小鼠免疫共刺激信号B7-1和B7-2联合表达载体的构建及包装

目的构建含小鼠B7-1和B7-2基因的双表达载体pLXSN-mB7-1-IRES-mB7-2,并包装到PA317细胞中。方法1将EcoRI和BamHI酶切下来的pMD18-mB7-2质粒上的mB7-2基因片段克隆到含有IRES片段的MINV质粒上,得到MINV-IRES-mB7-2载体;2MunI酶切载体MINV-IRES-mB7-2,末端钝化,然后BamHI再酶切,得到含钝末端和BamHI粘末端的IRES-mB7-2基因片段;3XhoI酶切质粒pLXSN-mB7-1,末端钝化,然后BamHI再酶切,形成含钝末端和BamHI粘末端的开环pLXSN-mB7-1质粒,将IRES-mB7-2基因片段插入其中,得到pLXSN-mB7-1-IRES-mB7-2双表达载体;并PA317细胞包装,PCR和电镜鉴定。结果经酶切、PCR、测序等鉴定载体构建成功,并包装到PA317细胞内。结论成功得到了双表达载体pLXSN-mB7-1-IRES-mB7-2和包装后的PA317/mB7-1-mB7-2细胞。

促性腺激素释放激素类似物对人乳腺癌细胞的影响

目的:探讨促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)类似物曲普瑞林(triptorelin)对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231细胞生长及细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)和磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)信号通路中重要信号分子ERK1/2和Akt活化的影响。方法:使用不同浓度、不同时间的曲普瑞林刺激人乳腺癌MCF-7及MDA-MB-231细胞株,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期的分布,Western blotting检测Akt和ERK1/2的磷酸化程度。结果:曲普瑞林(10-5mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞192 h、曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7细胞168 h、192 h或曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞192 h可明显抑制细胞生长(P<0.05);曲普瑞林(10-4mol/L)作用人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞192 h,ERK1/2的磷酸化程度均较正常对照组低,Akt的磷酸化程度较正常对照组高,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:GnRH类似物曲普瑞林对人乳腺癌细胞的抑制作用,不仅仅是通过对垂体激素的降调节机制,还可能产生直接抑制作用。但该抑制作用未涉及ERK/MAPK和PI3K/Akt信号通路。