和鉴定,结果显示目的基因IL-4RA成功地整合到了宿主的基因组中。结论含有目的基因IL-4RA的逆转录病毒载体经过PA317细胞包装后获得了较高的病毒滴度,为下一步哮喘模型的基因治疗打下了基础。

IL-4RA基因转染对哮喘模型的干预性作用研究

目的IL-4RA基因转染对哮喘模型过敏性炎症的干预性研究。方法选择雌性BALB／c小鼠作为动物模型，随机分为5组（每组10只）：空白对照组、哮喘模型组、空载体（10^4CFU/ml pLNC-laz）干预组、激素治疗组、目的基因（10^4CFU/ml pLNC-IL-4RA）干预组。各组在最后一次激发后24h放血杀死小鼠，检测血中嗜酸性粒细胞（eosinophils，EOS）计数，用ELISA检测支气管肺泡灌洗液（broncho alveolar lavage fluid，BALF）中的各种细胞因子水平，并对BALF中各种炎症细胞计数，肺组织切片做HE染色。结果哮喘模型鼠BALF中有大量嗜酸性粒细胞浸润，肺组织病理切片可见大量炎症细胞浸润、杯状细胞增生、黏膜壁破坏。哮喘模型的这些改变在激素和基因干预后明显减轻，差异有统计学意义（P〈0．01），而在空载体干预后则无明显的变化（P〉0．05）。空白对照组的BALF中IL-5、IL-13低于检测水平，哮喘模型组BALF中IL-5、IL-13水平明显增高，而基因治疗组和激素治疗组IL-5、IL-13水平明显减少，差异有统计学意义（P〈0．01），空载体干预组BALF中细胞因子水平与哮喘模型组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论通过逆转录病毒转染的IL-4RA的基因高表达成功地阻止在哮喘模型鼠气道由Ⅱ，4和IL-13诱发的气道嗜酸性粒细胞浸润，另外，逆转录病毒介导的IL-4RA在气道的表达明显地阻止了哮喘模型气道黏液的分泌，同时也减少了过敏性哮喘相关的TH2细胞因子水平，因此，基因治疗可能会成为治疗慢性哮喘气道炎症和哮喘症状的极有潜力的药物。

基于PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴对NLRP3炎症小体的负调控研究白头翁汤正丁醇提取物治疗外阴阴道念珠菌病的作用机制

该研究旨在从PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控NLRP3炎症小体的角度探讨白头翁汤正丁醇提取物(n-butanol alcohol extract of Baitouweng Decoction,BAEB)治疗外阴阴道念珠菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)小鼠的作用机制。实验中,将雌性C57BL/6小鼠分为6组,分别为空白对照组,VVC模型组,BAEB高、中、低剂量组(80、40、20 mg·kg^(-1))和氟康唑组(20 mg·kg^(-1)),除空白对照外,其余各组利用雌激素依赖性的方法构建VVC小鼠模型,模型构建成功后,空白对照组不作处理,BAEB高、中、低剂量组分别给予80、40、20 mg·kg^(-1)BAEB治疗,氟康唑组给予20 mg·kg^(-1)氟康唑治疗,VVC模型组则灌胃等量的生理盐水。每日观察各组小鼠的一般状态和体质量;革兰染色观察小鼠阴道灌洗液中白念珠菌形态的变化;微量稀释法检测小鼠阴道分泌物的真菌载量,处死小鼠后,巴氏染色法检测阴道灌洗液中中性粒细胞的浸润程度,enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA)法检测阴道灌洗液中炎症因子interleukin(IL)-1β、IL-18以及lactate dehydrogenase(LDH)的含量;hematoxylin-eosin(HE)染色进行阴道组织病理学分析;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测阴道组织中NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra的表达和分布;免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测阴道组织中pNLRC4、IL-1Ra的表达与分布,免疫印迹(Western blot,WB)检测阴道组织中NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra的蛋白表达;qRT-PCR检测NLRP3、PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra mRNA的表达。结果显示,与空白对照组比较,VVC模型组小鼠阴道出现红肿以及白色分泌物,与VVC模型组比较,BAEB能改善VVC小鼠的一般状态。革兰染色、巴氏染色、微量稀释法以及HE染色结果显示,与空白对照组比较,阴道灌洗液中分布有大量菌丝且有大量中性粒细胞浸润,阴道灌洗液中真菌载荷显著增加,阴道组织黏膜被破坏且有大量炎性细胞浸润,BAEB可减少白念珠菌菌丝形成,BAEB中、高剂量组可显著减少中性粒细胞的浸润以及真菌载荷,BAEB低、中剂量组可减轻阴道组织的损伤,而BAEB高剂量组可将损伤的阴道组织恢复至正常水平。ELISA结果显示,与空白对照组比较,炎症因子IL-1β、IL-18、LDH的含量显著增加,与VVC模型组比较,BAEB中、高剂量组可显著减少IL-1β、IL-18以及LDH的含量。WB和PCR结果显示,与空白对照组比较,VVC模型组小鼠阴道组织中PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra蛋白和mRNA表达显著降低,而NLRP3的蛋白和mRNA表达显著上升;与VVC模型组比较,BAEB中、高剂量组可上调阴道组织中PKCδ、pNLRC4、IL-1Ra蛋白和mRNA表达,抑制阴道组织中NLRP3蛋白和mRNA表达。该研究表明,BAEB对于VVC小鼠的治疗作用可能与促进PKCδ/NLRC4/IL-1Ra轴负调控NLRP3炎症小体有关。

