抗菌肽Spinigerin基因真核表达载体的构建

采用毕赤酵母偏爱原则,人工设计合成抗菌肽Spinigerin基因。按正确的阅读框架定向克隆至真核表达载体pPICZαA,经PCR鉴定及序列分析,所转化的毕赤酵母GS115中含有Spinigerin插入基因的重组质粒pPICZαA-S,结果表明成功构建了抗菌肽Spinigerin基因真核表达载体pPICZαA-S。

抗菌肽Spinigerin α基因定点突变体的构建

通过对Spinigerin α抗菌肽的结构分析,结合抗菌肽的抗菌机理,根据毕赤酵母的偏爱密码子对该抗菌肽进行定点突变。将亲水性氮端的碱性赖氨酸分别突变为碱性更强的精氨酸、酸性的天冬氨酸以及中性的丙氨酸,将疏水性碳端的中性亮氨酸突变成碱性的精氨酸、酸性的天冬氨酸。将定点突变后的Spinigerin α基因按正确阅读框克隆至穿梭质粒pPICZ α-A上,经PCR鉴定、序列分析,所转化的宿主酵母GS115中含有该突变体,结果表明已成功构建了抗菌肽Spinigerin α基因的突变体,为获得高效的抗菌效果的抗菌肽奠定一定的基础。