根癌农杆菌感受态细胞的制备以及质粒ProkⅡ对其转化的研究

研究了根癌农杆菌LBA4404和C48C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒ProkⅡ转化的影响。结果表明，以70mmo／LCaCl2作为转化溶液，YEB培养基制备的、OD600为0．5的LBA4404感受态细胞与10ng质粒DNA，于0℃共放置30min，液氮速冻5min，37℃热激5min时转化率最高，达1．40×10^5μg^-1；以70mmo／LCaCl2作为转化溶液，YEB培养基制备的、OD600s为0．5～0．6的C58C1感受态细胞与20ng质粒DNA，于0℃共放置10min，液氮速冻1min，37℃热激1min时转化率最高，达1．33×10^5μg^-1。

一种快速构建35S组成型植物双价表达载体的方法

通过对几种常用植物表达载体的35S和Tnos序列进行比对,设计带有酶切位点的引物35S和Tnos,通过PCR克隆了同时带有35S和Tnos序列的目的基因片段,通过定向的酶切、连接获得双价表达载体。此方法简化了植物双价表达载体构建过程,具有明显时间短、效率高、不需要中间载体、检测简单等特点,而且引物对于多数常用35S组成型植物表达载体是通用的,为快速构建35S组成型植物双价表达载体提供了一种新方法。