三乌芍蝎汤对类风湿关节炎患者细胞因子IL-18,TNF-α,IL-4,IL-10水平的影响

目的:探讨中药三乌芍蝎汤治疗类风湿性关节炎(RA)外周血细胞因子(CK)的变化。方法:随机选择RA病人63例,其中治疗组41例以三乌芍蝎汤1剂/每天,分2次口服。对照组22例,予雷公藤多苷20 mg/次,每天3次;2组均连续服用60 d。同时观察药物对患者外周血细胞因子IL-6,TNF-α,IL-4,IL-10的影响。结果:临床疗效、实验室指标治疗组明显高于对照(P<0.01,P<0.05);治疗组外周血4种细胞因子治疗前后自身比较,均有显著性意义(P<0.05,P<0.01)。与对照组比,治疗后IL-4,IL-10明显上调,有非常显著性意义(P<0.01)。结论:三乌芍蝎汤治疗RA,能调节外周血异常细胞因子,明显改善病人临床症状和实验室指标。

Retrovirus-mediated delivery of an IL-4 receptor antagonist inhibits allergic responses in a murine model of asthma

This work reports the investigation of the effect of airway IL-4RA gene transfer by a recombinant retroviral vector on airway inflammation and airway responsiveness in asthmatic mice. The retrovirus-mediated delivery of IL-4RA to the airways of mice inhibited elevations of airway responsiveness and the development of allergic inflammation in asthmatic mice, and regulated the Th1/Th2 balance in OVA-sensitized and -challenged mouse models. This suggests that gene therapy is a therapeutic option for treating and controlling chronic airway inflammation and asthma symptoms.

逆转录病毒介导的基因转染对哮喘模型炎症机制的抑制作用

观察呼吸道局部由逆转录病毒介导的IL-4RA(IL-4受体拮抗剂)基因转染对哮喘模型过敏性炎症以及气道高反应性的干预作用.BALB/c小鼠被随机分为5组(每个实验每组10只):空白对照组、哮喘模型组、激素治疗组、目的基因(1×104CFU/mLpLNC-IL-4RA)干预组和空载体(1×104CFU/mLpLNC-laz)干预组.各组在最后一次激发后24h进行气道高反应性的检测,之后放血杀死小鼠,检测血中嗜酸性粒细胞计数以及OVA(鸡卵白蛋白)特异性IgE,用ELISA方法检测BALF(支气管肺泡灌洗液)中的各种细胞因子水平并对BALF中各种炎症细胞计数并分类,肺组织切片HE染色.用免疫组化的方法检测STAT6(信息传递与转录活化因子,signal transducers and activators of transcription 6)的表达情况.转染有IL-4RA基因的哮喘模型鼠肺组织进行PCR扩增观察IL-4RA基因在宿主基因组的整合情况.结果显示,IL-4RA基因转染明显减轻了哮喘模型的气道高反应性,另外哮喘模型鼠BALF和血中有大量嗜酸细胞,肺组织病理切片可见大量炎症细胞浸润,哮喘模型的这些改变在激素和pLNC-IL-4RA干预后明显减轻,统计学分析有显著差异(P<0.01).激素和pLNC-IL-4RA干预后同时也明显减轻了哮喘模型组BALF中IL-5,IL-13的水平,差异有显著性(P<0.01),哮喘模型组STAT6的表达较空白对照组明显增多,而在激素和pLNC-IL-4RA干预后表达明显减少.结果提示,通过逆转录病毒转染的IL-4RA的基因高表达明显减轻了哮喘模型的气道高反应性、成功地阻止在哮喘模型鼠过敏性炎症以及气道炎症细胞浸润,调整了免疫失衡,因此基因治疗可能会成为治疗慢性哮喘气道炎症和哮喘症状的极有潜力的药物.