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新型真核表达质粒pcDNA6/myc-his-EGFP B的构建及其在重组基因表达中的应用(英文)
被引量:
3
1
作者
李新建
曹以诚
+3 位作者
杜正平
杨化强
张珍武
卓敏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期22-28,共7页
增强型绿色荧光蛋白(EGFP, enhanced green fluorescent protein)、myc抗原和6×His已在众多真核表达载体中用作重组蛋白的表达标记,EGFP能发出的绿色荧光,myc抗原能用相应的抗体检测,6×His能被相应的树脂特异吸附。但目前为止...
增强型绿色荧光蛋白(EGFP, enhanced green fluorescent protein)、myc抗原和6×His已在众多真核表达载体中用作重组蛋白的表达标记,EGFP能发出的绿色荧光,myc抗原能用相应的抗体检测,6×His能被相应的树脂特异吸附。但目前为止,没有一个质粒表达载体能够同时整合三者的功能。本研究构建了一个能够同时整合EGFP、myc抗原和6×His功能的新型真核质粒表达载体,我们将其命名为pcDNA6/myc-his-EGFP B。值得注意的是,为确保目的基因与EGFP基因融合表达后,融合表达产物各组成部分能够保持原有的生物活性,我们运用LINKER程序在EGFP基因的5’端设计了一段编码八肽的连接DNA序列。将一段含有人白细胞介素2(IL-2, humaninterleukin 2)信号肽编码序列的基因亚克隆进pcDNA6/myc-his-EGFP B的多克隆位点中,使之与EGFP、myc抗原和6×His融合表达,构建成质粒pMHES。用pcDNA6/myc-his-EGFP B和pMHES转染2.2.15细胞,48h后成功观察到绿色荧光;用pcDNA6/myc-his-EGFP B尾静脉注射Balb/c小鼠,8h后在小鼠肝脏冰冻切片中同样观察到绿色荧光。用同源建模软件Modeller8V2模拟IL-2与EGFP、myc抗原和6×His融合表达产物的三维结构,结果表明:IL-2、EGFP、myc和6×His各部分互不干扰,连接八肽具有一定的柔性。以上结果表明pcDNA6/myc-his-EGFP B可望作为外源基因在哺乳动物细胞中表达研究和基因治疗的新型载体。
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关键词
真核表达质粒
pmhes
EGFP
MYC
6×His
蛋白质三维结构模拟
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职称材料
题名
新型真核表达质粒pcDNA6/myc-his-EGFP B的构建及其在重组基因表达中的应用(英文)
被引量:
3
1
作者
李新建
曹以诚
杜正平
杨化强
张珍武
卓敏
机构
华南理工大学生物科学与工程学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期22-28,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(90412015)~~
文摘
增强型绿色荧光蛋白(EGFP, enhanced green fluorescent protein)、myc抗原和6×His已在众多真核表达载体中用作重组蛋白的表达标记,EGFP能发出的绿色荧光,myc抗原能用相应的抗体检测,6×His能被相应的树脂特异吸附。但目前为止,没有一个质粒表达载体能够同时整合三者的功能。本研究构建了一个能够同时整合EGFP、myc抗原和6×His功能的新型真核质粒表达载体,我们将其命名为pcDNA6/myc-his-EGFP B。值得注意的是,为确保目的基因与EGFP基因融合表达后,融合表达产物各组成部分能够保持原有的生物活性,我们运用LINKER程序在EGFP基因的5’端设计了一段编码八肽的连接DNA序列。将一段含有人白细胞介素2(IL-2, humaninterleukin 2)信号肽编码序列的基因亚克隆进pcDNA6/myc-his-EGFP B的多克隆位点中,使之与EGFP、myc抗原和6×His融合表达,构建成质粒pMHES。用pcDNA6/myc-his-EGFP B和pMHES转染2.2.15细胞,48h后成功观察到绿色荧光;用pcDNA6/myc-his-EGFP B尾静脉注射Balb/c小鼠,8h后在小鼠肝脏冰冻切片中同样观察到绿色荧光。用同源建模软件Modeller8V2模拟IL-2与EGFP、myc抗原和6×His融合表达产物的三维结构,结果表明:IL-2、EGFP、myc和6×His各部分互不干扰,连接八肽具有一定的柔性。以上结果表明pcDNA6/myc-his-EGFP B可望作为外源基因在哺乳动物细胞中表达研究和基因治疗的新型载体。
关键词
真核表达质粒
pmhes
EGFP
MYC
6×His
蛋白质三维结构模拟
Keywords
Eukaryotic expression plasmid
pmhes
EGFP myc 6 × His Protein 3 -D structure simulation
分类号
Q819 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
新型真核表达质粒pcDNA6/myc-his-EGFP B的构建及其在重组基因表达中的应用(英文)
李新建
曹以诚
杜正平
杨化强
张珍武
卓敏
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006
3
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职称材料
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参考文献
引证文献
统计分析
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